31005

Лабораторная диагностика микоплазмозов

Доклад

Медицина и ветеринария

Животных вакцинированных против хламидийного аборта серологически не исследуют в течение одного года после вакцинации. Молекулярногенетический метод Метод предназначен для выявления ДНК хламидий с помощью полимеразной цепной реакции ПЦР в патологическом материале от животных. При получении нарастания титра антител в парных пробах сыворотки крови больных или переболевших животных в РДСК РНСК РНГА ИФА в два и более раз диагноз считают предварительным а окончательным после получения положительного результата любого прямого метода...

Русский

2013-08-25

210 KB

30 чел.

Серологический метод

Серологические исследования на хламидийные инфекции основаны на выявлении специфических антител в сыворотке крови животных (ретроспективная диагностика) в РСК, РДСК, РНСК, РНГА, ИФА; у абортировавших животных – на установлении нарастания титра антител в 4 и более раз. Животных, вакцинированных против хламидийного аборта, серологически не исследуют в течение одного года после вакцинации.

Молекулярно-генетический метод

Метод предназначен для выявления ДНК хламидий с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в патологическом материале от животных.

Суть  ПЦР заключается в амплификации, т.е. увеличении числа копий строго определенных  фрагментов молекулы ДНК или РНК (праймеров) искомого агента in vitro с последующей индикацией амплификона (амплифицируемый участок ДНК) методом электрофореза или другим методом. ПЦР позволяет идентифицировать возбудитель в количестве 1 бакт. клетки в пробе, специфичность 100%.

Диагноз на хламидиоз считают установленным:

1. При выявлении хламидий, их антигенов или ДНК в исследуемом материале любым прямым методом диагностики;

2. При получении нарастания титра антител в парных пробах сыворотки крови больных или переболевших животных в РДСК, РНСК, РНГА, ИФА в два и более раз диагноз считают предварительным, а окончательным после получения положительного результата  любого прямого метода диагностики;

При диагностике хламидиоза предусмотрены следующие сроки исследований:     -   выявление специфических антител – от 1 до 5 дней;

световая микроскопия – от 30 минут до 2 часов;

люминесцентная микроскопия – до 3 часов;

выделение и идентификация хламидий – от 7 до 40 дней;

выявление ДНК хламидий - от 4 часов до 2 суток.

Лабораторная диагностика микоплазмозов

Микоплазмозы – контагиозные заболевания животных, в том числе птиц и человека, характеризующиеся воспалением легких, полисерозитами, полиартритами и кератоконъюнктивитами; протекают, как правило, латентно или хронически, реже – остро. Среди микоплазмозов животных выделяют заболевания, являющиеся самостоятельными нозологическими единицами (см. возбудители микоплазмозов).

Возбудители микоплазмозов. По “Определителю бактерий” Д. Берджи (1997 г.) микоплазмы относят к отделу Tenericutes, классу Molicutes. Возбудителями заболеваний млекопитающих и птиц являются представители сем. Mycoplasmataceae, включающем род Ureplasma и Mycoplasma.

Род Mycoplasma объединяет 69 видов (M. mycoides subsp.mycoides – возбудитель контагиозной плевропневмонии (перипневмонии) крупного рогатого скота; M.mycoides subsp. capri – возбудитель инфекционной плевропневмонии коз; M. agalactiae – возбудитель инфекционной агалактии овец и коз; M. gallinarum – возбудитель респираторного микоплазмоза (инфекционного синусита), аэросаккулитов, воспаления половых органов у кур, индеек, гусей, уток; M. synoviae – возбудитель инфекционного синовита кур и индеек; M. flocculare – возбудитель энзоотической пневмонии свиней; M. gallisepticum – обуславливает трахеит и аэросаккулит у кур; M. anatis – воспаление респираторных органов у уток; M. gallopavonis – синусит и аэросаккулит индеек; M. meleagridis – аэросаккулит, деформацию костей у индеек; M. pullorum – трахеит у цыплят; M. bovigenitalium – маститы, воспаление мочеполовых органов у крупного рогатого скота; M. bovoculi – кератоконъюнктивиты у телят и др.).

