11462

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ БИТИРОЗИНА И ОКИСЛЕННОГО ТРИПТОФАНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ

Лабораторная работа

Химия и фармакология

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА ознакомительная Определение содержания битирозина и окисленного триптофана в плазме крови ПРИНЦИП МЕТОДА. Оценку содержания битирозина и окисленного триптофана проводят методом K.J. Davies 1987 в модификации Э.М. Бекмана и cоавторов 2006. В резуль

Русский

2013-04-08

28.5 KB

8 чел.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
(ознакомительная)

Определение содержания битирозина и окисленного триптофана в плазме крови

ПРИНЦИП МЕТОДА. Оценку содержания битирозина и окисленного триптофана проводят методом K.J. Davies (1987) в модификации Э.М. Бекмана и cоавторов (2006). В результате окисления фенилаланина в составе молекул белка образуются орто-, мета-, пара-тирозины, а их одноэлектронное окисление генерирует долгоживущий тирозин-радикал, который при взаимодействии с таким же радикалом образует стабильный к влиянию протеаз битирозин, обладающий характерной голубой флюоресценцией. Окисление триптофановых остатков сопровождается снижением флюоресценции, характерной для триптофана. Битирозин и окисленный триптофан в нативных молекулах, в основном, отсутствуют, поэтому известны как стабильные маркеры окислительной модификации белка.

Реактивы: 1) 0,07 М фосфатный буфер (рН=7,4); 2) раствор Сu4 (до конечной концентрации 1 мМ).

Объект исследования: плазма крови.

Ход работы. В опытную пробу в стерильных условиях добавляют 0,1 мл плазмы, 4,8 мл 0,07 М фосфатного буфера (рН=7,4), для индукции ОМБ добавляют 0,1 мл раствора Сu4 до конечной концентрации 1 мМ. В контрольную пробу кроме плазмы добавляют 4,9 мл 0,07 М фосфатного буфера (рН=7,4). Обе пробы инкубируют 20 ч при 37º С. На спектрофлюориметре регистрируют снижение флюоресценции триптофана при длине волны возбуждения 295 нм и длине волны испускания 325 нм и флюоресценцию образованного битирозина при длине волны возбуждения 325 нм и длине волны испускания 415 нм.

Результаты представляют в условных единицах, стандартизованных на 1 мг белка.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

33542. Произведение “Царь-рыба” 13.6 KB
  Здесь он царь царь природы. И ведет он себя как царь: он аккуратен все свои дела доводит до конца. Но зачем природе царь не ценящий богатства которым владеет Неужели она покорится и не свергнет его Тогда появляется царьрыба царица рек посланная для борьбы с царем при роды. Каждый рыбак мечтает поймать царьрыбу ведь это знак свыше.
33543. Привычное дело 14.36 KB
  В новом варианте автор расширил объем повести углубил ее проблематику расширил временные рамки. Произведение было переработано стилистически например автор оформил частично заново отношение между речью повествователя и персонажей. Автор с большой любовью и уважением относится к своим героям. Автор не наделяет своего героя какимито особенными качествами и талантами.
33544. За повестью Ю. Бондарева «Горячий снег» 14.92 KB
  Всю военную прозу можно условно разделить на две группы: произведения написанные в годы войны и произведения послевоенного периода. Впервые в советской прозе так мощно и пристрастно зазвучал голос художника изнутри войны. Все 4 года войны они прожили не переводя дыхания и казалось концентрация деталей эпизодов конфликтов ощущений потерь образов солдат пейзажей запахов разговоров ненависти и любви была настолько густа и сильна после возвращения с фронта что просто невозможно было всё это организовать найти необходимый сюжет...
33545. Понятие местного самоуправления. Основные теории местного самоуправления 36.5 KB
  Понятие местного самоуправления. Основные теории местного самоуправления. Понятие местного самоуправления. Основные принципы местного самоуправления.
33546. Конституционно-правовые основы местного самоуправления 52 KB
  Конституционноправовые основы местного самоуправления Правовая база МСУ – это система законодательных и иных нпа на основе которых оно функционирует. Поскольку установление общих принципов организации МСУ является согласно Конституции предметом совместного ведения РФ и её субъектов оно предполагает издание ФЗ и принятие в соответствии с ними законов и иных нпа субъектов РФ. Муниципальное право регулирует правовые отношения возникающие в процессе организации и деятельности местного самоуправления. Конституция РФ признает и гарантирует...
33547. Состав органов местного самоуправления: структура, функции 45 KB
  По специализации: Общего назначения Специального назначения По полномочиям Исполняющие собственные полномочия Исполняющие отдельные госе полномочия Исполняющие добровольные полномочия связаны например с кооперированием муниципальных образований с выполнением договоров в том числе с зарубежными партнерами членством в различных ассоциациях и союзах По способу принятия решений Принимающие решения коллегиально Принимающие решения единолично По типу исполняемых функций Представительный орган проектная функция – Представление...
33548. Предметы ведения и полномочия местного самоуправления 39 KB
  Предметы ведения и полномочия местного самоуправления Впервые понятие полномочия органов местного самоуправления приводится в ст. 132 Конституции Российской Федерации 1993 года в соответствии с которой органы местного самоуправления обладают полномочиями по самостоятельному решению вопросов местного значения а также могут наделяться государственными полномочиями. 132 Конституции органы местного самоуправления самостоятельно управляют муниципальной собственностью формируют утверждают и исполняют местный бюджет устанавливают местные налоги...
33549. Финансово-экономическое обеспечение МСУ 44 KB
  Финансовоэкономическое обеспечение МСУ Состав и использование муниципального имущества. Экономическую основу МСУ составляют находящееся в муниципальной собственности имущество средства местных бюджетов а также имущественные права муниципальных образований. Европейская Хартия о местном самоуправлении закрепляет общие принципы организации финансовоэкономической самостоятельности органов МСУ: органы мсу имеют право в рамках национальной экономической политики на обладание достаточными собственными финансовыми средствами которыми они...
33550. Формы осуществления МСУ 45.5 KB
  Формы осуществления МСУ Формы непосредственной демократии: местный референдум муниципальные выборы сходы граждан. Формы представительной демократии: выборные органы выборные должностные лица МСУ. Формы участия населения в осуществлении МСУ. Тем самым предусмотрены 2 основные группы форм осуществления населением МСУ.