15424

Лабораторные методы оценки функционального состояния Т- и В-систем иммунитета

Конспект урока

Медицина и ветеринария

ЗАНЯТИЕ 15 Тема занятия: Лабораторные методы оценки функционального состояния Т и Всистем иммунитета. Учебная цель занятия: Ознакомиться с основными методами лабораторных исследований Т и Всистем иммунитета значениями некоторых иммунолог

Русский

2013-06-13

42 KB

126 чел.

ЗАНЯТИЕ 15

Тема занятия: Лабораторные методы оценки функционального состояния Т- и В-систем иммунитета.

Учебная цель занятия: Ознакомиться с основными методами лабораторных исследований Т- и В-систем иммунитета, значениями некоторых иммунологических показателей, характеризующих состояние Т- и В-звеньев иммунитета.

Задачи занятия: Ознакомиться с методикой постановки реакций розеткообразования для подсчета Т- и В-лимфоцитов, реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ). Определить значение отдельных показателей иммунограммы для оценки состояния иммунитета.

Методика постановки иммунологических реакций:

  •  Кровь для исследования в количестве 1 – 2 мл берут из локтевой вены в пробирку с раствором гепарина. Для отделения лейкоцитов от эритроцитов  пробу крови осторожно наслаивают на раствор, содержащий смесь фиколл-верографин или фиколл-гипак (плотность раствора 1,077 г\мл) и  центрифугируют при 1,5 тыс об\мин в течение 40 – 45 мин. Эритроциты оседают на дно пробирки, а лейкоциты, обладающие меньшей плотностью,   остаются в верхней части пробирки в виде мутного кольца. Фракцию    лейкоцитов осторожно отсасывают пипеткой и двукратно отмывают путем    центрифугирования средой 199.
  •  Реакция розеткообразования используется для количественного определения  содержания Т- и В-лимфоцитов.  Вследствие качественных различий рецепторов на клеточных мембранах Т- и  В-лимфоциты различаются по способности адсорбировать эритроциты животных. Т-лимфоциты способны адсорбировать эритроциты барана и  называются Е-розеткообразующие клетки (Е-РОК). В-лимфоциты   адсорбируют эритроциты мыши и называются М-РОК. Для постановки реакции розеткообразования взвесь лейкоцитов смешивают  с предварительно отмытыми эритроцитами животного (соотношение эритроциты: лимфоциты должно соответствовать 20 : 1 – 50 : 1). Смесь   выдерживают 10 мин при 37 °С, затем центрифугируют и оставляют на 18   часов при 4 ° С. На предметном стекле готовят тонкий мазок из клеточной    суспензии, окрашивают по Романовскому – Гимзе, микроскопируют с   объективом x 40. При подсчете 300 лимфоцитов определяют процент клеток,   адсорбировавших на себе 3 и более эритроцитов. В норме у взрослых людей   содержится 60 – 67% Е-РОК и 6 – 12% М-РОК . 20 – 25% лимфоцитов не  способны образовывать розетки. Они называются нулевыми клетками (0-клетки). Это популяция Т-лимфоцитов, включающая натуральные Т-киллеры,  а также незрелые Т- и В-лимфоциты.
  •  Определение содержания CD4 и CD8 клеток. Популяция Е-РОК состоит   преимущественно из CD4 и CD8 лимфоцитов. Для их количественного определения ставят    реакцию розеткообразования с эритроцитами барана в присутствии теофиллина. Теофиллин повышает уровень внутриклеточного цАМФ и    ингибирует реакцию розеткообразования CD8.    Таким образом, при параллельной постановке реакции розеткообразования   с теофиллином и без него можно определить количество хелперов    (теофиллинрезистентные клетки) и суммарное количество CD4 и CD8 клеток.

Количество CD8 (теофиллинчувствительные клетки) определяется по  формуле: Тфч = Е-РОК – Тфр. В норме у здорового человека количество Т-хелперов составляет 50 – 60%, Т-цитотоксических лимфоцитов – 12 – 20%   от общего числа    лимфоцитов. Соотношение CD4 : CD8 (в процентах) составляет  1,3 – 7,5.    Уменьшение этого показателя до 1,0 или менее свидетельствует о  наличии  иммунодефицита.

