15424

Лабораторные методы оценки функционального состояния Т- и В-систем иммунитета

Конспект урока

Медицина и ветеринария

ЗАНЯТИЕ 15 Тема занятия: Лабораторные методы оценки функционального состояния Т и Всистем иммунитета. Учебная цель занятия: Ознакомиться с основными методами лабораторных исследований Т и Всистем иммунитета значениями некоторых иммунолог

Русский

2013-06-13

42 KB

131 чел.

ЗАНЯТИЕ 15

Тема занятия: Лабораторные методы оценки функционального состояния Т- и В-систем иммунитета.

Учебная цель занятия: Ознакомиться с основными методами лабораторных исследований Т- и В-систем иммунитета, значениями некоторых иммунологических показателей, характеризующих состояние Т- и В-звеньев иммунитета.

Задачи занятия: Ознакомиться с методикой постановки реакций розеткообразования для подсчета Т- и В-лимфоцитов, реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ). Определить значение отдельных показателей иммунограммы для оценки состояния иммунитета.

Методика постановки иммунологических реакций:

  •  Кровь для исследования в количестве 1 – 2 мл берут из локтевой вены в пробирку с раствором гепарина. Для отделения лейкоцитов от эритроцитов  пробу крови осторожно наслаивают на раствор, содержащий смесь фиколл-верографин или фиколл-гипак (плотность раствора 1,077 г\мл) и  центрифугируют при 1,5 тыс об\мин в течение 40 – 45 мин. Эритроциты оседают на дно пробирки, а лейкоциты, обладающие меньшей плотностью,   остаются в верхней части пробирки в виде мутного кольца. Фракцию    лейкоцитов осторожно отсасывают пипеткой и двукратно отмывают путем    центрифугирования средой 199.
  •  Реакция розеткообразования используется для количественного определения  содержания Т- и В-лимфоцитов.  Вследствие качественных различий рецепторов на клеточных мембранах Т- и  В-лимфоциты различаются по способности адсорбировать эритроциты животных. Т-лимфоциты способны адсорбировать эритроциты барана и  называются Е-розеткообразующие клетки (Е-РОК). В-лимфоциты   адсорбируют эритроциты мыши и называются М-РОК. Для постановки реакции розеткообразования взвесь лейкоцитов смешивают  с предварительно отмытыми эритроцитами животного (соотношение эритроциты: лимфоциты должно соответствовать 20 : 1 – 50 : 1). Смесь   выдерживают 10 мин при 37 °С, затем центрифугируют и оставляют на 18   часов при 4 ° С. На предметном стекле готовят тонкий мазок из клеточной    суспензии, окрашивают по Романовскому – Гимзе, микроскопируют с   объективом x 40. При подсчете 300 лимфоцитов определяют процент клеток,   адсорбировавших на себе 3 и более эритроцитов. В норме у взрослых людей   содержится 60 – 67% Е-РОК и 6 – 12% М-РОК . 20 – 25% лимфоцитов не  способны образовывать розетки. Они называются нулевыми клетками (0-клетки). Это популяция Т-лимфоцитов, включающая натуральные Т-киллеры,  а также незрелые Т- и В-лимфоциты.
  •  Определение содержания CD4 и CD8 клеток. Популяция Е-РОК состоит   преимущественно из CD4 и CD8 лимфоцитов. Для их количественного определения ставят    реакцию розеткообразования с эритроцитами барана в присутствии теофиллина. Теофиллин повышает уровень внутриклеточного цАМФ и    ингибирует реакцию розеткообразования CD8.    Таким образом, при параллельной постановке реакции розеткообразования   с теофиллином и без него можно определить количество хелперов    (теофиллинрезистентные клетки) и суммарное количество CD4 и CD8 клеток.

