11456

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ МЕТАБОЛИТОВ МОНООКСИДА АЗОТА (НИТРИТОВ) В СЛЮНЕ

Лабораторная работа

Химия и фармакология

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА Определение содержания метаболитов монооксида азота нитритов в слюне НитрогенIIоксид NO это свободный радикал который образуется в организме из аргинина и выполняет роль мессенджера в ряде биологических процессов. Аргинин цитрулин NO ...

Русский

2013-04-08

28.5 KB

8 чел.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

Определение содержания метаболитов монооксида азота (нитритов) в слюне 

Нитроген(II)оксид (NO) - это свободный радикал, который образуется в организме из аргинина и выполняет роль мессенджера в ряде биологических процессов.

Аргинин цитрулин + NO

При метаболизме 80% NO превращается в нитриты или нитраты. Перед определением восстанавливают имеющиеся в среде нитраты до нитритов, используя омеднённый кадмиевый редуктор.

ПРИНЦИП МЕТОДА. Нитриты взаимодействуют с реактивом Грисса (a-нафтиламин и сульфаниловая кислота в соотношении 5:1) при температуре 30ºС с образованием соединений розового цвета. Окрашивание, интенсивность которого определяется на ФЭК, прямо пропорционально концентрации нитритов в слюне. Перед определением восстанавливают имеющиеся в среде нитраты до нитритов, используя омеднённый кадмиевый редуктор.

Реактивы: 1) реактив Грисса (1 % сульфаниламид и 0,1 % нафтилендиамин, разведенные в 12 % уксусной кислоте); 2) стандартный раствор нитрита Na или K.

Объект исследования: смешанная слюна, сыворотка крови.

Ход работы.

К 0,1 мл слюны (или сыворотки крови) прибавляют 0,9 мл дистиллированной воды и 1,0 мл реактива Грисса. Выдерживают в термостате на протяжении 20 мин при температуре 30ºС. Колориметрируют на ФЭК при длине волны 540 нм в кювете
0,5 см против контроля, где вместо слюны (или
сыворотки крови) берут 0,1 мл дистиллированной воды.

Расчет: Расчеты производят с использованием:
1) калибровочной пробы с известной концентрацией нитрита натрия(или калия); или
2) калибровочной кривой, построенной по известным концентрациям нитрита
Na(K) в диапазоне от 0 до 150 мкМ, результаты выражают в мкМ

И(С) = 3,34 · DD мкг в опыте, где

И(С) - концентрация продуктов оксида азота (нитритов) в слюне;

3,34 - коэффициент расчета;

DD - масса нитритов в опыте, в мкг, найденная по калибровочному графику.

Нормы: концентрация нитритов в слюне составляет 2-4 мкг/мл. (график можно построить, используя мкг/мл, тогда результат выражается также в мкг/мл).

Клинико-диагностическое значение

Физиологическая функция NO многогранна. Он является фактором релаксации сосудов и снижения артериального давления. В частности, действие нитроглицерина, виагры, нитропруссида натрия связано с образованием из них монооксида азота, который активирует гуанилатциклазу и через синтез цГМФ вызывает расслабление гладких мышц сосудов. NО принимает участие в ингибировании аггрегации тромбоцитов и фиксации лейкоцитов к эндотелию; выполняет роль медиатора ЦНС (с нарушением обмена нитроген оксида связывают возникновение болезни Альцгеймера); регулирует перистальтику кишечника, эрекцию. Монооксид азота является мощным медиатором воспаления и выделяется в ответ на действие микробов, вирусов, провоспалительных цитокинов. Глюкокортикоиды тормозят активность NO-синтазы и уменьшают синтез NO.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

41246. Проектування сівозмін і обробітку ґрунту в господарстві АТ “Прогрес” розташоване в північно-східному Лісостепу України в Сумському районі Сумської області 1023 KB
  Одним із важливих факторів врожайності сільськогосподарських культур є родючість ґрунту. Тому знання агрохімічного складу ґрунту є дуже важливим у землеробстві. Вони дають змогу зробити висновки щодо забезпечення вирощуваних рослин поживними речовинами, вологою та про рівень кислотності ґрунту
41247. ДЕРЖАВНЕ РЕГУЛЮВАННЯ ТА УПРАВЛІННЯ В ГАЛУЗІ ЕКОЛОГІЧНОЇ ЕКСПЕРТИЗИ 63.5 KB
  Органи державного управління в галузі екологічної експертизи Державне управління в галузі екологічної експертизи здійснюють Кабінет Міністрів України Уряд Автономної Республіки Крим місцеві Ради народних депутатів органи виконавчої влади на місцях Міністерство охорони навколишнього природного середовища та ядерної безпеки України як спеціально уповноважений орган у цій галузі і його органи на місцях а також органи та установи Міністерства охорони здоров'я...
41249. Учет запасов за МСФО 212 KB
  Признание и первоначальная оценка запасов. Общий подход к учету запасов и требования по раскрытию информации о них в финансовой отчетности приведены в МСБУ 2 Запасы. МСБУ 2 также не применяется к оценке запасов удерживаемых: а производителями продукции сельского хозяйства и лесничества сельскохозяйственной продукции после сбора урожая полезных ископаемых и минеральных продуктов в случае когда они оцениваются по чистой стоимости реализации согласно практике существующей в определенных отраслях; б продавцамипосредниками товаров...
41250. Технология литья по выплавляемым моделям. Составляющие литейного модельного комплекта 203 KB
  Литейное производство – отрасль машиностроения, занимающаяся изготовлением фасонных заготовок или деталей путем заливки расплавленного металла в специальную форму, полость которой имеет конфигурацию заготовки (детали).
41251. ПОРЯДОК ПРОВЕДЕННЯ ЕКОЛОГІЧНОЇ ЕКСПЕРТИЗИ 71 KB
  Процедура проведення екологічної експертизи передбачає: перевірку наявності та повноти необхідних матеріалів іреквізитів на об'єкти екологічної експертизи та створення екологоекспертних комісій груп відповідно до вимог законодавствапідготовча стадія; аналітичне опрацювання матеріалів екологічної експертизи вразі необхідності натурні обстеження і проведення на їх основіпорівняльного аналізу і часткових оцінок ступеня екологічної безпеки достатності та ефективності екологічних...
41253. Формне обладнання для виготовлення форм спеціальних видів друку 66.5 KB
  Пневматична установка для натягування трафаретної тканини. Механічні установки для натягування трафаретної тканини. На поверхню ситової тканини наносять фотополімерний прошарок який є основою пробільних елементів. Таким чином для виготовлення трафаретної форми необхідно виконати такі технологічні операції: натягування ситової тканини на трафаретну раму; нанесення емульсійного прошарку на поверхню ситової тканини; експонування ситової трафаретної рами; проявлення промивання і сушка ситової тканини трафаретної рами.
41254. Загальні положення об’ємного (титриметричного) аналізу 70.5 KB
  Класифікація методів обємного аналізу за способом титрування Точність титрування Визначення нормальності робочих титрованих розчинів Обчислення в обємному методі аналізу Сутність і особливості обємного аналізу. Цей процес називають титруванням. Проте необхідно мати на увазі деякі обмеження можливості застосування обємного аналізу: 1 взаємодія повинна іти в певних стехіометричних співвідношеннях; 2 реакції повинні іти швидко інакше титрування здійснювати важко а іноді неможливо. На цій основі обємні методи поділяються на...