  •  Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ). Бласттрансформацией называется  феномен превращения лимфоцитов в крупные делящиеся клетки под   действием специфических и неспецифических митогенов. Некоторые  полисахариды растительного происхождения (фитогемагглютинины)   способны при добавлении к суспензии лимфоцитов вызывать неспецифическую бласттрансформацию Т-лимфоцитов.  Способность образовывать бласты в ответ на стимуляцию ФГА отражает  степень готовности иммунной системы к иммунному ответу. Количество  образующихся бластных клеток оценивают через 24 часа инкубации  лимфоцитов с митогеном путем микроскопии либо радиоизотопным методом.  В норме у взрослого человека после стимуляции ФГА не менее 70% лимфоцитов должно превращаться в бласты. Снижение этого показателя   свидетельствует об угнетении иммунной системы. При постановке РБТЛ с определенными антигенами (микробными,  вирусными) можно определить клеточную реакцию на конкретный антиген. При этом образовывать бласты будут клетки, несущие рецепторы к данному  антигену.

Основные правила интерпретации иммунограмм:

  1.  Комплексный анализ иммунограммы более информативен, чем оценка каждого показателя в отдельности.
  2.  Анализ иммунограммы в динамике всегда более информативен как в диагностическом, так и в прогностическом отношении, нежели однократно полученная иммунограмма.
  3.  Реальную информацию несут лишь сильные сдвиги показателей.
  4.  Полноценный анализ иммунограммы можно проводить лишь в комплексе с оценкой клинической картины заболевания у данного пациента.
  5.  Отсутствие существенных сдвигов показателей иммунограммы при наличии выраженной картины воспалительного процесса свидетельствует об атипичной реакции иммунной системы и является отягощающим признаком течения процесса.
  6.  В подавляющем большинстве случаев анализ иммунограммы позволяет делать ориентировочные, а не безусловные выводы.

Приложение 1
Средние значения показателей иммунограммы у взрослых здоровых людей 

Показатель

Условное обозначение

Среднее значение

Лейкоциты /109 в 1 л/

L

5,6

Моноциты, %

М

6,2

Эозинофилы, %

Э

2,2

Базофилы, %

Б

0,4

Палочкоядерные нейтрофилы, %

П

1,5

Сегментоядерные нейтрофилы, %

С

60,3

Лимфоциты, %

Л

29,4

Т-лимфоциты, %

Т /Е-РОК/

67,3

В-лимфоциты, %

В /М-РОК/

8,2

Нулевые Т-лимфоциты,%

О

24,5

Т-хелперы, % (CD4)

Тх /Тфр/

55,6

Т-цитотоксические,% (CD8)

Тц /Тфч/

12,7

CD4/ CD8

Соот

1,3 – 7,5

Адгезия фагоцитов, %

Фа /Е-РОН/

25,4

Захват фагоцитов, %

Фз /Д – Ф/

45,0

СОЭ, мм

 

8,0

Иммуноглобулины G, г/л

Ig G

9,8

Иммуноглобулины М, г/л

Ig М

1,0

Иммуноглобулины А, г/л

Ig А

1,8

Иммуноглобулины Е, МЕ/мл

Ig Е

25

 

Приложение 2

Иммунограмма на отдельных стадиях воспалительного процесса

Стадия продромы: Уменьшение относительного количества эозинофилов, базофилов, Т-лимфоцитов. Повышение процента О-клеток.

Стадия развития клинической картины заболевания:
Повышается лейкоцитоз, увеличивается относительное число нейтрофилов, снижается количество лимфоцитов и эозинофилов. Появляется сдвиг ядерной формулы нейтрофилов влево. Дальнейшее снижение числа эозинофилов. Дальнейшее снижение содержания Т-лимфоцитов и повышение уровня О-клеток.

