15426

Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой

Конспект урока

Медицина и ветеринария

ЗАНЯТИЕ 1 ТЕМА ЗАНЯТИЯ: Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой. УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ ЗАНЯТ...

Русский

2013-06-13

58.5 KB

167 чел.

ЗАНЯТИЕ 1

ТЕМА ЗАНЯТИЯ: Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней. Ознакомиться с принципами классификации микроорганизмов. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов. Освоить бактериоскопический метод исследования и технику микроскопирования с иммерсионной системой.

ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней.

2. Познакомиться с принципами классификации микроорганизмов.

3. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов.

4. Освоить технику микроскопирования с иммерсионной системой.

Устройство бактериологической лаборатории

Бактериологическая лаборатория предназначена для исследования материалов, содержащих возбудителей бактериальных инфекций, для определения санитарно-микробиологических показателей, контроля состояния и напряженности специфического иммунитета и других микробиологических исследований. Бактериологическая лаборатория должна размещаться в изолированных от других лабораторий помещениях с необходимым оборудованием и мебелью. Лаборатория должна иметь отдельный вход, гардероб и душевую. В состав бактериологической лаборатории должны входить следующие помещения:

- комната приема и регистрации материалов;

- боксированные помещения для микробиологических исследований;

- автоклавная;

- моечная;

- виварий.

Комнаты для микробиологических исследований оборудуют термостатами, холодильниками, центрифугами, весами, водяными банями, электромагнитными мешалками. На столах размещают необходимую аппаратуру. Работу с инфицированным материалом проводят в боксе с предбоксником. У входа в бокс должен быть коврик, пропитанный дезраствором. В боксе разбирают поступившие пробы, готовят и фиксируют мазки-отпечатки, проводят посевы микроорганизмов на питательные среды. Поэтому в боксе располагают столы, на которых размещают необходимые для работы инструменты: емкости с дезрастворами для использованной посуды, штативы для пробирок, пробирки и чашки Петри с питательными средами, стерильные пипетки, ступки и т. д. В предбокснике в биксах необходимо иметь стерильные халаты, шапочки, маски, а также в предбокснике должна быть сменная обувь. В предбокснике можно размещать термостаты, холодильники, центрифуги и другое оборудование. В боксах и предбоксниках ежедневно проводят влажную уборку, дезинфекционную обработку и облучение с помощью бактерицидных ламп в течение 30-40 минут перед началом работы и после работы.

В автоклавной необходимо иметь два автоклава: один автоклав для чистых материалов (для стерилизации посуды, питательных сред, инструментов); другой автоклав для инфицированных материалов (для обезвреживания инфицированных инструментов и материалов).

Моечная предназначена для мытья посуды. Посуду, пипетки и инструменты, загрязненные инфицированным материалом, моют только после стерилизации. В ней размещают сушильные шкафы.

Виварием называется помещение, используемое для содержания лабораторных животных. В виварии необходимо иметь карантинное отделение, комнаты для экспериментальных и здоровых животных, помещения для мытья и дезинфекции клеток, инвентаря и спецодежды, кухню для приготовления корма, кладовую, фуражную, трупосжигательную печь. Все помещения вивария должны быть изолированы друг от друга.

Правила работы в бактериологической лаборатории

Сотрудники лаборатории обязаны соблюдать следующие правила:

1. Работать разрешается в специальной одежде – халате и шапочке. В боксе работают в стерильном халате, маске, шапочке, при необходимости  надевают резиновые перчатки и очки. Обязательно меняют обувь.

2. Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнюю одежду на халат.

3. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.

4. Весь материал, поступающий в лабораторию на анализ, должен рассматриваться как инфицированный. Поэтому при распаковке материала необходимо соблюдать осторожность. Емкости  следует обтирать снаружи дезинфицирующим раствором и ставить их на подносы или в кюветы.

5. В случае попадания инфицированного материала на халат, руки, стол, обувь необходимо провести дезинфекцию и сообщить об этом заведующему лабораторией.

6. Зараженный материал обязательно уничтожают автоклавированием. Инструменты, а также поверхность рабочего стола после работы дезинфицируют.

7. Запрещается выносить из лаборатории оборудование, инвентарь, материалы без предварительной их дезинфекции.

8. Пипетки, предметные и покровные стекла и другую посуду, бывшую в употреблении, обеззараживают, погружая в дезраствор.

