22026

Метод ДСК

Лекция

Биология и генетика

Температуры плавления некоторых синтетических фосфолипидов Жирные кислоты Название остатка жирной кислоты Сокращённое название фосффолипида Температура плавления Tc oC 14:0 Миристоил ДМЛ 23 16:0 Пальмитоил ДПЛ 41 18:0 Стеароил ДСЛ 58 18:1 Олеил ДОЛ 21цисформа Полное название фосфолипидов: ДМЛ 12димиристоилфосфатидилхолин еще одно возможное сокращение ДМФХ€ и так далее. На первом этапе нас будут интерессовать три из них: Температура фазового перехода плавления Tc. T полуширина фазового перехода Tc температура...

Русский

2013-08-04

195 KB

10 чел.

Метод ДСК

   В биологических мембранах липидный слой по всем имеющимся данным представляет собой жидкое тело с вязкостью, близкой к вязкости подсолнечного масла.

   Строго говоря текучесть мембраны ограничена внутренней гидрофобной фазой, которая состоит из углеводородных цепей жирных кислот. Эта фаза, однако, не всегда бывает жидкой. При охлаждении до температур ниже 10оС мембраны замерзают, т.е. жидкая фаза затвердевает, приобретая свойства двумерного кристалла.

   В мембранах, образованныых синтетическими липидами, фазовый переход из жидкого в твердое состояние может происходить при более высоких температурах, в зависимости от химического состава фосфолипида. В таблице 1 приведены температуры фазовых переходов некоторых синтетических фосфатидилхолинов (лецитинов).

Таблица 1. Температуры плавления некоторых синтетических фосфолипидов

Жирные кислоты

Название остатка жирной кислоты

Сокращённое название фосффолипида

Температура плавления, Tc, oC

14:0

Миристоил

ДМЛ

23

16:0

Пальмитоил

ДПЛ

41

18:0

Стеароил

ДСЛ

58

18:1

Олеил

ДОЛ

-21(цис-форма)

   Полное название фосфолипидов: ДМЛ - 1,2-димиристоилфосфатидилхолин (еще одно возможное сокращение - „ДМФХ”) и так далее.

   Для изучения фазовых переходов при нагревании используют метод дифференциальной сканирующей микрокалориметрии (сокращенно - ДСК). Не останавливаясь на конструкции прибора, отметим только, что в конечном счете с его помощью записывается кривая теплоемкости, т.е. зависимость теплоемкости липидов или мембран в суспензии от температуры:

(1)

Рис.1. Фазовые переходы в суспензии фосфолипидных везикул (липосом) по данным дифференциальной сканирующей микрокалориметрии (ДСК).

   Перед приготовлением липосом к фосфолипидам было дабавлено разное количество холестерина; его содержание в молярных процентах указано у кривых.
   По оси ординат отложена теплоемкость, по оси абсцисс - температура,
K.

   Метод называется дифференциальным, потому что измеряется только теплоемкость суспендированного материала на фоне гораздо большей теплоемкости раствора сравнения.

   Примеры таких кривых даны на рис.1, где приведены кривые ДСК для дистеароилфосфатидилхолина (ДСЛ). На этих кривых, в частности, видно увеличение температурного интервала фазового перехода пр добавлении к липиду в мембране холестерина.

   На рисунке 2 слева более подробно обозначены параметры кривой ДСК. На первом этапе нас будут интерессовать три из них:

  1.  Температура фазового перехода ("плавления") Tc.
  2.  Температурный интервал ("ширина") фазового перехода.
  3.  Общее количество тепла Q, поглощенного при плавлении.Оно представляет собой площадь под кривой ДСК, т.е. функции C=f(T)

   Рис.2. Характеристик фазовых переходов в липидах по данным дифференциальной сканирующей микрокалориметрии.
   
С-теплоемкость.
   
T - полуширина фазового перехода,
   
Tc - температура плавления.