Род Ureplasma объединяет 2 вида: U. urealyticum и U. diversum. Последний вызывает у крупного рогатого скота хроническую пневмонию (особенно у молодняка) и поражения гениталий, у свиней – снижение оплодотворяемости и возможны аборты, у кур – хроническое воспаление респираторного тракта, у индеек – препятствует оплодотворению яиц.

Исследуемый материал. Для выделения возбудителя перипневмонии крупного рогатого скота – кровь (15-20 мл для серологического исследования), бронхиальная слизь, пунктат лимфатических узлов, молоко, моча; от трупов – части пораженных легких, лимфатические узлы, плевральный экссудат. Для выделения возбудителя агалактии овец и коз от больных животных – молоко, выделения из пораженных глаз, жидкость из суставов и отечной ткани; от павших или вынужденно убитых животных – паренхиматозные органы, кровь, лимфатические узлы. Для выделения возбудителя респираторного микоплазмоза кур и индеек от трупов и вынужденно убитых – соскобы со слизистых оболочек гортани, трахеи, стенки воздухоносных мешков, части легких, головной мозг (при отсутствии патологоанатомических изменений у взрослой птицы исследуют желточные мешки, легкие, трахеи эмбрионов последних дней инкубации и 1-2-суточных цыплят).

При взятии материала при других микоплазмозах учитывают место локализации возбудителя.

Материал пересылают в лабораторию с нарочным в термосе со льдом или в замороженном виде.

Лабораторная диагностика включает микроскопию мазков из исходного материала, посев на питательные среды, постановку биопробы и проведение серологического исследования при некоторых микоплазмозах (респираторный микоплазмоз птиц, перипневмония крупного рогатого скота).

Микроскопическое исследование. В препаратах-отпечатках, окрашенных по Романовскому-Гимзе обнаруживают мелкие полиморфные образования кокковидной (0,3-0,8 мкм), нитевидной (0,3-0,8х100-150 мкм) и кольцевидной форм, окрашенные в розовый цвет. При окраске по Граму возбудитель обнаружить не удается. Рекомендуется готовить препараты-мазки из чистой 6-10-суточной культуры, полученной на жидкой среде. Микоплазмы грам «-», некоторые виды, например M. mycoides, образуют капсулу, не образуют споры и неподвижны, фильтруются через асбестовые пластинки СФ и мембранные фильтры.

Бактериологическое исследование

- культуральные свойств. Микоплазмы - факультативные анаэробы. Чистую культуру микоплазм получают на специальных и элективных искусственных питательных средах, а также путем инфицирования куриных эмбрионов (КЭ) и культур клеток. В качестве питательных сред используют мартеновский мясопептонный бульон и агар с добавлением сыворотки или крови (15-20%) овец и коз, лошадей, крупного рогатого скота и лактозы (1-2%); бульон Хоттингера с сывороткой крови (15-20%); жидкую среду Эдварда  и среду ВИЭВ (рН сред 7,4-8,0). Посевы инкубируют при 37-380С в течение 5-10 дней, ежедневно просматривая. Для угнетения роста посторонней микрофлоры к питательным средам добавляют антибиотики или ими обрабатывают после центрифугирования суспензию патматериала или же ее фильтруют через асбестовые и мембранные фильтры. Обработанный материал проверяют на бактериальную стерильность путем посева на МПБ, МПА и среду Китта-Тароцци. На жидких питательных средах при росте микоплазм наблюдают опалесценцию, а адаптированные к среде культуры дают заметное помутнение, образуют осадок. Более обильный рост отмечают ближе к стенке или на стенке пробирки, а в отдельных случаях на поверхности среды образуется маслянистая пленка. В полужидких средах микоплазмы растут по уколу, формируют крошковатые колонии, напоминающие по форме яичницу-глазунью. Колонии микоплазм врастают в агар, имеют темный центр, зернистую поверхность. Периферия колоний более светлая и менее гранулированная, чам центр. Размер колоний не превышает 0,25-2 мм.

