11462

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ БИТИРОЗИНА И ОКИСЛЕННОГО ТРИПТОФАНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ

Лабораторная работа

Химия и фармакология

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА ознакомительная Определение содержания битирозина и окисленного триптофана в плазме крови ПРИНЦИП МЕТОДА. Оценку содержания битирозина и окисленного триптофана проводят методом K.J. Davies 1987 в модификации Э.М. Бекмана и cоавторов 2006. В резуль

Русский

2013-04-08

28.5 KB

8 чел.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
(ознакомительная)

Определение содержания битирозина и окисленного триптофана в плазме крови

ПРИНЦИП МЕТОДА. Оценку содержания битирозина и окисленного триптофана проводят методом K.J. Davies (1987) в модификации Э.М. Бекмана и cоавторов (2006). В результате окисления фенилаланина в составе молекул белка образуются орто-, мета-, пара-тирозины, а их одноэлектронное окисление генерирует долгоживущий тирозин-радикал, который при взаимодействии с таким же радикалом образует стабильный к влиянию протеаз битирозин, обладающий характерной голубой флюоресценцией. Окисление триптофановых остатков сопровождается снижением флюоресценции, характерной для триптофана. Битирозин и окисленный триптофан в нативных молекулах, в основном, отсутствуют, поэтому известны как стабильные маркеры окислительной модификации белка.

Реактивы: 1) 0,07 М фосфатный буфер (рН=7,4); 2) раствор Сu4 (до конечной концентрации 1 мМ).

Объект исследования: плазма крови.

Ход работы. В опытную пробу в стерильных условиях добавляют 0,1 мл плазмы, 4,8 мл 0,07 М фосфатного буфера (рН=7,4), для индукции ОМБ добавляют 0,1 мл раствора Сu4 до конечной концентрации 1 мМ. В контрольную пробу кроме плазмы добавляют 4,9 мл 0,07 М фосфатного буфера (рН=7,4). Обе пробы инкубируют 20 ч при 37º С. На спектрофлюориметре регистрируют снижение флюоресценции триптофана при длине волны возбуждения 295 нм и длине волны испускания 325 нм и флюоресценцию образованного битирозина при длине волны возбуждения 325 нм и длине волны испускания 415 нм.

Результаты представляют в условных единицах, стандартизованных на 1 мг белка.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

19720. Иван Сергеевич Тургенев 73.62 KB
  Тургенев Родился в богатой помещтчей семье. Учился в пансионах потом в московском университете потом перешёл в петерб университет в 1838 закончил унив отправился в Германию жил в Берлине слушал лекции учеников Гегеля оттуда увлечение философией Гегеля. Хотел ст...
19721. Русская литература. Билеты к экзамену 828 KB
  Билет №1. Натуральная школа. Н.ш. презрительная кличка брошенная Ф. Булгариным по адресу русской литературной молодежи 40х гг. и затем укоренившаяся в критике той поры уже без какого бы то ни было порицательного оттенка см. напр. Белинский В. Взгляд на русскую литерату
19722. ВСЕ ШЕДЕВРЫ МИРОВОЙ ЛИТЕРАТУРЫ в кратком изложении СЮЖЕТЫ И ХАРАКТЕРЫ Русская Литература XIX ВЕКА 3.81 MB
  ВСЕ ШЕДЕВРЫ МИРОВОЙ ЛИТЕРАТУРЫ в кратком изложении СЮЖЕТЫ И ХАРАКТЕРЫ Русская Литература XIX ВЕКА ОЛИМП ACT МОСКВА 1996 Общая редакция и составление доктора филологических наук Вл. И. Новикова Редактор к. ф. н. Д Р. Кондахсазова Художник В. А. Крючков В 84 Все шеде
19723. Русская литература. Шпаргалка 430 KB
  Герцен родился 25 марта 6 апреля 1812 г. в Москве в семье богатого помещика Ивана Алексеевича Яковлева 1767 1846; мать 16 летняя немка Генриетта Вильгельмина Луиза Гааг дочь мелкого чиновника. Брак родителей не был оформлен и Герцен носил фамилию придуманную отцом: Герцен ...
19724. АНАТОМИЯ 218 KB
  АНАТОМИЯ 1. ТЕРМИНОЛОГИЯ Для описания строения и расположения органов их взаимосвязи и т.д. принято применять некоторые специальные анатомические термины. Определение положения органа или его частей принято обозначать терминами: латеральный медиальный ...
19725. Паразитология 273.5 KB
  ТЕРМИНОЛОГИЯ Паразит это организм который определённую часть или всю жизнь живёт в/на теле хозяина причиняя ему ущерб. Организмы которые живут внутри тела хозяина называются эндопаразитами. К ним относятся: кишечные тканевые полостные паразиты. ...
19726. ТОКСИКОЛОГИЯ. Первая помощь 180 KB
  ТОКСИКОЛОГИЯ Классификация токсинов. По происхождению: биотоксины яды растений животных бактериальные токсины микотоксины и др. пестициды инсектициды гербициды и др. промышленные яды используемые в производстве химреагенты органические раствор
19727. ВИДЫ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 619.5 KB
  ВИДЫ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Исследование системы кроветворения и кровообращения: общий клинический анализ крови миелограмма определение совместимости донорской крови определение групп крови Биохимия Исследование кала и сис...
19728. ИММУНИТЕТ. ИНФЕКЦИЯ, ИНФЕКЦИОННЫЙ ПРОЦЕСС 372.5 KB
  ИММУНИТЕТ Иммунитет это способ защиты организма от генетически чужеродных веществ антигенов экзогенного и эндогенного происхождения направленный на поддержание и сохранение гомеостаза структурной и функциональной целостности организма биологической антиген...