Количество CD8 (теофиллинчувствительные клетки) определяется по  формуле: Тфч = Е-РОК – Тфр. В норме у здорового человека количество Т-хелперов составляет 50 – 60%, Т-цитотоксических лимфоцитов – 12 – 20%   от общего числа    лимфоцитов. Соотношение CD4 : CD8 (в процентах) составляет  1,3 – 7,5.    Уменьшение этого показателя до 1,0 или менее свидетельствует о  наличии  иммунодефицита.

  •  Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ). Бласттрансформацией называется  феномен превращения лимфоцитов в крупные делящиеся клетки под   действием специфических и неспецифических митогенов. Некоторые  полисахариды растительного происхождения (фитогемагглютинины)   способны при добавлении к суспензии лимфоцитов вызывать неспецифическую бласттрансформацию Т-лимфоцитов.  Способность образовывать бласты в ответ на стимуляцию ФГА отражает  степень готовности иммунной системы к иммунному ответу. Количество  образующихся бластных клеток оценивают через 24 часа инкубации  лимфоцитов с митогеном путем микроскопии либо радиоизотопным методом.  В норме у взрослого человека после стимуляции ФГА не менее 70% лимфоцитов должно превращаться в бласты. Снижение этого показателя   свидетельствует об угнетении иммунной системы. При постановке РБТЛ с определенными антигенами (микробными,  вирусными) можно определить клеточную реакцию на конкретный антиген. При этом образовывать бласты будут клетки, несущие рецепторы к данному  антигену.

Основные правила интерпретации иммунограмм:

  1.  Комплексный анализ иммунограммы более информативен, чем оценка каждого показателя в отдельности.
  2.  Анализ иммунограммы в динамике всегда более информативен как в диагностическом, так и в прогностическом отношении, нежели однократно полученная иммунограмма.
  3.  Реальную информацию несут лишь сильные сдвиги показателей.
  4.  Полноценный анализ иммунограммы можно проводить лишь в комплексе с оценкой клинической картины заболевания у данного пациента.
  5.  Отсутствие существенных сдвигов показателей иммунограммы при наличии выраженной картины воспалительного процесса свидетельствует об атипичной реакции иммунной системы и является отягощающим признаком течения процесса.
  6.  В подавляющем большинстве случаев анализ иммунограммы позволяет делать ориентировочные, а не безусловные выводы.

Приложение 1
Средние значения показателей иммунограммы у взрослых здоровых людей 

Показатель

Условное обозначение

Среднее значение

Лейкоциты /109 в 1 л/

L

5,6

Моноциты, %

М

6,2

Эозинофилы, %

Э

2,2

Базофилы, %

Б

0,4

Палочкоядерные нейтрофилы, %

П

1,5

Сегментоядерные нейтрофилы, %

С

60,3

Лимфоциты, %

Л

29,4

Т-лимфоциты, %

Т /Е-РОК/

67,3

В-лимфоциты, %

В /М-РОК/

8,2

Нулевые Т-лимфоциты,%

О

24,5

Т-хелперы, % (CD4)

Тх /Тфр/

55,6

Т-цитотоксические,% (CD8)

Тц /Тфч/

12,7

CD4/ CD8

Соот

1,3 – 7,5

Адгезия фагоцитов, %

Фа /Е-РОН/

25,4

Захват фагоцитов, %

Фз /Д – Ф/

45,0

СОЭ, мм

 

8,0

Иммуноглобулины G, г/л

Ig G

9,8

Иммуноглобулины М, г/л

Ig М

1,0

Иммуноглобулины А, г/л

Ig А

1,8

Иммуноглобулины Е, МЕ/мл

Ig Е

25

 

Приложение 2

Иммунограмма на отдельных стадиях воспалительного процесса

Стадия продромы: Уменьшение относительного количества эозинофилов, базофилов, Т-лимфоцитов. Повышение процента О-клеток.

