11462

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ БИТИРОЗИНА И ОКИСЛЕННОГО ТРИПТОФАНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ

Лабораторная работа

Химия и фармакология

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА ознакомительная Определение содержания битирозина и окисленного триптофана в плазме крови ПРИНЦИП МЕТОДА. Оценку содержания битирозина и окисленного триптофана проводят методом K.J. Davies 1987 в модификации Э.М. Бекмана и cоавторов 2006. В резуль

Русский

2013-04-08

28.5 KB

8 чел.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
(ознакомительная)

Определение содержания битирозина и окисленного триптофана в плазме крови

ПРИНЦИП МЕТОДА. Оценку содержания битирозина и окисленного триптофана проводят методом K.J. Davies (1987) в модификации Э.М. Бекмана и cоавторов (2006). В результате окисления фенилаланина в составе молекул белка образуются орто-, мета-, пара-тирозины, а их одноэлектронное окисление генерирует долгоживущий тирозин-радикал, который при взаимодействии с таким же радикалом образует стабильный к влиянию протеаз битирозин, обладающий характерной голубой флюоресценцией. Окисление триптофановых остатков сопровождается снижением флюоресценции, характерной для триптофана. Битирозин и окисленный триптофан в нативных молекулах, в основном, отсутствуют, поэтому известны как стабильные маркеры окислительной модификации белка.

Реактивы: 1) 0,07 М фосфатный буфер (рН=7,4); 2) раствор Сu4 (до конечной концентрации 1 мМ).

Объект исследования: плазма крови.

Ход работы. В опытную пробу в стерильных условиях добавляют 0,1 мл плазмы, 4,8 мл 0,07 М фосфатного буфера (рН=7,4), для индукции ОМБ добавляют 0,1 мл раствора Сu4 до конечной концентрации 1 мМ. В контрольную пробу кроме плазмы добавляют 4,9 мл 0,07 М фосфатного буфера (рН=7,4). Обе пробы инкубируют 20 ч при 37º С. На спектрофлюориметре регистрируют снижение флюоресценции триптофана при длине волны возбуждения 295 нм и длине волны испускания 325 нм и флюоресценцию образованного битирозина при длине волны возбуждения 325 нм и длине волны испускания 415 нм.

Результаты представляют в условных единицах, стандартизованных на 1 мг белка.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

59961. Военные походы фараонов 73.5 KB
  Цели урока: Образовательная расширить знания учащихся об основных понятиях урока подвести учащихся к пониманию причин последствий и характера военных походов фараонов Древнего Египта Развивающая создать условия для развития коммуникационных умений и навыков умения обобщать изученный материал делать выводы.
59962. Вогники наших сердець 51.5 KB
  Ведучий: Усі діти люблять свою маму і для кожного вона єдина і найкраща. Я дуже люблю свою маму Ведучий: В дарунок усім мамам танок Полькатрійка Розповідь віршів з показами фото слайдів під музичний супровід Учениця 1. Ведучий.
59963. НЕХАЙ ВОГОНЬ В СЕРЦЯХ ПАЛАЄ, А ПОЖЕЖ ХАЙ НЕ БУВАЄ 542 KB
  МЕТА: продовжувати ознайомлювати учнів із поняттям вогонь; формувати уявлення про причини виникнення пожежі в побуті та її наслідки; вчити учнів правильно діяти у випадку виявлення пожежі вдома чи інших обєктах; розвивати навички самозахисту в умовах задимленого помешкання...
59965. План-конспект уроку фізичної культури на матеріалі волейбол 71.5 KB
  Ходьба: звичайна в обхід спортзалу; на п`ятках руки вгору; на носках руки в замок вгору; перекат з пятки на носок руки на пояс на зовнішній стороні стопи руки в сторони; на внутрішній стороні стопи руки за спину; в присіді...
59966. Правление князя Владимира Великого 66.5 KB
  ЦЕЛЬ: рассмотреть внешнюю и внутреннею политику Владимира Великого раскрыть её противоречия: рассмотреть территориальные изменения; установить хронологическую последовательность событий; изучить реформы Владимира и их значение для дальнейшего развития Русского государства...
59967. Ми можемо відкрити новий світ, коли навчимося ставити вірні запитання 387.5 KB
  Добре поставлене запитання – це запитання, на яке учень захоче відповісти, зможе відповісти або над яким він схоче задуматись, і він буде зацікавлений у співпраці. Уміння ставити запитання є необхідною ознакою фахової та педагогічної майстерності.