- биохимические свойства. Ферментативную активность микоплазм изучают на жидких или полужидких питательных средах. Они обладают сложными ферментативными системами и варьируют в зависимости от вида. Представители рода Mycoplasma в отличие от рода Ureplasma не гидролизуют мочевину.

Определение патогенности проводят чаще используя те виды животных, от которых был отобран материал. Например: при перипневмонии крупного рогатого скота используют телят 6-8-месячного возраста, которым вводят лимфу из легочной ткани или экссудат из плевры подкожно в области подгрудка – в подкожной клетчатке медленно развивается перипневмонийная флегмона; при инфекционной агалактии овец и коз используют кроликов ж.м. 2,5-3,0 кг, а при необходимости овец или коз 1-2 мес. возраста. Кроликов заражают в переднюю камеру глаза суспензией патматериала или 3-4-суточной свежевыделенной бульонной культурой микоплазм (развивается кератит), а овец и коз в молочный канал, подкожно или в сустав (признаки инфекционной агалактии). При диагностике респираторного микоплазмоза кур и индеек биопробу ставят на 9-и дневных куриных или индюшиных эмбрионах, которых заражают в алантоисную полость культурой микоплазм или суспензией из патматериала, обработанной пенициллином или уксуснокислым таллием в дозе 0,1 см3. В случае гибели не менее 50% зараженных эмбрионов биопробу считают положительной. Кроме этого биопробу проводят на 1-2-месячных цыплятах или индюшатах, которых заражают интратрахеально или интраназально – через 4-20 суток появляются симптомы болез


Схема бактериологического

исследования на  микоплазмозы

                   

                      

                     


ни: трахеит, синусит, конъюнктивит, ринит.

Серологическое исследование. Для серологического исследования используют РСК, РТГА, РИД, ККРА, СКРА, метод иммунофлуоресценции, реакцию ингибиции роста. Однако они еще не нашли широкого применения, имеют ориентировочное значение и нуждаются в совершенствовании. 

Лабораторный диагноз считается установленным:

при выделении из материала культуры со свойствами, характерными для соответствующего возбудителя микоплазмоза, и гибели зараженных ею животных с последующей реизоляцией возбудителя из их органов;

при гибели хотя бы одного из зараженных животных исходным материалом и выделении из их органов культуры, характерной для того или иного возбудителя микоплазмоза, если даже в посевах из исходного материала возбудителя не выделено.

Лабораторная диагностика риккетсиозов животных

Риккетсиозы – группа заболеваний многих видов животных и человека, вызываемые внутриклеточными паразитами (риккетсиями), которые передаются в основном трансмиссивно и проявляются у животных лихорадками, пневмониями, ринитами, абортами и послеродовыми эндометритами, а также поражением лимфатической системы и форменных элементов крови.

Риккетсии названы в честь американского микробиолога Говарда Тейлора Риккетса, открывшего в 1909 году возбудителя одного из риккетсиозов – пятнистую лихорадку Скалистых гор и погибшего при его исследовании (1910).

Риккетсии довольно многочисленная группа, представленная патогенными и непатогенными видами. Патогенных видов значительно меньше. В природе риккетсии обитают преимущественно в организме насекомых (вшей, блох, клещей), а также грызунов, диких и сельскохозяйственных животных.

В соответствии с родовой, видовой принадлежностью большую часть патогенных риккетсий подразделяют на группы заболеваний: заболевания вызываемые эрлихиями – эрлихиозы, коудриями – коудриозы, неориккетсиями – неориккетсиозы, анаплазмами – анаплазмозы, бартонеллами – бартонеллезы и т.д.

Дифференциация риккетсий от вирусов и прокариотных микроорганизмов.

Риккетсии схожи как с вирусами, так и с бактериями, но существует ряд отличительных особенностей.