Стадия развития клинической картины заболевания:
Повышается лейкоцитоз, увеличивается относительное число нейтрофилов, снижается количество лимфоцитов и эозинофилов. Появляется сдвиг ядерной формулы нейтрофилов влево. Дальнейшее снижение числа эозинофилов. Дальнейшее снижение содержания Т-лимфоцитов и повышение уровня О-клеток.

Стадия развернутой клинической картины заболевания: Лейкоцитоз достигает максимальных значений, сдвиг ядерной формулы влево остается, повышается СОЭ (повышение быстрое и длительное – до 2 месяцев после окончания процесса). Показателем интоксикации является снижение фагоцитарной активности нейтрофилов (Фз) при неизменной или усиленной адгезивной способности этих клеток (Фа). Крайним неблагоприятным прогностическим признаком на этом этапе заболевания является дальнейшее понижение количества Т-лимфоцитов и повышение содержания О-клеток. Повышение количества CD8 по сравнению с CD4 на фоне сниженной фагоцитарной активности указывает на тяжесть процесса на фоне сильной интоксикации. Неблагоприятное прогностическое значение всех признаков усугубляется на фоне снижения уровня лейкоцитов.

Период кризиса и завершения клинической картины заболевания:
Предшественником кризиса является нормализация содержания эозинофилов. Отмечается рост относительного количества В-лимфоцитов, хотя и не во всех случаях. Увеличивается количество CD8 – на этапе выздоровления это благоприятный прогностический признак. Восстанавливается количество Т-лимфоцитов, снижается уровень О-клеток. Снижается количество лейкоцитов, нормализуется сдвиг ядерной формулы.

Стадия реконвалесценции и полное выздоровление: Самым надежным постоянным критерием незавершенности воспалительного процесса является снижение количества Т-лимфоцитов и повышение уровня О-клеток. СОЭ остается на высоком уровне долго.

 

Классификация лейкограмм

1. Нейтрофильно-лимфоцитарный тип – классический тип, встречающийся при гнойно-септических заболеваниях (микробная пневмония, рожа и т.д.). Характеризуется наличием хорошо выраженных нейтрофильной и лимфоцитарной фаз.
2. Нейтрофильный тип – имеется максимально расширенная по времени нейтрофильная фаза, которая переходит в слабо выраженную лимфоцитарную лишь на этапе выздоровления. Наиболее характерен для заболеваний, в которых ведущим компонентом является токсин микроорганизмов (например, дифтерия ).
3. Лимфоцитарный тип – нейтрофильная фаза сокращена до минимума, слабо выражена. Основное время заболевания занимает лимфоцитарная фаза. Этот тип иммунограммы характерен для вирусных инфекций, угнетающих нейтрофильный росток (корь, грипп).

Сдвиги показателей, которые уточняют характер лейкограмм того или иного типа:

  1.  Эозинофилия. Сопутствует усилению синтеза IgE, характеризует наличие в процессе аллергического компонента.
  2.  Моноцитоз. Характерен для воспалительных процессов с ярко выраженным компонентом гиперчувствительности замедленного типа.
  3.  Соотношение CD/ CD8 больше максимального значения нормы (больше 5). Возникает при резком снижении CD8, характерно для ряда аутоиммунных заболеваний (саркоидоз).
  4.  Резкое увеличение СОЭ наблюдается при ряде заболеваний, например, при узелковом преиартерите СОЭ достигает 70 мм/ч.
  5.  Слабая реакция лейкограммы на воспалительный процесс. Подобные сдвиги наблюдаются при стертом течении болезни (воспалительных заболеваний), локальных воспалительных процессах (вагините, вульвите, конъюнктивите, ячмене, цистите, тромбофлебите), воспалительных процессах, вызванных агрессивным началом с низкой иммуногенностью и высокой инвазивностью (многие злокачественные опухоли).