Кривые плавления

   Кривой плавления называется зависимость доли жидкой фазы в общем количестве изучаемого вещества, в данном случае - липидов мембран.

Рис.3. Кривая плавления липиддов в липосомах, приготовленных из ДПЛ.


    - доля жидкой фазы,    
T - температура,
   
Tc - температура плавления ( = 0,5), ml - количество липида в жидкой фазе, ms -количество липида в твердой фазе.

   Обозначим количество липидов в жидкой фазе через ml, а количество липидов в твердой фазе через ms. Тогда доля жидких липидов будет равна:

(2)

   На рис. 3. приведена кривая плавления дистеароил-фосфатидил холина (или дипальмитоил-лецитина, ДПЛ).

Методы измерения кривых плавления

   Для определения доли жидкой фазы в общем объеме изучаемого материала, в нашем случае, - в липидной слое мембран, можно использовать разные методы.

Анализ кривых ДСК

   Один из методов измерения кривых плавления основан на анализе кривых, полученных методом дифференциальной сканирующей калориметрии. Обратимся снова к рисунку 2.

   Пусть удельная теплота плавления липида равна Qm, а количество липодов в образце составляет m кмолей. Общее количество энергии, поглощенной образцом в интервале температур плавления T1-T2 равно очевидно площади под кривой C=f(T), т.е.

(3)

   В интервале температур от T1 до текущей температуры T расплавится количество молей липида mд , и при этом поглотится количество тепла, равное:

(4)

(заштрихованная площадь на рис.2).
   При темпаратуре
T молярная доля липидов, находящихся в жидкой фазе равна:

(5)

   Таким образом, измеряя по отношению площадей под кривой C=f(T) при разных темпраратурах, мы строим кривую плавления =f(T).

Измерение флуоресценции зондов

   Многие флуоресцирующие соединения обладают тем свойством, что спектры и (или) квантовые выходы их флуоресценции сильно зависят от окружающей среды: ее полярности, вязкости и других характеристик. Примером такого соединения может служить АНС: 1-анилино, 2-нафталенсульфонат, формула которого приведена ниже.

Рис.4. Структурные формулы некоторых флуоресцентных зондов, применяемых для измерения структцрных перестроек в липидном слое биологических и искуственных мембран.

   Это соединение при добавлении его к суспензии мембран распределяется между водной и липидной фазами, но флуоресцирует практически только АНС, растворенный в липидной фазе. Поэтому интенсивность флуоресценции возрастает при плавлении липидов мембран и снижается при замерзании.

Фазовое равновесие

   В области температур фазового перехода, если плавление происходит достаточно медленно, устанавливается равновесие:

Жидкое состояние - Твердое состоояние

   Можно считать, что вся мембрана состоит из участков жидких липидов и участков твердых липидов. Тогда обратимый процесс фазового перехода можно рассматривать как процесс превращения таких участков (доменов) друг в друга со скоростями, пропорциональными концентрации доменов, иначе говоря, фазовое равновесие можно рассматривать как обратимую химическую реакцию:

С константой равновесия, где [l] и [s] - концентрации липидов в жидкой и твердой фазах, а ml и ms - количество липида в жидкой и твердой фазах, соответственно.

   Изменение свободной энергии при плавлении моля липида G равно изменению энтальпии H минус изменение тепловой энергии TS:

(6)

причём

(7)

Отсюда находим

(8)

Таким образом, зависимость представляет собой прямую линию с угловым коэффициентом и отсечкой на оси ординат, равной. Примеры такого рода прямых даны на рис. 7. Объяснеение величины n на этом рисунке будет дано ниже.

Рис. 7. Зависимость lnK от обратной абсолютной температуры.

   Отсечка на оси ординат позволяет найти энтропию плавления (S/R), угловой коэффициент- энтальпию плавления (H/R). n - размеры кооперативной единицы плавления (объяснения в тексте).