Сходство с прокариотными микроорганизмами:

риккетсии имеют трехслойную клеточную стенку;

содержат два типа нуклеиновых кислот, рибосомы и систему дыхания сходную с прокариотами;

окрашиваются анилиновыми красителями;

чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда, сульфаниламидам, а некоторые виды (N. hilminthoeca) к широкому спектру антибиотиков.

Сходство с вирусами:

риккетсии облигатные внутриклеточные паразиты;

самые мелкие формы риккетсий обладают фильтруемостью через бактериальные фильтры;

риккетсии способны культивироваться только в живой клетке (РКЭ, КК, организме лабораторных животных);

риккетсии обладают тканевым тропизмом;

для риккетсий характерно отсутствие строгой хозяиноспецифичности.

риккетсии стимулируют выработку интерферона


Сравнительная характеристика прокариотных

микроорганизмов и вирусов

№№

Дифференцирующие

признаки

Бакте-

рии

Микоплазмы

Риккетсии

Хламидии

Вирусы

1.

Размер до 0,5 мкм

-

+

+

+

2.

Клеточная оболочка

+

-

+

+

-

3.

Два типа нуклеиновых кислот (ДНК и РНК)

+

+

+

+

-

4.

Ядро без ограничивающей мембраны

+

+

+

+

-

5.

Бинарное деление

+

+

+

+

-

6.

Рибосомы прокариотного типа

+

+

+

+

-

7.

Окраска анилиновыми красителями

+

+

+

+

-

8.

Рост на искусственных питательных средах

+

+

-

-

-

9.

Рост в живой клетке (РКЭ, КК, организме лабораторных животных)

-

+

+

+

+

10.

Ингибирование антибиотиками и сульфаниламидами

+

+

+

+

11.

Образование внутриклеточных включений в пораженной клетке

-

-

-

+

+

12.

Наличие в биологическом цикле членистоногих

-

-

+

-

Таким образом, для микроорганизмов порядка Rickettsiales свойственны:

плеоморфизм;

неподвижность;

грамотрицательное окрашивание;

патогенность для многих видов сельскохозяйственных животных, человека и членистоногих;

невысокая устойчивость во внешней среде (кроме C. burnetii);

особая чувствительность к антибиотикам тетрациклинового ряда.

Основной отличительной особенностью от прокариотных микроорганизмов и вирусов является наличие в цикле развития риккетсий членистоногих (вшей, клещей, блох).

В настоящее время из группы риккетсиозов наибольшую актуальность имеют: Ку-лихорадка, риккетсиозный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота, анаплазмоз, эперитрозооноз.

Ку-лихорадка (от анг. guery – неясный, неопределённый, сомнительный) – природно-очаговая зооантропонозная болезнь домашних, промысловых и диких млекопитающих и птиц, чаще протекающая бессимптомно, характеризуется развитием ринита, бронхита, пневмонии, конъюнктивита, плеврита, мастита (у самцов орхита), а также абортами.

Риккетсиозный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота (Инфекционный кератоконъюнктивит, инфекционный кератит, инфекционное воспаление глаз) - остро протекающее заболевание с поражением роговицы и конъюнктивы глаза преимущественно крупного рогатого скота.

Анаплазмоз – трансмиссивное заболевание крупного и мелкого рогатого скота, а также других домашних и диких животных, протекающее осро или хронически с признаками остро выраженной анемии, перемежиющейся лихорадкой, нарушением работы сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта.

Эперитрозооноз - это кровопаразитарная болезнь свиней всех возрастов, протекающая остро  или  хронически, характеризующуяся  желтушностью, анемией, затрудненным  дыханием,  слабостью,  лихорадкой, некрозами, отставанием в росте и развитии.

Возбудители риккетсиозов. Согласно 9-го издания (1994) “Определителя бактерий Берджи” в 2-х томах (М:., Мир, 1997) риккетсии представленны в группе (секции) 9 “Риккетсии и хламидии”, в которой упразднена таксономическая категория “триба”, остальные таксономические категории – семейства, роды и виды – остались без изменений.

