16944

Биотест веществ ауксиновой природы

Лекция

Биология и генетика

Биотест веществ ауксиновой природы. Объект: Капуста краснокочанная Brassica okvacea сорт Мехневская. Цель: Сравнить физиологическое действие искусственных аналогов ауксина 24D и aНУК и естественного ауксина ИУК на прорастающие семена капусты. Выполнение работы. Рабо

Русский

2013-06-28

89 KB

6 чел.

Биотест веществ ауксиновой природы.

Объект: Капуста краснокочанная (Brassica okvacea) сорт Мехневская.

Цель: Сравнить физиологическое действие искусственных аналогов ауксина (2,4-D и a-НУК) и естественного ауксина (ИУК) на прорастающие семена капусты.

 Выполнение работы.

Работу выполняем, разбившись на три группы. Каждая группа исследует влияние только одного вещества на прорастающие семена, результаты затем объединяются. Проростки выращиваем из семян на среде MS. Влияние веществ исследуем в следующих концентрациях в среде: 0,002 мг/л, 0,02 мг/л, 0,2 мг/л и 2 мг/л против контроля, не содержащего этого вещества. Все вещества ауксиновой в природы вносим в среду для выращивания проростков в виде растворов в ДМСО, поэтому необходимо сделать так, чтобы во всех пробах (включая контроль) концентрация ДМСО была одинаковой. Во избежание инфицирования среды для выращивания проростков все работы проводим в ламинар-боксе, используя стерильную посуду и инструменты.

Наша группа работала с ИУК.

Ход работы.

  1.  Готовим раствор ИУК в ДМСО с концентрацией 20 мкг/мл в количестве 1мл. Для этого при помощи микропипеткой в эппендорф наливаем 995 мкл ДМСО и 5 мкл раствора ИУК концентрацией 4 мг/мл.
  2.  Плавим среду MS на водяной бане.
  3.  Отмеряем с помощью мерного цилиндра 50 мл среды MS, переливаем в стакан.
  4.  Микропипеткой в стакан вносим один из растворов ИУК (4 мг/мл или 20 мкг/мл) и если необходимо ДМСО в соответствии с таблицей 1. В случае контроля – только ДМСО.
  5.  Содержимое стакана переливаем в чашку Петри, закрываем, ставим застывать в течение 15 минут. Чашку Петри маркируем – указываем концентрацию ИУК в среде.

Пункты 3 – 5 повторяем для каждой концентрации ИУК в среде, т.е. 5 раз. Таким образом, у нас получается по одной чашке Петри – каждая со своим содержанием ИУК, плюс одна контрольная.

  1.  Проводим поверхностную стерилизацию семян. Для этого на дно чашки Петри кладем два слоя фильтровальной бумаги, сверху насыпаем семена. Обрабатываем стерилизующим раствором (5% раствор H2O2 в 96% этаноле), при этом следим, чтобы все семена оказались смоченными, но не «плавали».
  2.  Ждем, пока поверхность семян не станет сухой (примерно 3 минуты).
  3.  Переносим семена в чашки Петри с застывшей средой MS, приготовленной в пунктах 3 – 5. В каждую чашку помещаем по 30 семян. Следим, чтобы семена прилипли к среде.
  4.  Проводим герметизацию чашек Петри и окончательную маркировку, включающую дату постановки эксперимента и указание внесенного вещества ауксиновой прроды.
  5.  Ставим на инкубацию на 14 дней. Условия инкубации t = 20ºC , 7000 люкс люминесцентные белые ламппы, 16 часов день, 8 часов ночь.
  6.  По окончании инкубации проводим измерение длины корня и длины гипокотиля проростков. Результаты заносим в таблицу 2.

Таблица 1. Приготовление среды для постановки эксперимента.

Концентрация ИУК в среде, мг/л

0

0,002

0,02

0,2

2

Объем среды MS, мл

50

50

50

50

50

Содержание ИУК в чашке, мг

0

10- 4

10- 3

10- 2

10- 1

Объем р-ра ИУК (4 мг/мл), мкл

0

0

0

0

25

Объем р-ра ИУК (20  мкг/мл), мкл

0

5

50

500

0

Объем ДМСО, мкл

500

495

450

0

475

Таблица 2.1. Экспериментальные данные по длине корня.

