31005

Лабораторная диагностика микоплазмозов

Доклад

Медицина и ветеринария

Животных вакцинированных против хламидийного аборта серологически не исследуют в течение одного года после вакцинации. Молекулярногенетический метод Метод предназначен для выявления ДНК хламидий с помощью полимеразной цепной реакции ПЦР в патологическом материале от животных. При получении нарастания титра антител в парных пробах сыворотки крови больных или переболевших животных в РДСК РНСК РНГА ИФА в два и более раз диагноз считают предварительным а окончательным после получения положительного результата любого прямого метода...

Русский

2013-08-25

210 KB

26 чел.

Серологический метод

Серологические исследования на хламидийные инфекции основаны на выявлении специфических антител в сыворотке крови животных (ретроспективная диагностика) в РСК, РДСК, РНСК, РНГА, ИФА; у абортировавших животных – на установлении нарастания титра антител в 4 и более раз. Животных, вакцинированных против хламидийного аборта, серологически не исследуют в течение одного года после вакцинации.

Молекулярно-генетический метод

Метод предназначен для выявления ДНК хламидий с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в патологическом материале от животных.

Суть  ПЦР заключается в амплификации, т.е. увеличении числа копий строго определенных  фрагментов молекулы ДНК или РНК (праймеров) искомого агента in vitro с последующей индикацией амплификона (амплифицируемый участок ДНК) методом электрофореза или другим методом. ПЦР позволяет идентифицировать возбудитель в количестве 1 бакт. клетки в пробе, специфичность 100%.

Диагноз на хламидиоз считают установленным:

1. При выявлении хламидий, их антигенов или ДНК в исследуемом материале любым прямым методом диагностики;

2. При получении нарастания титра антител в парных пробах сыворотки крови больных или переболевших животных в РДСК, РНСК, РНГА, ИФА в два и более раз диагноз считают предварительным, а окончательным после получения положительного результата  любого прямого метода диагностики;

При диагностике хламидиоза предусмотрены следующие сроки исследований:     -   выявление специфических антител – от 1 до 5 дней;

световая микроскопия – от 30 минут до 2 часов;

люминесцентная микроскопия – до 3 часов;

выделение и идентификация хламидий – от 7 до 40 дней;

выявление ДНК хламидий - от 4 часов до 2 суток.

Лабораторная диагностика микоплазмозов

Микоплазмозы – контагиозные заболевания животных, в том числе птиц и человека, характеризующиеся воспалением легких, полисерозитами, полиартритами и кератоконъюнктивитами; протекают, как правило, латентно или хронически, реже – остро. Среди микоплазмозов животных выделяют заболевания, являющиеся самостоятельными нозологическими единицами (см. возбудители микоплазмозов).

Возбудители микоплазмозов. По “Определителю бактерий” Д. Берджи (1997 г.) микоплазмы относят к отделу Tenericutes, классу Molicutes. Возбудителями заболеваний млекопитающих и птиц являются представители сем. Mycoplasmataceae, включающем род Ureplasma и Mycoplasma.

Род Mycoplasma объединяет 69 видов (M. mycoides subsp.mycoides – возбудитель контагиозной плевропневмонии (перипневмонии) крупного рогатого скота; M.mycoides subsp. capri – возбудитель инфекционной плевропневмонии коз; M. agalactiae – возбудитель инфекционной агалактии овец и коз; M. gallinarum – возбудитель респираторного микоплазмоза (инфекционного синусита), аэросаккулитов, воспаления половых органов у кур, индеек, гусей, уток; M. synoviae – возбудитель инфекционного синовита кур и индеек; M. flocculare – возбудитель энзоотической пневмонии свиней; M. gallisepticum – обуславливает трахеит и аэросаккулит у кур; M. anatis – воспаление респираторных органов у уток; M. gallopavonis – синусит и аэросаккулит индеек; M. meleagridis – аэросаккулит, деформацию костей у индеек; M. pullorum – трахеит у цыплят; M. bovigenitalium – маститы, воспаление мочеполовых органов у крупного рогатого скота; M. bovoculi – кератоконъюнктивиты у телят и др.).

Род Ureplasma объединяет 2 вида: U. urealyticum и U. diversum. Последний вызывает у крупного рогатого скота хроническую пневмонию (особенно у молодняка) и поражения гениталий, у свиней – снижение оплодотворяемости и возможны аборты, у кур – хроническое воспаление респираторного тракта, у индеек – препятствует оплодотворению яиц.

Исследуемый материал. Для выделения возбудителя перипневмонии крупного рогатого скота – кровь (15-20 мл для серологического исследования), бронхиальная слизь, пунктат лимфатических узлов, молоко, моча; от трупов – части пораженных легких, лимфатические узлы, плевральный экссудат. Для выделения возбудителя агалактии овец и коз от больных животных – молоко, выделения из пораженных глаз, жидкость из суставов и отечной ткани; от павших или вынужденно убитых животных – паренхиматозные органы, кровь, лимфатические узлы. Для выделения возбудителя респираторного микоплазмоза кур и индеек от трупов и вынужденно убитых – соскобы со слизистых оболочек гортани, трахеи, стенки воздухоносных мешков, части легких, головной мозг (при отсутствии патологоанатомических изменений у взрослой птицы исследуют желточные мешки, легкие, трахеи эмбрионов последних дней инкубации и 1-2-суточных цыплят).