9. По окончании работы рабочее место приводят в порядок и тщательно дезинфицируют. Культуры микроорганизмов, необходимые для дальнейшей работы, убирают на хранение в холодильник.

В бактериологической лаборатории ведется следующая документация:

1. Инвентарная книга музейных штаммов культур.

2. Журнал учета движения материала в лаборатории.

3. Журнал учета стерилизации и уничтожения инфицированного материала.

4. Журнал учета зараженных подопытных животных.

5. Журнал исследований (экспертиз).

Классификация микроорганизмов

Классификация - это распределение организмов на основе учета их общих признаков на группы или таксоны. Классификация основывается на внешних признаках организмов (фенотипе) и генетических особенностях организмов (генотипе).

В настоящее время мир микроорганизмов подразделяют на следующие формы:

1. Неклеточные формы:

- прионы;

- вироиды;

- вирусы.

2. Клеточные формы:

2.1. Прокариоты:

Домен Bacteria:

- бактерии с тонкой клеточной стенкой (грамотрицательные);

- бактерии с толстой клеточной стенкой (грамположительные);

- бактерии без клеточной стенки (микоплазмы).

Домен Archaea:

- архебактерии.

2.2. Эукариоты:

- простейшие;

- грибы.

В основу классификации живого мира положен тип строения клетки – эукариотический или прокариотический. Главными отличиями прокариотической (бактериальной) клетки от эукариотической являются: отсутствие следующих структур: оформленного ядра (то есть ядерной мембраны), внутриклеточных мембран, ядрышек, комплекса Гольджи, лизосом, митохондрий.

В классификации микробов используются следующие таксономические категории: царство, отдел, класс, порядок, семейство, род, вид. Основной таксономической единицей является вид. Название микроорганизмам присваивается в соответствии с правилами Международного кодекса номенклатуры бактерий. Для обозначения видов бактерий принята двойная (бинарная) номенклатура, предложенная еще в XVIII веке Карлом Линнеем. Согласно номенклатуре, латинскими буквами сначала пишется название рода (родовое название), а затем - название вида (видовое название). Если микроорганизм идентифицирован только до рода, то вместо видового названия пишется слово sp. (species - вид). Родовую принадлежность микроба обозначает какой-либо морфологический признак или фамилия ученого, открывшего микроб, а видовую принадлежность обозначает либо вид  колоний, либо среда обитания микроорганизма. Например, Escherichia coli указывает на то, что микроб открыл Т. Эшерих, а обитает микроб в кишечнике. Образование и применение научных названий микроорганизмов регламентируют “Международный кодекс номенклатуры бактерий”, “Международный кодекс ботанической номенклатуры” (грибы), “Международный кодекс зоологической номенклатуры” (простейшие) и решения Международного комитета по таксономии вирусов.

Бактерии обладают высокой изменчивостью. Для внутривидовой дифференциации бактерий, отличающихся по определенному признаку, используют понятие  “вариант” (сокращенно – «вар»). Выделяют варианты, отличающиеся по антигенным признакам (серовары), варианты, устойчивые к бактериофагам (фаговары), а также варианты, различающиеся по биохимическим (хемовары), биологическим или культуральным признакам (биовары).

В микробиологии используются специализированные термины: чистая культура, смешанная культура, штамм,  клон.

Культура - это совокупность микроорганизмов, выращенных на плотной или жидкой питательной среде в условиях лаборатории. Культуру микроорганизмов, состоящую из особей одного вида называют чистой культурой. Смешанной культурой называют смесь микроорганизмов разных видов, выросших в питательной среде при посеве исследуемого материала или при попадании в питательную среду, засеянную одним видом микроба, других видов микроорганизмов из внешней среды.

Штамм (нем. stammen – происходить) - это чистая культура определенного вида микроорганизма, выделенная из исследуемого материала, взятого в определенный момент из конкретного объекта.

 Клон (греч. klon – отводок) - это потомство (культура) одной материнской клетки (вирусной частицы) определенного вида микроорганизмов.

Принципы классификации микроорганизмов

Минимальный перечень данных, необходимых для описания бактерий, включает в себя следующие признаки.

1. Морфологические и тинкториальные свойства - величина, форма, клеток, наличие капсулы, спор, жгутиков, способность окрашиваться красителями.

2. Тип дыхания – потребность в  газообразном кислороде.