Стадия развернутой клинической картины заболевания: Лейкоцитоз достигает максимальных значений, сдвиг ядерной формулы влево остается, повышается СОЭ (повышение быстрое и длительное – до 2 месяцев после окончания процесса). Показателем интоксикации является снижение фагоцитарной активности нейтрофилов (Фз) при неизменной или усиленной адгезивной способности этих клеток (Фа). Крайним неблагоприятным прогностическим признаком на этом этапе заболевания является дальнейшее понижение количества Т-лимфоцитов и повышение содержания О-клеток. Повышение количества CD8 по сравнению с CD4 на фоне сниженной фагоцитарной активности указывает на тяжесть процесса на фоне сильной интоксикации. Неблагоприятное прогностическое значение всех признаков усугубляется на фоне снижения уровня лейкоцитов.

Период кризиса и завершения клинической картины заболевания:
Предшественником кризиса является нормализация содержания эозинофилов. Отмечается рост относительного количества В-лимфоцитов, хотя и не во всех случаях. Увеличивается количество CD8 – на этапе выздоровления это благоприятный прогностический признак. Восстанавливается количество Т-лимфоцитов, снижается уровень О-клеток. Снижается количество лейкоцитов, нормализуется сдвиг ядерной формулы.

Стадия реконвалесценции и полное выздоровление: Самым надежным постоянным критерием незавершенности воспалительного процесса является снижение количества Т-лимфоцитов и повышение уровня О-клеток. СОЭ остается на высоком уровне долго.

 

Классификация лейкограмм

1. Нейтрофильно-лимфоцитарный тип – классический тип, встречающийся при гнойно-септических заболеваниях (микробная пневмония, рожа и т.д.). Характеризуется наличием хорошо выраженных нейтрофильной и лимфоцитарной фаз.
2. Нейтрофильный тип – имеется максимально расширенная по времени нейтрофильная фаза, которая переходит в слабо выраженную лимфоцитарную лишь на этапе выздоровления. Наиболее характерен для заболеваний, в которых ведущим компонентом является токсин микроорганизмов (например, дифтерия ).
3. Лимфоцитарный тип – нейтрофильная фаза сокращена до минимума, слабо выражена. Основное время заболевания занимает лимфоцитарная фаза. Этот тип иммунограммы характерен для вирусных инфекций, угнетающих нейтрофильный росток (корь, грипп).

Сдвиги показателей, которые уточняют характер лейкограмм того или иного типа:

  1.  Эозинофилия. Сопутствует усилению синтеза IgE, характеризует наличие в процессе аллергического компонента.
  2.  Моноцитоз. Характерен для воспалительных процессов с ярко выраженным компонентом гиперчувствительности замедленного типа.
  3.  Соотношение CD/ CD8 больше максимального значения нормы (больше 5). Возникает при резком снижении CD8, характерно для ряда аутоиммунных заболеваний (саркоидоз).
  4.  Резкое увеличение СОЭ наблюдается при ряде заболеваний, например, при узелковом преиартерите СОЭ достигает 70 мм/ч.
  5.  Слабая реакция лейкограммы на воспалительный процесс. Подобные сдвиги наблюдаются при стертом течении болезни (воспалительных заболеваний), локальных воспалительных процессах (вагините, вульвите, конъюнктивите, ячмене, цистите, тромбофлебите), воспалительных процессах, вызванных агрессивным началом с низкой иммуногенностью и высокой инвазивностью (многие злокачественные опухоли).

Литература для подготовки к занятию:
Основная литература:
1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред.А.А. Воробьева. М., 2004, 265-269.
Дополнительная литература:
1. Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2002, 322-325.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