Царство Procariotae, отдел Gracilicutes, секция 9. Rickettsii et Chlamydii (Риккетсии и хламидии), порядок I. Rickettsiales, сем. Rickettsiaceae, род 1 Rickettsia, вид  R.conjunctivae   –  возбудитель риккетсиозного  кератоконъюнктивита крупного рогатого скота; в этом же семействе находится род 3 Coxiella, вид  C. burnetii - возбудитель Ку-лихорадки (Ку-риккетсиоза);                                                        

Сем. Anaplasmataceae, род 1 Anaplasma, вид A. centrale - возбудитель анаплазмоза крупного рогатого скота, A. marginale и A. ovis - возбудители анаплазмоза овец и коз;

Род 4 Eperhytrozoon, вид Ep. suis - возбудитель эперитрозооноза свиней, вид Ep. ovis - возбудитель эперитрозооноза овец и Ep. wenyonii - возбудитель эперитрозооноза крупного рогатого скота   

Лабораторная диагностика Ку-лихорадки

Материал для исследования. Объектами лабораторного исследования могут быть: при жизни животного – кровь, взятая из яремной вены (2-1,5 мл), клещи, собранные с животных, на пастбище, мелкие зверьки, грызуны (полевки, крысы), или их свежие трупы, экссудат из матки и влагалища, плацента абортировавшего животного, от погибших или убитых с диагностической целью сельскохозяйственных животных, части пораженного легкого, головного мозга, селезенки, регионарных лимфоузлов, паренхимы вымени, кровь.

Материал отправляют в специализированную лабораторию в герметизированных контейнерах, поддерживая температуру в контейнерах +4 0С.

Лабораторная диагностика лихорадки-Ку заключается в:

выявлении специфических антител в сыворотке крови сельскохозяйственных животных и грызунов в реакции длительного связывания комплемента (РДСК) с использованием антигена из возбудителя фазы 1 лихорадки-Ку (ретроспективная диагностика);

обнаружении и идентификации возбудителя этой болезни в исследуемом материале грызунов и сельскохозяйственных животных, а также от клещей, собранных в природном очаге и от животных, путем постановки биологической пробы и микроскопии препаратов-мазков.

Микроскопическое исследование. Риккетсии Бернета (Coxiella burnetii) – плеоморфные микроорганизмы, преобладают кокковидные и палочковидные формы шириной 0,2-0,4 мкм и длиной 0,4-1 мкм, реже нитевидной формы до 10-12 мкм, располагаются одиночно, попарно, иногда короткими цепочками. Образуют фильтрующиеся формы, способны к фазовой изменчивости. Встречаются в природе в I фазе, а после длительных пассажей превращаются во II фазу. Иногда образуют спорообразные формы, обеспечивающие устойчивость к высоким температурам и высушиванию.

Микроскопическое исследование препаратов-мазков на наличие возбудителя Ку – лихорадки проводят с использованием окраски по методу Здродовского. Высушенные на воздухе мазки фиксируют обычным способом на пламени и окрашивают основным фуксином Циля, разведенным бидистиллированной водой из расчета 15-18 капель фуксина на 10 мл воды. Мазки окрашивают в течение 5 минут, затем фуксин смывают водой, препарат погружают на 2-3 секунды в 0,5 % раствор лимонной кислоты и промывают водой. Затем в течение 15-30 секунд окрашивают 0,5 % водным раствором метиленовой сини и снова промывают водой, мазок высушивают на воздухе и микроскопируют в иммерсионной системе при увеличении х630 и выше. При этом риккетсии имеют вид палочек или кокков красного цвета на синем фоне.

Вирусологическое исследование

Метод выделения и культивирования риккетсий: C. burnetii – аэроб, культивируется при 37˚С и будучи облигатным внутриклеточным паразитом не растут на обычных питательных средах.