Таблица 2.2. Экспериментальные данные по длине гипокотиля.

Данные, полученные тремя группами по всем веществам (ИУК, 2,4-D и a-НУК), объединяем и заносим в таблицы 3 и 4. По этим данным строим графики зависимости относительной длины корня и гипокотиля (разности между матожиданием длины, полученной в эксперименте при данной концентрации ауксиноподобного вещества, и матожиданием в контроле) от десятичного логарифма концентрации ауксиноподобного вещества.

Таблица 3. Объединенные данные по влиянию веществ ауксиновой природы на длину корня 14-тидневного проростка капусты.

Таблица 4. Объединенные данные по влиянию веществ ауксиновой природы на длину гипокотиля 14-тидневного проростка капусты.

Кроме того, у растений, выращенных на среде, содержащей от 0,02 мг/л и более, наблюдаем нарушение геотропизма: в случае 0,02 мг/л и 0,2 мг/л – слабое, в случае 2 мг/л – сильное.

Обсуждение результатов.

Первое, что бросается в глаза, это наличие оптимума концентрации ауксиноподобных веществ, при котором длина корня и гипокотиля равна или больше таковой контрольных растений. При других концентрациях наблюдается подавление роста этих органов. Для корня этот оптимум лежит в районе 0,02 мг/л, для гипокотиля – в районе 0,02 – 0,2 мг/л. Исключение составляет 2,4-D, который действует угнетающе на рост корня во всех исследованных в данной работе концентрациях. Между тем, известно, что ауксины являются стимуляторами роста растений путем растяжения клеток. Ингибирующий эффект у ауксинов тоже есть, но он заключается не в подавлении роста, а подавлении дифференцировки, как, например, в случае апикального доминирования.Тем не менее, мы наблюдаем подавление роста особенно  при высоких концентрациях веществ ауксиновой природы. Это можно объяснить тем, что высокие концентрации ауксинов запускают синтез гормона-антагониста этилена. Последний угнетает рост побегов в длину и ингибирует рост главного корня. Именно эти эффекты мы и наблюдаем в опыте.

Ингибирующий эффект при высокой концентрации веществ ауксиновой природы (2 мг/л) наиболее сильно проявляется у искусственных аналогов ауксина: сильнее всего в случае 2,4-D, затем идет a-НУК, и еще слабее у ИУК – естественного ауксина. Объяснить это следует так. Естественные ауксины могут переводиться в физиологически неактивное состояние за счет обратимого гликозилирования и необратимого окисления. Синтетические аналоги ауксина (2,4-D, a-НУК) хорошо связываются с ауксиновыми рецепторами, но практически не подвергаются деградации и гликозилированию. Поэтому эти вещества в высокой концентрации вызывают более интенсивный синтез этилена, чем естественные ауксины в той же концентрации, что и обуславливает их ингибирующий эффект. Более сильное действие 2,4-D по сравнению с a-НУК можно связать с тем, что 2,4-D,вероятно, более эффективно взаимодействует с системой ауксинзависимого синтеза этилена, а так же, возможно, с тем, что a-НУК несколько легче подвергается дезактивации в растительных тканях.

Мы видим, что действие экзогенных ауксинов на корень сильнее, чем на гипокотиль. Это, по всей видимости, связано с тем, что гипокотиль покрыт кутикулой, а корень – нет. Кутикула затрудняет проникновение ауксинов извне, поэтому в тканях гипокотиля концентрация ауксинов возрастает в меньшей степени, чем в тканях корня.

