11456

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ МЕТАБОЛИТОВ МОНООКСИДА АЗОТА (НИТРИТОВ) В СЛЮНЕ

Лабораторная работа

Химия и фармакология

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА Определение содержания метаболитов монооксида азота нитритов в слюне НитрогенIIоксид NO это свободный радикал который образуется в организме из аргинина и выполняет роль мессенджера в ряде биологических процессов. Аргинин цитрулин NO ...

Русский

2013-04-08

28.5 KB

6 чел.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

Определение содержания метаболитов монооксида азота (нитритов) в слюне 

Нитроген(II)оксид (NO) - это свободный радикал, который образуется в организме из аргинина и выполняет роль мессенджера в ряде биологических процессов.

Аргинин цитрулин + NO

При метаболизме 80% NO превращается в нитриты или нитраты. Перед определением восстанавливают имеющиеся в среде нитраты до нитритов, используя омеднённый кадмиевый редуктор.

ПРИНЦИП МЕТОДА. Нитриты взаимодействуют с реактивом Грисса (a-нафтиламин и сульфаниловая кислота в соотношении 5:1) при температуре 30ºС с образованием соединений розового цвета. Окрашивание, интенсивность которого определяется на ФЭК, прямо пропорционально концентрации нитритов в слюне. Перед определением восстанавливают имеющиеся в среде нитраты до нитритов, используя омеднённый кадмиевый редуктор.

Реактивы: 1) реактив Грисса (1 % сульфаниламид и 0,1 % нафтилендиамин, разведенные в 12 % уксусной кислоте); 2) стандартный раствор нитрита Na или K.

Объект исследования: смешанная слюна, сыворотка крови.

Ход работы.

К 0,1 мл слюны (или сыворотки крови) прибавляют 0,9 мл дистиллированной воды и 1,0 мл реактива Грисса. Выдерживают в термостате на протяжении 20 мин при температуре 30ºС. Колориметрируют на ФЭК при длине волны 540 нм в кювете
0,5 см против контроля, где вместо слюны (или
сыворотки крови) берут 0,1 мл дистиллированной воды.

Расчет: Расчеты производят с использованием:
1) калибровочной пробы с известной концентрацией нитрита натрия(или калия); или
2) калибровочной кривой, построенной по известным концентрациям нитрита
Na(K) в диапазоне от 0 до 150 мкМ, результаты выражают в мкМ

И(С) = 3,34 · DD мкг в опыте, где

И(С) - концентрация продуктов оксида азота (нитритов) в слюне;

3,34 - коэффициент расчета;

DD - масса нитритов в опыте, в мкг, найденная по калибровочному графику.

Нормы: концентрация нитритов в слюне составляет 2-4 мкг/мл. (график можно построить, используя мкг/мл, тогда результат выражается также в мкг/мл).

Клинико-диагностическое значение

Физиологическая функция NO многогранна. Он является фактором релаксации сосудов и снижения артериального давления. В частности, действие нитроглицерина, виагры, нитропруссида натрия связано с образованием из них монооксида азота, который активирует гуанилатциклазу и через синтез цГМФ вызывает расслабление гладких мышц сосудов. NО принимает участие в ингибировании аггрегации тромбоцитов и фиксации лейкоцитов к эндотелию; выполняет роль медиатора ЦНС (с нарушением обмена нитроген оксида связывают возникновение болезни Альцгеймера); регулирует перистальтику кишечника, эрекцию. Монооксид азота является мощным медиатором воспаления и выделяется в ответ на действие микробов, вирусов, провоспалительных цитокинов. Глюкокортикоиды тормозят активность NO-синтазы и уменьшают синтез NO.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