В условиях лаборатории коксиелл культивируют в РКЭ, организме лабораторных животных (белые мыши, морские свинки, хомячки, кролики), реже – в иксодовых клещах, а также в культурах клеток (фибробласты, клетки L и другие).

Определение патогенности проводят биопробой на лабораторных животных, РКЭ и культурах клеток. Биопробу проводят или на морских свинках с живой массой 300-400 г или белых мышах с живой массой 8-10 г или 6-7-дневных куриных эмбрионах (КЭ).

Заражение морских свинок. Для каждого исследуемого материала берут по 4 морских свинки. Приготовленный материал вводят внутрибрюшинно по 2,5 мл. продолжительность инкубационного периода может колебаться от 3-5 дней до 2-4 недель. Морских свинок ежедневно термометрируют. Болезнь характеризуется повышением температуры до 40,5˚С и выше, угнетением общего состояния и потерей аппетита. Для получения четкой реакции проводят 3-5 «слепых» пассажей. На 2-3 день после повышения температуры проводят диагностический убой морских свинок. Из паренхиматозных органов готовят препараты-отпечатки и исследуют микроскопическим методом. Патологоанатомические изменения характеризуются признаками пневмонии, дегенеративными изменениями печени, на селезенке обнаруживают фибринозный налет.


Схема бактериологическогоисследования на Ку-лихорадку

                                                                                                                                                                   

                  


В случае отсутствия клинических признаков заболевания у морских свинок через 30 дней после введения исследуемого материала, берут сыворотку и исследуют на наличие специфических антител. Постановку реакции проводят согласно «Методическим указаниям по серологической диагностике лихорадки Ку животных».

Заражение белых мышей.

Для каждой исследуемой пробы материала берут не менее 4-х белых мышей. Исследуемый материал вводят внутрибрюшинно по 0,5-1,0 мл. Наблюдение ведут в течение 12 дней. Мыши, павшие в течение 3 дней после введения материала, утилизируются. Мышей, павших через 4 и более дней и оставшихся в живых, по истечении 12 дней убивают под эфирным наркозом и вскрывают с соблюдением асептики. Для микроскопии готовят препараты-отпечатки из селезенки. При патологоанатомическом исследовании обнаруживаются признаки пневмонии, увеличение селезенки и печени.

В качестве лабораторных животных можно использовать белых крыс, хомячков, сусликов и кроликов.

Если заражать лабораторных животных внутривенно или в переднюю камеру глаза (после предварительно анестезии) Ку-риккетсиоз протекает бессимптомно. После убоя животных риккетсий обнаруживают в почках, селезенке (Т.С. Костенко, 1989 г.).

Заражение развивающихся куриных эмбрионов

При использовании КЭ исследуемый материал вводят в желточный мешок не менее 4 эмбрионов 6-7 дневного, по 0,3-0,5 мл и наблюдают в течение 12 дней. Гибель эмбрионов на 1-3 сутки после введения материала считается неспецифической и они утилизируются. Погибших эмбрионов через 4 и более дней, оставшихся в живых через 12 дней вскрывают в асептических условиях, извлекают желточные мешки и из них готовят препараты-отпечатки и препараты-мазки для микроскопии.

 Лабораторный диагноз. Диагноз на Ку-лихорадку считают установленным при получении одного из следующих результатов:

- выявлении специфических антител в сыворотке крови сельскохозяйственных животных и грызунов в реакции длительного связывания комплемента с использованием антигена из возбудителя фазы I лихорадки Ку (ретроспективная диагностика);

- обнаружении и идентификации возбудителя Ку-лихорадки в исследуемом материале от грызунов и сельскохозяйственных животных, а также от клещей, собранных в природном очаге и от животных, путем постановки биологической пробы и микроскопии препаратов-мазков.

Лабораторная диагностика

риккетсиозного кератоконъюнктивита

Материал для исследования. Cоскобы с конъюнктивы верхнего века и роговицы пораженных глаз больных животных, слизь из носа, слезная жидкость на второй – пятый день заболевания. Исследуют только свежий материал. В случае длительной транспортировки материал замораживают при температуре – 5-10˚С и перевозят в термосе со льдом.