32724. Тепловые явления при низких температурах. Третье начало термодинамики 40.5 KB
  Расчет абсолютной энтропии Рассчитаем изменение энтропии некоторой системы при нагревании её от абсолютного нуля до температуры T при постоянном давлении. При нагревании вещества возможен его переход в жидкое и затем в газообразное состояние; для фазовых переходов происходящих в изобарноизотермических условиях изменение энтропии равно приведенной теплоте фазового перехода: I.65 Таким образом нагревание вещества без фазовых переходов сопровождается непрерывным ростом энтропии; при фазовом переходе происходит...
32725. Понятие фазы. Фазовые переходы 1 и 2 рода. Фазовые диаграммы. Тройная точка 57 KB
  Понятие фазы. В однокомпонентной системе разные фазы могут быть представлены различными агрегатными состояниями или разными полиморфными модификациями вещества. В многокомпонентной системе фазы могут иметь различный состав и структуру. Основные понятия Газ всегда состоит из одной фазы жидкость может состоять из нескольких жидких фаз разного состава Ликвация жидкостная несмешиваемость но двух разных жидкостей одного состава в равновесии сосуществовать не может.
32726. Материальная точка. Абсолютно твёрдое тело. Система отсчёта 27.5 KB
  Система отсчёта. Системы отсчёта. Для определения координат материальной точки следует прежде всего выбрать тело отсчёта и связать с ним систему координат. Для определения положения материальной точки в любой момент времени необходимо также задать начало отсчёта времени.
32727. Кинематика точки. Путь. Перемещение. Скорость и ускорение. Их проекции на координатные оси. Вычисление пройденного пути. Средние значения 28.5 KB
  Скорость и ускорение. Скорость векторная физическая величина характеризующая быстроту перемещения тела численно равная отношению перемещения за малый промежуток времени к величине этого промежутка. Промежуток времени считается достаточно малым если скорость при неравномерном движении в течение этого промежутка не менялась. Измеряют скорость спидометром.
32728. Скорость и ускорение при криволинейном движении. Тангенциальное и нормальное ускорения 37 KB
  Криволинейное движение с постоянным ускорением всегда происходит в той плоскости в которой находятся векторы ускорения и начальные скорости точки. В случае криволинейного движения с постоянным ускорением в плоскости xOy проекции vxи vy ее скорости на оси Ox и Oy и координаты x и y точки в любой момент времени t определяется по формулам vx=v0xxt x=x0v0xtxtxt2 2; vy=v0yyt y=y0v0ytyt2 2 Частным случаем криволинейного движения является движение по окружности. Движение по окружности даже равномерное всегда есть движение...
32729. Кинематика твёрдого тела. Вращение вокруг неподвижной оси. Угловые скорость и ускорения. Связь между угловыми и линейными скоростями и ускорениями 39 KB
  Кинематика твёрдого тела. Движение тела может быть как поступательным так и вращательным. При поступательном движении все точки твердого тела за один и тот же промежуток времени совершают равные по величине и направлению перемещения. Следовательно скорости и ускорения всех точек тела в любой момент времени также одинаковы.
32730. Границы применимости ньютоновской механики. Первый закон Ньютона 28.5 KB
  Первый закон Ньютона. Вследствие развития физики в начале XX века определилась область применения классической механики: ее законы выполняются для движений скорость которых много меньше скорости света. Вообще законы классической механики Ньютона справедливы для случая инерциальных систем отсчета. При ускоренном движении неинерциальной системы координат относительно инерциальной системы первый закон Ньютона закон инерции в этой системе не имеет места свободные тела в ней будут с течением времени менять свою скорость движения.
32731. Масса и импульс. Второй закон Ньютона как уравнение движения 37.5 KB
  Масса скал. тела масса величина аддитивная т. масса системы рана сумме масс материальных тел входящих в состав этой системы при любых воздействиях выполняется закон сохранения массы: суммарная масса взаимодействующих тел до взаимодействия и после равны между собой. инерции точка в которой может считаться масса всего тела при поступательном движении данного тела.
32732. Третий закон Ньютона. Центр масс. Уравнение движения центра масс 30.5 KB
  Центр масс. Уравнение движения центра масс. Сам закон: Тела действуют друг на друга с силами имеющими одинаковую природу направленными вдоль одной и той же прямой равными по модулю и противоположными по направлению: Центр масс это геометрическая точка характеризующая движение тела или системы частиц как целого. Определение Положение центра масс центра инерции в классической механике определяется следующим образом: где радиусвектор центра масс радиусвектор iй точки системы масса iй точки.