   Таким образом, из кривых плавления, полученных экспериментально, можно найти термодинамические характеристики процесса H и S. Для этого:

  1.  Находим отношение (см. рис. 3) при разных температурах T, oC.
  2.  Строим зависимость lnK от обратной абсолютной температуры (1/(toC+173).
  3.  Тангенс угла наклона прямой равен H/R. Расчитываем H.
  4.  Отсечка по ординате равна S/R. Расчитываем S.

Кооперативность фазовых переходов

   Из кривых теплоемкости (типа приведенной на рис. 2) мы находим теплоту плавления образца Q и молярную теплоту плавления Qm=Q/m, где m - количество молей липида в образце (расчитанное как масса липида, деленная на его молекулярную массу).

   Из кривых плавления (см. рис.3), мы находим энтальпию плавления H. На первый взгляд величины Qm и H должны быть примерно равны, поскольку система не совершает механической работы. Оказалось однако, что при плавлении синтетических липидов H превышает Qm в десятки, а иногда и в сотни раз.

В чем же тут дело?
   Вернёмся к основному уравнению 6 на стр. 4. Его применение основано на том, что (цитируем) ".фазовое равновесие можно рассматривать как обратимую химическую реакцию: с константой равновесия

   Спрашивается, какие "молекулы" l переходят в этой реакции в "молекулы" s. Очевидно, что это не отдельные молекулы фосфолипида, поскольку одна молекула не может находиться в жидкой или в твердой фазе.

   Переходит из одного состояния в другое одновременно несколько молекул, образующие некий "кластер", а лучше сказать кооперативную единицу. В пределах кооперативной единицы все молекулы находятся в одинаковом состоянии, образуя либо кристаллическую (твердую) фазу либо жидкую фазу.

   Каждый кластер межет изменять свое фазовое состояние по закону "все или ничего" и притом совершенно независимо от других кластеров. В этом смысле кооперативные единицы представляют собой как бы сверх-молекулы, которые могут переходить из состояния l в состояние s.

   Изменение свободной энергии G, энтальпии H и энтропии S в уравнении 6 на стр.4 относится к молю таких "молекул". Довоьно очевидно, что если кооперативная единица образована n молекулами фосфолипида, то:

(9)

где n - размер кооперативной единицы, т.е. число молекул фосфолипида, входящих в одну кооперативную единицу.

   Таким образом из кривых плавления непоссредственно определяются термодинамичекие характериситки в расчете на n молей фосфолипида, и чтобы получить эти характеристики в расчете на один моль надо найти сначала размер кооперативной единицы n. Что можно сделать, только если одновременно получены данные калориметрии, позволяющие определить теплоту плавления Q и расчитать молярную теплоту плавления Qm.

   Разделив Qm на H, получаем n. Затем находим S, в расчете на один моль фосфолипида. В таблице 2 приведены полученные таким образом термодинамические параметры плавления синтетических фосфолипидов ( в расчете на один моль фосфолипида).

Влияние размера кооперативной единицы на форму кривых плавления

   Чтобы проанализировать влияние кооперативности фазовых переходов на форму кривых плавления и калориметрических кривых, нам придется произвести некоторые расчеты. За основу возьмем данные таблицы 2. Для примера проанализируем форму кривых плавления одного из фосфолипидов, скажем, ДПЛ.

Таблица 2. Термодинамические параметры переходов гель-жидкий кристалл для 1,2-диацил-L-фосфатидилхолинов (по M.C. Phillips, 1972)

.