Лабораторная диагностика риккетсиозного кератоконъюнктивита включает:

1. Микроскопический метод;

2. Выделение культуры риккетсий на РКЭ;

3. Биологический метод.

Микроскопический метод:

1) Световая микроскопия: трехкратно с интервалом 1-2 дня микроскопируют препараты-мазки из патматериала, окрашенные  методами – Романовского-Гимзе или Здродовскому.

Rickettsia conjunctivae это мелкие полиморфные организмы, палочковидные, кольцевидные, подкововидные, бобовидные, но чаще кокковидные формы, размер 0,5-3 мкм.

По Романовскому-Гимзе окрашиваются в красно-фиолетовый цвет (фиолетовые с красными гранулами), по Здродовскому – в красный цвет. Обнаруживают риккетсий как в клетках (внутриклеточный паразитизм), так и вне их.

2) Люминесцентная микроскопия: для обнаружения риккетсий под люминесцентным микроскопом применяют метод флуорохромирования. Препарат фиксируют в метаноле 5 минут, обрабатывают раствором акридинового оранжевого (1 : 3 0000, рН 3,8), промывают дистиллированной водой, высушивают и просматривают под иммерсионным объективом с использованием нефлуоресцирующего иммерсионного масла (светофильтры – СЗС-7, Ж-1, БС-8 и КС-18).

Риккетсии флуоресцируют зеленым и красным цветом и четко выделяются на темном фоне препарата.

Вирусологическое исследование

Метод выделения и культивирования риккетсий.

Выделение и культивирование возбудителя проводят на РКЭ. Культивирование проводят в РКЭ. Заражают 5-6 дневные куриные эмбрионы и желточный мешок. В процессе культивирования риккетсий проводят 4-6 «слепых» пассажей, используя для этого отмытые в стерильном физрастворе, растертые и суспензированные оболочки желточных мешков. В положительном случае отмечают гибель или отставание в развитии (по сравнению с контрольными) зараженных эмбрионов.

Определение патогенности возбудителя кератоконъюнктивита проводят заражением бычков в возрасте 2-5 месяцев или кроликов, внося материал в глаз животного. Суспензию (1:5) готовят из исходного материала или из эмбриональной культуры. Заболевание у бычков проявляется через 7-12 суток в виде кератоконъюнктивита и продолжается 8-10 суток и дольше. У кроликов заболевание проявляется на 2-4 сутки в 90 % случаев. При вскрытии их, помимо воспалительных явлений в области инфицированного глаза, выявляется очаговое катаральное воспаление легких.


Схема

бактериологического

исследования на риккетсиозный кератоконъюнктивит

                                                                                                                                                                   

                  


Лабораторный диагноз
. Диагноз на риккетсиозный кератоконъюнктивит считают установленным при обнаружении возбудителя в исследуемом материале микроскопическим методом исследования с определением патогенности на бычках или кроликах.


Исследуемый материал:

Бронхиальная слизь, плевральный экссудат, пунктат лимфаузлов, молоко, моча, паренхиматозные органы, жидкость из суставов и отечной ткани; соскобы со слизистой гортани, трахеи, стенки воздухоносных мешков, эмбрионы птиц

Микроскопия препаратов, окрашенных по Граму или Романовскому-Гимзе

Посев суспензии патматериала после обработки антибиотиками на мартеновский бульон и агар с 15-20%-тами сыворотки крови лошади и 1-2% лактозы, среду Эдварда, бульон Хоттингера с 15-20%-тами сыворотки крови лошади. Инкубируют при 37-380С, 5-10 дней с ежедневным просмотром. Посев на среды: МПБ, МПА, МППБ для проверки на бактериальную обсемененность.