3. Биохимические свойства - способность ферментировать углеводы, расщеплять белки.

4. Антигенная структура – наличие антигенов.

5. Чувствительность к бактериофагам.

6. Химический состав - содержание и состав углеводов, липидов, белков.

7. Генетическое родство с другими бактериями.

В микробиологии созданы определители для идентификации микроорганизмов: “Определитель бактерий и актиномицетов” Н.А. Красильникова (1949 г.), “Определитель микробов” Р.А. Циона (1948 г.) и “Определитель бактерий” Д.Х. Берджи. Наиболее распространенной является классификация американского бактериолога Д.Х. Берджи. Определитель Берджи систематизирует все известные бактерии на 4 отдела:

Отдел I. Gracilicutes (лат. gracilis - изящный, тонкий, cutis – кожа) - виды с тонкой клеточной стенкой, окрашивающиеся грамотрицательно.

Отдел II. Firmicutes (лат. firmus - крепкий, cutis – кожа) - бактерии с толстой клеточной стенкой, окрашивающиеся грамположительно. 

Отдел III. Tenericutes (лат. tener - нежный, cutis – кожа) - бактерии, не имеющие клеточной стенки – микоплазмы.

Отдел IV. Mendosicutes (лат. mendosus - неправильный, cutis – кожа) - архебактерии. В этот отдел включены метанобразующие, сероокисляющие, микоплазмоподобные, термоацидофильные и другие наиболее древние по происхождению бактерии.

Морфология бактерий

 

Бактерии невооруженным глазом не видны. Для их изучения используют световые и электронные микроскопы. Клетки бактерий измеряют в микрометрах (1 мкм равен 10-3 мм), а элементы тонкого строения бактерий измеряют в нанометрах (1 нм равен 10-3 мкм). Средние размеры бактерий составляют 0,5-3 мкм.

По форме клеток бактерии подразделяются на 3 основные группы:

- шаровидные формы или кокки;

- палочковидные формы;

- извитые формы.

Кокки имеют сферическую форму в виде правильного шара, эллипса, боба. В зависимости от взаимного расположения клеток после деления различают следующие виды кокков:

- микрококки делятся в разных плоскостях и располагаются одиночно, парами или беспорядочно;

- стафилококки делятся в различных плоскостях и располагаются гроздьями;

- диплококки делятся в одной плоскости, располагаются попарно;

- стрептококки делятся в  одной плоскости, располагаются в виде цепочки;

- тетракокки делятся в двух взаимно перпендикулярных плоскостях, располагаются по четыре;

- сарцины делятся в трех взаимно перпендикулярных плоскостях  и   образуют  правильные  пакеты  по   8-16  клеток.

Палочковидные бактерии имеют цилиндрическую форму с округлыми, заостренными или тупыми концами. Палочковидные бактерии подразделяются на 2 группы:

- бактерии – не образующие спор палочки;

- бациллы - палочки, образующие споры. Палочки, у которых диаметр споры превышает   ширину   вегетативной   клетки,   называют   клостридиями.

По размерам палочковидные бактерии распределяются на группы:

- мелкие – до 1,5 мкм;

- средних размеров (1,5 – 3 мкм);

- крупные (более 3 мкм).

По форме концов выделяют:

- закругленные (кишечная палочка);

- обрубленные (возбудитель сибирской язвы);

- заостренные (каулобактеры);

- утолщенные (возбудитель дифтерии);

- расщепленные (бифидобактерии).

По взаимному расположению клеток:

- беспорядочно расположенные (сальмонеллы);

- попарно расположенные (диплобактерии);

- цепочками (стрептобактерии);

- в виде хвороста (микобактерии туберкулеза);

- в виде пачек сигарет (возбудитель лепры);

- под углом (возбудитель дифтерии).

Извитые бактерии объединяют:

- вибрионы - имеют цилиндрическую изогнутую форму, образуя 1/2-1/4 завитка спирали, по форме напоминают запятую;

- спириллы имеют форму спирально извитых палочек с 4-6 витками;

- спирохеты спирально извитые формы, у которых существуют 2 типа витков: первичные витки, образованные изгибами протоплазматического цилиндра, и вторичные витки, представляющие изгибы всего тела.

