11462

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ БИТИРОЗИНА И ОКИСЛЕННОГО ТРИПТОФАНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ

Лабораторная работа

Химия и фармакология

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА ознакомительная Определение содержания битирозина и окисленного триптофана в плазме крови ПРИНЦИП МЕТОДА. Оценку содержания битирозина и окисленного триптофана проводят методом K.J. Davies 1987 в модификации Э.М. Бекмана и cоавторов 2006. В резуль

Русский

2013-04-08

28.5 KB

8 чел.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
(ознакомительная)

Определение содержания битирозина и окисленного триптофана в плазме крови

ПРИНЦИП МЕТОДА. Оценку содержания битирозина и окисленного триптофана проводят методом K.J. Davies (1987) в модификации Э.М. Бекмана и cоавторов (2006). В результате окисления фенилаланина в составе молекул белка образуются орто-, мета-, пара-тирозины, а их одноэлектронное окисление генерирует долгоживущий тирозин-радикал, который при взаимодействии с таким же радикалом образует стабильный к влиянию протеаз битирозин, обладающий характерной голубой флюоресценцией. Окисление триптофановых остатков сопровождается снижением флюоресценции, характерной для триптофана. Битирозин и окисленный триптофан в нативных молекулах, в основном, отсутствуют, поэтому известны как стабильные маркеры окислительной модификации белка.

Реактивы: 1) 0,07 М фосфатный буфер (рН=7,4); 2) раствор Сu4 (до конечной концентрации 1 мМ).

Объект исследования: плазма крови.

Ход работы. В опытную пробу в стерильных условиях добавляют 0,1 мл плазмы, 4,8 мл 0,07 М фосфатного буфера (рН=7,4), для индукции ОМБ добавляют 0,1 мл раствора Сu4 до конечной концентрации 1 мМ. В контрольную пробу кроме плазмы добавляют 4,9 мл 0,07 М фосфатного буфера (рН=7,4). Обе пробы инкубируют 20 ч при 37º С. На спектрофлюориметре регистрируют снижение флюоресценции триптофана при длине волны возбуждения 295 нм и длине волны испускания 325 нм и флюоресценцию образованного битирозина при длине волны возбуждения 325 нм и длине волны испускания 415 нм.

Результаты представляют в условных единицах, стандартизованных на 1 мг белка.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

26721. Основные категории современной геополитики 13.08 KB
  Одним из ключевых понятий геополитики является пространственнотерриториальный фактор. Геополитические процессы представляют собой исторические процессы формирования развития взаимодействия и распада субъектов геополитики. Одной из важнейших категорий геополитики является понятие субъекты геополитики.
26722. ИСТОЧНИКИ ГЕОПОЛИТИКИ 21.71 KB
  Исследование механизмов и форм контроля над территорией одна из основных задач геополитики. Историческим ядром геополитики выступает география ставящая во главу угла исследование прямых и обратных связей между свойствами территории и балансом соперничеством или сотрудничеством мировых силовых полей. Методологическим ядром геополитики при этом является моделирование на общепланетарном уровне хотя в составе этой научной дисциплины существуют и региональные и локальные разделы например исследование границ проблем спорных территорий...
26723. Биполяность и монополярность мира 15.56 KB
  Дополнительно предъявлялись следующие аргументы: только США обладают симметричным могуществом т. в военной экономической политической сферах одновременно; превосходство американской модели развития что было доказано успешной историей США и самое главное – победой в холодной войне; отсутствие у США сколь либо серьёзного конкурента. При этом никто не ставил под сомнение уникальные позиции США в мире.Кустарёв никто из экспертов не верит что США смогут навсегда остаться единственной сверхдержавой Вот образцовое суждение профессора...
26725. Североатлантический регион в современном мире 12.09 KB
  Громадный район северной атлантики от восточного побережья Канады и США на западе и до Кольского полуострова и Балтики на востоке этот геостратегический регион когдато в равной мере контролировался блоками НАТО и Варшавского договора. Североатлантический регион САР играет ведущую роль в большой политике что объясняется прежде всего его важным стратегическим местоположением: это транзитный район между Европой и Северной Америкой. Так объемы двусторонней торговли между США и ЕС почти на 50 больше чем объемы транстихоокеанской...
26726. Муниципальное образование как объект и субъект управления 40.5 KB
  Муниципальный район объединяет несколько смежных поселений или поселений и пространств между ними межселенных территорий которые находятся вне границ Городской округ имеет полномочия и муниципального района и городского поселения. В сельских поселениях включающих два и более населенных пункта в муниципальных районах выделяются административные центры поселения где расположены органы МС.: территорию поселения составляют исторически сложившиеся земли независимо от их формы собственности и целевого назначения включая прилегающие земли...
26727. Природные, исторические, национальные, социально-демографические, экономические особенности муниципальных образований 27 KB
  Экономическую основу местного самоуправления составляют находящееся в муниципальной собственности имущество средства местных бюджетов а также имущественные права муниципальных образований. Органы местного самоуправления от имени муниципального образования самостоятельно владеют пользуются и распоряжаются муниципальным имуществом. В соответствии с Гражданским кодексом органы местного самоуправления вправе создавать муниципальные предприятия и учреждения. К собственным доходам местного бюджета могут относиться: средства самообложения граждан...
26728. Характеристика муниципального хозяйства 27.5 KB
  Субъектами местного хозяйства выступают домохозяйства предприниматели органы местного самоуправления представительства от местного населения в виде различного рода общественных или профессиональных организаций. Цель хозяйства – благоустройство социальное благосостояние местного сообщества Специфика муниципального хозяйства: носит черты частного хозяйства использование муниципальной собственности; имеет общественный характер население является заказчиком муниципальных услуг; является подрядчиком выполняя государственные...
26729. Сущность бюджетного федерализма 32.5 KB
  Сущность бюджетного федерализма. Для обновления бюджетного устройства РФ необходим пересмотр сложившихся отношений между бюджетами различных уровней. России федеральному государству с трехуровневой бюджетной системой необходимо бюджетное устройство основанное на принципах бюджетного федерализма под которым понимается система налоговобюджетных взаимоотношений органов власти и управления различных уровней на всех стадиях бюджетного процесса. Реализация концепции бюджетного федерализма основана на сочетании двух взаимодополняющих тенденций...