икроскопия культуры (окраска по Граму, Романовского-Гимзе)

Характер роста на питательных средах

Изучение биохимических свойств

Биопроба: при перипневмонии кр.рог. скота – телята 6-8 мес. экссудат из плевры, л/узлов, легочной ткани п/к в области подгрудка; респираторный микоплазмоз- КРЭ или 1-2 мес. цыплята или индюшата – интратрахеально

Серологическая диагностика: РСК, РТГА, РИД, ККРА, СКРА

ВЫДЕЛЕНИЕ

Срок исследования до 20 суток и более с учетом биопробы

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

выделение чистой культуры и ее идентификация

Исследуемый материал:

кровь, взятая из яремной вены (2-1,5 мл), клещи, мелкие зверьки, грызуны (полевки, крысы), или их свежие трупы, экссудат из матки и влагалища, плацента абортировавшего животного, от погибших или убитых с диагностической целью сельскохозяйственных животных, части пораженного легкого, головного мозга, селезенки, регионарных лимфоузлов, паренхимы вымени, кровь

МИКРОСКОПИЯ

Окраска препаратов по Здродовскому

ВЫДЕЛЕНИЕ 

И

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ

(белые мыши, моские свинки, РКЭ)

БИОПРОБА:

белые мыши, моские свинки в/б, суспензия материала, РКЭ в желточный мешок

Микроскопия  препаратов-мазков и отпечатков из органов лабораторных животных и РКЭ окраска по Здродовскому

Характерные патологоанатомические изменения у лабораторных животных и в РКЭ

Обнаружение специфических антител в исследуемых сыворотках крови животных в РДСК

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Срок исследования – до 30 дней

Исследуемый материал:

соскобы с конъюнктивы верхнего века и роговицы пораженных глаз больных животных, слизь из носа, слезная жидкость на второй – пятый день заболевания.

МИКРОСКОПИЯ

Окраска препаратов по Здродовскому и Романовского-Гимзе, методом флуорохромирования

ВЫДЕЛЕНИЕ 

И

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ

(РКЭ)

БИОПРОБА:

Бычки или кролики, суспензия материала, на конъюнктиву глаза

Микроскопия  препаратов-мазков и отпечатков из органов лабораторных животных и РКЭ окраска по Здродовскому, Романовского-Гимзе, методом флуорохромирования

Характерные клинические признаки и патологоанатомические изменения у лабораторных животных и в РКЭ

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Срок исследования – до 45 дней


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

66014. Внутренний долг РФ с 2007-2012 года 55.46 KB
  Структура и динамика государственного внутреннего долга по состоянию на 1 мая 2007 года в части государственных ценных бумаг номинированных в валюте Российской Федерации Виды государственных ценных бумаг млрд.
66015. Внешняя задолженность 28.59 KB
  В случае внешнего государственного долга кредиторами правительства выступают: иностранные государства иностранные юридические лица международные финансовые институты МВФ связанный с ним Парижский клуб Лондонский клуб Всемирный банк.
66016. Международный валютный фонд, МВФ 33.27 KB
  На Бреттон-Вудской конференции ООН по валютно-финансовым вопросам 22 июля 1944 года была разработана основа соглашения Хартия МВФ. Наиболее существенный вклад в разработку концепции МВФ внесли Джон Мейнард Кейнс возглавлявший британскую делегацию...
66017. Антикризисная программа Китая 34 KB
  Учитывая что промышленность этой страны в большей части ориентирована на экспорт а мировой и в первую очередь американский спрос с учетом кризиса существенно снизился китайское правительство в своих планах по поддержке экономики сделало ставку...
66018. Бюджетные системы зарубежных стран 31 KB
  Принцип обязательного облечения бюджета в форму акта, принимаемого представительным органом власти, означает требование законодательного оформления бюджета. В большинстве стран бюджет принимается в виде закона
66019. Особые экономические зоны. Свободные экономические зоны РФ, оффшоры 57 KB
  Развитием особых экономических зон в России занимается специально созданная управляющая компания Особые экономические зоны единственным акционером которого является государство. На территории ОЭЗ действует особый режим осуществления предпринимательской деятельности...