30432. Конституционное устройство острова Тайвань (Китай) 16.3 KB
  Оно не представляет собой постоянно действующий орган а избирается и собирается в каждом случае в течение шести месяцев после принятия Законодательной палатой решения о необходимости конституционной реформы или изменения территории страны либо в течение трех месяцев после решения Законодательной палаты о необходимости отрешить от должности Президента или Вицепрезидента. Досрочная вакансия должности Вицепрезидента замещается на оставшийся срок по предложению Президента решением Законодательной палаты. В случае одновременной вакантности...
30433. Форма правления и государственный режим в Польше, формирование и взаимодействие высших государственных органов 16.28 KB
  Сейм осуществляет контроль за деятельностью Совета Министров и объеме определенном предписаниями Конституции и законов. Совет Кабинета образуется Советом Министров заседающим под председательством Президента Республики. Совету Кабинета не принадлежат полномочия Совета Министров. Совет Министров проводит внутреннюю и внешнюю политику Польской Республики.
30434. Политико-территориальное устройство и организация местной власти в Польше 14.99 KB
  Основной единицей территориального самоуправления является община.Иные единицы регионального или местного и регионального самоуправления определяет закон. Община выполняет все задачи территориального самоуправления не закрепленные за иными единицами территориального самоуправления.Единицы территориального самоуправления являются юридическими лицами.
30435. Особенности конституционного права Бразилии 15.69 KB
  Конституция 1988 г. Композиционно Конституция 1988 г. Помимо упомянутых в общем ставших традиционными в акте встречаются совершенно исключительные права и свободы не получившие еще отражения в конституциях стран Европы. Конституция 1988 г.
30436. Форма правления и государственный режим в Бразилии, формирование и взаимодействие высших государственных органов 15.22 KB
  Акты Президента требуют одобрения обеих палат; если проект не принимается одной из палат то он считается отвергнутым. Если пост Президента становится вакантным или возникают препятствия в исполнении им своих обязанностей то их исполняет вицепрезидент а если названные обстоятельства возникают и в отношении президента и вицепрезидента одновременно то пост главы государства замещается в следующей последовательности председатель Палаты депутатов председатель Федерального сената и председатель Федерального верховного суда. Президента...
30437. Бразильский федерализм и местное самоуправление 15.64 KB
  территориальная структура была несколько реорганизована в частности федеральные территории Рорайма и Амапа обрели статус штатов. 23 установила совместную сферу компетенции Союза штатов и муниципалитетов и федерального округа распределение которой а точнее сотрудничество в которой опятьтаки передано в ведение дополняющего закона. Наконец третья сфера компетенции установленная основным законом конкурирующая компетенция Союза штатов и федерального округа к которой в частности отнесено трудовое исправительное экономическое и...
30438. Конституционное развитие Казахстана 16.32 KB
  Принципиально новыми положениями Конституционного закона стали провозглашение Казахстана независимым демократическим правовым государством а также преобразование Казахской ССР в Республику Казахстан. Закон предусмотрел такой государственный орган как Комитет конституционного надзора призванный обеспечить верховенство Конституции. Начальный этап конституционного развития Республики Казахстан завершился принятием 28 января 1993 г. Практическое применение показало что отдельные вопросы требующие конституционного...
30439. Форма правления и государственный режим в Казахстане, формирование и взаимодействие высших государственных органов 16.15 KB
  2 Конституции республика является государством с президентской формой правления. Однако анализ содержания Конституции в частности системы государственных органов показывает что с точки зрения принятой классификации форм правления Казахстан представляет собой не президентскую а смешанную республику функционирующую по президентскому тину. В Конституции же Казахстана мы находим и возможность хотя и усеченную выражения Парламентом вотума недоверия правительству п. 3 Конституции система сдержек и противовесов последовательного применения не...
30440. Политико-территориальное устройство и организация местной власти в Казахстане 18.2 KB
  и местных исполнительных органов устанавливая что компетенция маслихатов порядок их организации и деятельности правовое положение их депутатов равно как и компетенция и порядок деятельности местных исполнительных органов устанавливаются законом. Такой закон сегодня Закон О местных представительных и исполнительных органах Республики Казахстан от 10 декабря 1993 г. 87 определяет правовые основы организации и деятельности местных органов исполнительной власти. Взаимоотношения местных представительных и исполнительных органов...