При высоких концентрациях веществ ауксиновой природы наблюдается нарушение положительного геотропизма корня. Известно, что за геотропизм корня отвечает ауксин. При отклонении корня от вертикального положения потоки ауксинов перераспределяются таким образом, чтобы концентрация этих гормонов была больше в верхней части корня, что ведет к усиленному растяжению клеток в этой области и загибанию корня вниз. Экзогенные ауксины при высоких концентрациях распределяются по корню равномерно. На этом фоне, вероятно, естественные градиенты этих гормонов незначительны, и все области корня растут одинаково независимо от их пространственного расположения, что, по-видимому, и объясняет нарушение геотропизма.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

33918. Мода. Определение моды в дискретных вариационных рядах 15.34 KB
  Определение моды в вариационных рядах с равными интервалами.6 где x0 – нижняя граница модального интервала модальным называется интервал имеющий наибольшую частоту; i – величина модального интервала; fMo – частота модального интервала; fMo1 – частота интервала предшествующего модальному; fMo1 – частота интервала следующего за модальным.
33919. Понятие медианы, квартилей, децилей 11.29 KB
  Понятие медианы квартилей децилей Медианазначение признака которое делит стат.совти имеет значение признака не МЕНЬШЕ медианы а другая половина – значение признака не больше медианы. Значение изучаемого признака всех ед.совти не четное то значение признака находящееся в середине ранжированного ряда будет являться медианой а если число ед.
33920. Определение структурных средних в дискретных вариационных рядах 14.62 KB
  Мода это наиболее часто встречающийся вариант ряда. Модой для дискретного ряда является варианта обладающая наибольшей частотой. Медиана это значение признака которое лежит в основе ранжированного ряда и делит этот ряд на две равные по численности части.
33921. Определение структурных средних в интервальном вариационном ряду 41.92 KB
  При вычислении моды для интервального вариационного ряда необходимо сначала определить модальный интервал по максимальной частоте а затем значение модальной величины признака по формуле: где: значение моды нижняя граница модального интервала величина интервала заменить на iМе частота модального интервала частота интервала предшествующего модальному частота интервала следующего за модальным Медиана это значение признака которое лежит в основе ранжированного ряда и делит этот ряд на две равные по...
33922. Закономерные изменения частот за счет изменения варьирующего признака в вариационных рядах 12.67 KB
  Главной задачей анализа вариационных рядов является выявление закономерностей распределения и характера распределения. Тип закономерности распределения это отражение в вариационных рядах общих условий определяющих распределение в однородной совокупности. Следовательно должна быть построена кривая распределения.
33923. Виды дисперсий. Правило сложения дисперсий 23.06 KB
  Правило сложения дисперсий Вариация признака происходит в резте влияния на него различных факторов. Признакам на вариации под влиянием осн. Отклонение индивидуальных значений результативного признака от ср.значения результативного признака для всей совокупности можно представить как сумму отклонений где i текущий номер признака общей совти; j – текущий номер группы в интером ряду распределения; среднее значение результативного признака в jгруппе.
33924. Использование показателей вариации в анализе взаимосвязей социально-экономических явлений 15.36 KB
  Эмпирическое корреляционное отношение характеризует тесноту связи; рассчитывается как корень квадратный из эмпирического коэффициента детерминации Оба показателя находятся в пределах от 0 до 1 при этом чем ближе показатели к 1 тем связь между изучаемыми признаками теснее. Для оценки тесноты связи с помощью корреляционного отношения можно воспользоваться шкалой Чеддока: 0103связь слабая 0305связь умеренная 0507связь заметная 0709связь тесная 09099связь весьма тесная.
33925. Теоретические основы выборочного наблюдения 12.04 KB
  Теоретические основы выборочного наблюдения. Выборочное наблюдение относится к несплошному виду наблюдения. Преимущества выборочного наблюдения: экономия средств оперативность получения результатов возможность расширения программы наблюдения возможность проверки качества продукции которая при этом уничтожается высокая достоверность результатов. Совокупность которая получилась в результате отбора единиц для наблюдения наз.
33926. Простая случайная выборка 12.98 KB
  Простая случайная выборка отбор единиц из генеральной совокупности путем случайного отбора но при условии вероятности выбора любой единицы из генеральной совокупности.возвращается в генер. не возвращается в генеральную совокупность. Характеристика генер.