Литература для подготовки к занятию:
Основная литература:
1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред.А.А. Воробьева. М., 2004, 265-269.
Дополнительная литература:
1. Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2002, 322-325.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

35505. Экология 51.5 KB
  Факторы окружающей среды биотические и абиотические периодические непериодические жизненно важные и сигнальные адаптация экосистем к окружающей среде. Экологические факторы компоненты природной среды влияющие на состояние и свойства организма или популяции. Абиотические все компоненты неживой природы: солн радиация температура влажность рельеф состав водной воздушной и почв среды. Опасные содержат вва которые обладают 1 из опасных свойств токсичность взрывчатость пож опасность инфекционность и присутствуют в...
35506. Конструкции из дерева и пластмасс 52.5 KB
  Основные виды соединений деревянных элементов и предъявляемые к ним требования. Конструктивные врубки для соед элементов с незначительными усилиями не рассчитываются. На шпонках W шпонок не выше W элементов. Нормальные напряжения вычисляют как для сжатоизгибаемых элементов.
35507. Железобетонные и каменные конструкции 1.87 MB
  В качестве напрягаемой рекомендуется применять стержневую термически упрочненную арматуру классов АтVI тV tIVC горячекатаную арматуру классов VI V и IV; для элементов длиной свыше 12 м целесообразно применять арматурные канаты и высокопрочную проволоку допускается применение стержней классов IV V. Конструктивные особенности железобетонных изгибаемых элементов. Основные положения расчета изгибаемых элементов по предельным состояниям. По нормальному сечению рассчитывают изгибаемые элементы прямоугольного профиля с одиночной и...
35508. Металлические конструкции 2.81 MB
  Применение: несущие конструкции промзданий большепролётные покрытия зданий мосты и эстакады листовые конструкции башни и мачты каркасы многоэтажных зданий крановые и др. подвижные конструкции прочие конструкции. Исходным материалом является прокатный металл все конструкции объединены одним технологическим процессом их изготовления.
35509. Строительная механика. Сущность расчета статически неопределимых систем методом сил 418 KB
  Эту систему большого числа сил по правилам теоретической механики можно привести к одной точке (центру тяжести поперечного сечения), в результате чего получим главный вектор R и главный момент.
35510. Обследование, испытание и реконструкция зданий и сооружений 167 KB
  Неразрушающие методы испытания строительных конструкций. Оптические испытания моделей и конструкций в проходящем и отраженном излучении.25 раза быстрее перепланировка увеличение высоты помещений усиление частичная разборка и замена конструкций надстройка пристройка улучшение фасада. Средняя замена отд конструкций повышение отметок покрытия возможно полная остановка технологического процесса.
35511. Основания и фундаменты 919 KB
  Осадка здания это смещение здания вызванное сжатием грунта в основании под зданием. Выклинивание отдельных слоев грунта в пределах контура здания 2. Линзообразное залегание отдельных видов грунта 3. Неодинаковая мощность слоев грунта залегающих в основании 4.
35512. Организация, управление и планирование в строительстве 1.71 MB
  Подготовка производственных процессов и работы бригад. Предпроектная ПСП маркетинговые исследования разработка согласование и утверждение ТЭО на основе бизнесплана и подготовки исходных данных на проектирование. Обеспечение ПСД разработка ПОС сметной документации рабочие чертежи рассмотрение согласование и утверждение ПСД. Перспективное планирование финансы и У ими распределение имеющихся производственных мощностей определение объемов и объектов многолетнего выполнения работ планирование разработка стратегических и тактических...
35513. Технология строительных процессов и возведения зданий и сооружений 276 KB
  При проектировании трудовых процессов неизбежно возникновение ситуации которая предполагает осуществление выбора между различными методами и приемами выполнения работы а также формами организации труда. Руки работника должны освобождаться от неэффективной работы например использование их в качестве поддержки. Такие виды работ могут быть произведены с помощью специальных приспособлений или механизмов. 3 Принцип параллельности: должны быть обеспечена одновременная работа человека и машины одновременная работа нескольких машин и участие в...