Методы определения вида микробов

Определение вида микроорганизмов проводится с использованием следующих методов исследования:

- бактериоскопический метод – изучение микроорганизмов путем их микроскопирования в живом или окрашенном состоянии;

- бактериологический метод – изучение характера роста микробов на плотных и в жидких питательных средах, определение ферментативной активности микробов, идентификация микробов (определение вида);

- серологический метод – изучение антигенного строения микробов;

- биологический метод (экспериментальный) – изучение патогенных свойств бактерий с использованием лабораторных животных;

- молекулярно-биологический метод – изучение генетических особенностей микробов.

С помощью этих методов изучают следующие свойства микробов:

- морфологические свойства – форма и размер бактерий;

- тинкториальные свойства – отношение бактерий к красителям;

- культуральные свойства – характер роста на питательных средах;

- биохимическая активность – ферментация углеводов, белков и других соединений;

- антигенная структура бактерий;

- патогенность;

- генетические особенности микробов.

Бактериоскопический метод исследования

Клетки микроорганизмов можно изучать как в живом состоянии (метод раздавленной капли и метод висячей капли), так и в фиксированном и окрашенном состоянии.

Метод раздавленной капли. На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Капля не должна выходить за края покровного стекла. Микроскопируют препарат с объективом х40. Метод раздавленной капли удобен для исследования подвижности бактериальных клеток, а также для изучения крупных микроорганизмов - плесневых грибов, дрожжей.

Метод висячей капли. Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят каплю бактериальной суспензии. Затем специальное предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазаны вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Препарат переворачивают покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или краев. Для микроскопии используют вначале сухой объектив х8, под увеличением которого находят края капли, а затем устанавливают объектив х40 и исследуют препарат.

Приготовление фиксированных препаратов. Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю воды или изотонического раствора хлорида натрия, в которую бактериологической петлей вносят исследуемый материал и круговыми движениями петли распределяют его таким образом, чтобы получить тонкий и равномерный мазок диаметром 1-1,5 см. Если исследуют жидкий материал, то его наносят на предметное стекло непосредственно петлей и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе.

Для фиксации используют физические и химические методы. Для фиксации мазка физическим методом предметное стекло медленно проводят 3 раза через пламя горелки. Мазки крови, мазки-отпечатки органов и тканей фиксируют химическим методом путем погружения их на 5-20 минут в метиловый или этиловый спирт, смесь Никифорова и другие фиксирующие жидкости.

Для окрашивания микробов используют простые и сложные методы. При простом методе фиксированный мазок окрашивают каким-либо одним красителем, например, водным раствором фуксина (1-2 минуты) или метиленовым синим (3-5 минут), промывают водой, высушивают и микроскопируют. Сложные методы окрашивания включают последовательное использование нескольких красителей. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других.

Техника микроскопирования с иммерсионной системой

Для бактериоскопического исследования микроорганизмов наиболее часто применяют иммерсионные объективы. В отличие от сухих объективов, при работе с которыми между препаратом и линзой объектива находится воздух, при использовании иммерсионных объективов между линзой объектива и препаратом помещают жидкость, имеющую показатель преломления, близкий показателю преломления стекла. Роль такой жидкости выполняет иммерсионное масло, чаще всего - кедровое масло. Лучи света, проходя через однородную оптическую среду (стекло и масло), не меняют своего направления. Это позволяет существенно повысить четкость изображения. Иммерсионные объективы отличаются от сухих объективов по своему устройству (подвижная фронтальная линза) и по внешнему виду: на их оправе имеется черная круговая нарезка и выгравировано обозначение МИ (масляная иммерсия).

Для микроскопии с иммерсионным объективом требуется хорошее освещение объекта. Для этого используется дополнительная система линз, расположенная под предметным столиком – конденсор. При подготовке микроскопа к работе конденсор с помощью специального винта перемещают вверх до упора. На окрашенный мазок наносят каплю иммерсионного масла и помещают стекло на предметный столик. Под визуальным контролем сбоку опускают объектив до соприкосновения с каплей. После погружения объектива в каплю масла вращением макрометрического винта определяют контуры объекта, а затем с помощью микрометрического винта устанавливают четкое изображение объекта.

После окончания микроскопии иммерсионный объектив поднимают, препарат убирают, а фронтальную линзу объектива протирают от остатков масла  мягкой салфеткой. Затем объектив переводят на малое увеличение или в нейтральное положение и опускают конденсор.

Контрольные вопросы по теме занятия:

1. Устройство бактериологической лаборатории.