Фосфолипид

Tc, oC

DH, ккал/моль

DS, кал/моль

ДОЛ (18:1)

-21

7,6

30,3

ДМЛ (14:0)

23

6,64

22,4

ДПЛ (16:0)

41

8,66

27,6

ДСЛ (18:0)

58

10,67

32,4

ДБЛ (22:0)

75

14,88

42,8


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

20325. Русский театр конца XX века 203 KB
  Началом того театра который нам привычен и знаком следует считать времена оттепели. Знаменитый двадцатый съезд КПСС перевернувший всю страну своим осуждением культа личности перевернул и театр. Появление театра ориентированного на современную драматургию и пытающего осмыслить происходящее сегодня было только делом времени.
20326. Костюм сценический и бытовой 307.5 KB
  В понятие одежды входят платье то что покрывает непосредственно тело человека обувь головные уборы. Основная функция одежды защитная физическая и моральная защита и утилитарнопрактическая так как одежда всегда связана с какойлибо практической деятельностью человека имеет определенное назначение помогая человеку приспосабливаться к окружающему миру. Любой предмет одежды это вещь которой пользуются и которая выполняет одну или несколько функций. Ношение одежды это процесс потребления данного продукта.
20327. Романтизм в европейской и русской культуре. Философско-эстетические принципы и художественная практика 7.05 MB
  Для Аристотеля эстетика это проблемы поэтики и общефилософские вопросы природы красоты и искусства; для Платона вопросы государственного контроля над искусством и роли последнего в воспитании человека. Для Тертуллиана и Фомы Аквинского эстетика аспект богословия решение задачи: с помощью искусства нацелить человека на служение Богу. У Гегеля эстетика сужает свой предмет до обширного царства прекрасного строже говоря до искусства и притом не всякого а именно изящного искусства. А свое назначение эстетика видит в определении...
20328. Основные тенденции развития русского театра 60-70-х годов XX века 62.5 KB
  Соцреалистический диктат сказался и на театре. От постановщиков требовали сдачу спектакля по частям это вело к мелочной опеке над авторами вносило нервозность в театральные коллективы и затягивало постановку новых спектаклей. Театры ставили в сезон не более 23 новых пьес.
20329. Освещение современного спектакля 59 KB
  Различные виды декорационного оформления требуют соответствующих приемов освещения. Плоскостные живописные декорации требуют общего равномерного освещения которое создается осветительными приборами общего света софиты рампа переносные приборы. Спектакли оформленные объемными декорациями требуют местного прожекторного освещения создающего световые контрасты подчеркивающего объемность оформления. При использовании смешанного вида декорационного оформления соответственно применяется смешанная система освещения.
20330. Реализм в европейской и русской культуре Х!Х века (литература, музыка, театр, живопись) 5.61 MB
  Культура России во второй половине 19 века План 1. Развитие просвещения и науки Отмена крепостного права и рост небывалыми темпами производительных сил самым непосредственном образом сказались на развитие культуры во второй половине 19 века. К концу века успехи в деле народного обучения были очевидны.
20331. Английский и испанский театр эпохи Возрождения 223.5 KB
  Вершиной испанской драматургии стало творчество Лопе де Вега художника глубоко народного великолепного мастера сценической интриги населившего сотни своих пьес бесчисленным множеством типов легко узнаваемых в тогдашней Испании и ставших достоянием всего человечества. Новаторской драматургией можно назвать творчество Лопе де Вега 15621635 написавшего сотни пьес в годы когда в Испании свирепствовала инквизиция. Пьесы Лопе де Вега стали достоянием человечества но вершиной театрального искусства эпохи Возрождения является...
20332. От античности до наших дней (техническое оборудование сцены и искусство театра) 52 KB
  найти Бояджиева Театр от греч. thйatron место для зрелищ зрелище тип архитектурной постройки предназначенной для театральных представлений. Первые театральные здания появились предположительно в VI в.
20333. Художественные течения в Западной Европе и в России конца XIX- начала XX века 199.5 KB
  В это время еще жили и работали крупнейшие мастера и преобразователи европейского искусства XIX в. Бельгийский живописец и скульптор Константин Менье 1831 1905 обращаясь к теме рабочего класса и выдвигая ее на передний план искусства осознает значимость труда рабочих и трагическую участь трудового человека. Они сделали попытку романтического бегства от действительности в €œцарство красоты€ в изображение высших потусторонних сущностей и идеализированное невозвратное прошлое €œМир искусства€ и др. Многие в своих экспериментах по...