2. Правила работы в бактериологической лаборатории.

3. Принципы классификации микроорганизмов.

4. Формы бактериальных клеток.

5. Методы определения вида микробов.

6. Техника микроскопирования с иммерсионной системой.

Литература для подготовки к занятию:

Основная литература:

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. А.А. Воробьева. М., 2004.

Дополнительная литература:

1. Л.Б. Борисов. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2002.

2. О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. М., ГЭОТАР-МЕДИА, 2005.

3. Медицинская микробиология. Справочник. Под ред. В.И. Покровского и О.К. Поздеева. М., ГЭОТАР-МЕД, 1998.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

25739. Журналистское произведение как текст – жанровые разновидности 29.76 KB
  В прессе предлагают разделять тексты на 5 групп: оперативноновостные заметка оперативноисследовательские интервью репортажи отчеты исследовательсконовостные комментарий рецензия корреспонденция исследовательские статья письмо обозрение исследовательскообразные очерк фельетон. Информационные новость заметка интервью репортаж отчет реплика Аналитические корреспонденция статья комментарии рецензия обозрение Художественнопублицистические очерк зарисовка эссе сатирические жанры памфлет...
25740. Явления демассификации и дигитализации СМИ 19.61 KB
  Явления демассификации и дигитализации СМИ Под воздействием новых информационных технологий происходят значительные изменения в области массовых коммуникаций. Рассмотрим основные процессы лежащие в основе модификации современной системы СМИ. Под этим подразумевается перевод содержания СМИ во всех его формах текстовой графической звуковой в цифровой формат понятный современным компьютерам. Дигитализация устраняя различия между отдельными СМИ и уравнивая их содержание прокладывает дорогу их конвергенции.
25741. Социально-политические предпосылки возникновения журналистики 21.3 KB
  Социальнополитические предпосылки возникновения журналистики Этапы возникновения журналистики: Изобретение письменности возможность передачи информации из поколения в поколение; Изобретение книгопечатания 1450г. Появилась потребность в директивной управленческой информации более массового свойства нежели информация межличностного или коллективного публичного общения а также в формировании общественного мнения. Носителем информации служили дощечки покрытые гипсом. К материальнотехническим предпосылкам возникновения журналистики...
25742. Особенности информационной инфраструктуры в национальных границах различных стран 25.07 KB
  С точки зрения теории и практики массовой информации можно рассматривать четыре виды инфраструктуры: компьютерную информационную интернетинфраструктуру социальную. Интернетинфраструктура объем электронной торговли; количество домашних пользователей Интернета; количество пользователей интернета в бизнесструктурах; количество пользователей интернета использующих его для интернета. для определения рейтинга стран мира является особое внимание к деятельности связанной с Интернетом. В то время как американские фермеры не первый год...
25743. Российская информационная инфраструктура 19.57 KB
  Компьютерная количество ПК на душу населения; количество ПК на семью; количество ПК установленных в государственном секторе и в коммерческих структурах; количество ПК для учебных заведений; ПК объединенных в сети; расходы на компьютерное оборудование и программное обеспечение ПО. Информационная количество телефонных линий на семью; количество сбоев на линии; стоимость переговоров на местных линиях; количество сотовых телефонов на душу населения; количество телевизоров на душу населения; число абонентов кабельного ТВ....
25744. Профессионально-этические правила и нормы в деятельности журналиста 31.71 KB
  Профессиональноэтические правила и нормы в деятельности журналиста Со времени появления независимой журналистики у нас в стране этические вопросы её существования становятся всё острее. В нашем обществе успел уже сформироваться негативный образ жёлтой прессы продажных журналистов и просто журналюг. С одной стороны журналистика считается престижной профессией. С другой стороны сохраняется откровенно настороженное отношение к журналистам со стороны не только персон которые могут объектами журналистского профессионального интереса но...
25747. Анализ структуры и динамики себестоимости продукции 27 KB
  Анализ структуры затрат на производство начинается с определения удельных весов в процентах отдельных элементов затрат в общей сумме затрат и их изменения за отчетный период. Наиболее общим для многих отраслей элементами затрат являются: материальные трудовые расходы на оплату труда отчисления на социальные нужды амортизация и прочие расходы в состав которых включаются все остальные затраты не отраженные в предыдущих элементах. Изучение структуры затрат по этим элементам а при необходимости и по важнейшим составным их частям а также...