При взятии материала при других микоплазмозах учитывают место локализации возбудителя.

Материал пересылают в лабораторию с нарочным в термосе со льдом или в замороженном виде.

Лабораторная диагностика включает микроскопию мазков из исходного материала, посев на питательные среды, постановку биопробы и проведение серологического исследования при некоторых микоплазмозах (респираторный микоплазмоз птиц, перипневмония крупного рогатого скота).

Микроскопическое исследование. В препаратах-отпечатках, окрашенных по Романовскому-Гимзе обнаруживают мелкие полиморфные образования кокковидной (0,3-0,8 мкм), нитевидной (0,3-0,8х100-150 мкм) и кольцевидной форм, окрашенные в розовый цвет. При окраске по Граму возбудитель обнаружить не удается. Рекомендуется готовить препараты-мазки из чистой 6-10-суточной культуры, полученной на жидкой среде. Микоплазмы грам «-», некоторые виды, например M. mycoides, образуют капсулу, не образуют споры и неподвижны, фильтруются через асбестовые пластинки СФ и мембранные фильтры.

Бактериологическое исследование

- культуральные свойств. Микоплазмы - факультативные анаэробы. Чистую культуру микоплазм получают на специальных и элективных искусственных питательных средах, а также путем инфицирования куриных эмбрионов (КЭ) и культур клеток. В качестве питательных сред используют мартеновский мясопептонный бульон и агар с добавлением сыворотки или крови (15-20%) овец и коз, лошадей, крупного рогатого скота и лактозы (1-2%); бульон Хоттингера с сывороткой крови (15-20%); жидкую среду Эдварда  и среду ВИЭВ (рН сред 7,4-8,0). Посевы инкубируют при 37-380С в течение 5-10 дней, ежедневно просматривая. Для угнетения роста посторонней микрофлоры к питательным средам добавляют антибиотики или ими обрабатывают после центрифугирования суспензию патматериала или же ее фильтруют через асбестовые и мембранные фильтры. Обработанный материал проверяют на бактериальную стерильность путем посева на МПБ, МПА и среду Китта-Тароцци. На жидких питательных средах при росте микоплазм наблюдают опалесценцию, а адаптированные к среде культуры дают заметное помутнение, образуют осадок. Более обильный рост отмечают ближе к стенке или на стенке пробирки, а в отдельных случаях на поверхности среды образуется маслянистая пленка. В полужидких средах микоплазмы растут по уколу, формируют крошковатые колонии, напоминающие по форме яичницу-глазунью. Колонии микоплазм врастают в агар, имеют темный центр, зернистую поверхность. Периферия колоний более светлая и менее гранулированная, чам центр. Размер колоний не превышает 0,25-2 мм.

- биохимические свойства. Ферментативную активность микоплазм изучают на жидких или полужидких питательных средах. Они обладают сложными ферментативными системами и варьируют в зависимости от вида. Представители рода Mycoplasma в отличие от рода Ureplasma не гидролизуют мочевину.

Определение патогенности проводят чаще используя те виды животных, от которых был отобран материал. Например: при перипневмонии крупного рогатого скота используют телят 6-8-месячного возраста, которым вводят лимфу из легочной ткани или экссудат из плевры подкожно в области подгрудка – в подкожной клетчатке медленно развивается перипневмонийная флегмона; при инфекционной агалактии овец и коз используют кроликов ж.м. 2,5-3,0 кг, а при необходимости овец или коз 1-2 мес. возраста. Кроликов заражают в переднюю камеру глаза суспензией патматериала или 3-4-суточной свежевыделенной бульонной культурой микоплазм (развивается кератит), а овец и коз в молочный канал, подкожно или в сустав (признаки инфекционной агалактии). При диагностике респираторного микоплазмоза кур и индеек биопробу ставят на 9-и дневных куриных или индюшиных эмбрионах, которых заражают в алантоисную полость культурой микоплазм или суспензией из патматериала, обработанной пенициллином или уксуснокислым таллием в дозе 0,1 см3. В случае гибели не менее 50% зараженных эмбрионов биопробу считают положительной. Кроме этого биопробу проводят на 1-2-месячных цыплятах или индюшатах, которых заражают интратрахеально или интраназально – через 4-20 суток появляются симптомы болез


Схема бактериологического

исследования на  микоплазмозы

                   

                      

                     


ни: трахеит, синусит, конъюнктивит, ринит.

Серологическое исследование. Для серологического исследования используют РСК, РТГА, РИД, ККРА, СКРА, метод иммунофлуоресценции, реакцию ингибиции роста. Однако они еще не нашли широкого применения, имеют ориентировочное значение и нуждаются в совершенствовании. 

Лабораторный диагноз считается установленным:

при выделении из материала культуры со свойствами, характерными для соответствующего возбудителя микоплазмоза, и гибели зараженных ею животных с последующей реизоляцией возбудителя из их органов;

при гибели хотя бы одного из зараженных животных исходным материалом и выделении из их органов культуры, характерной для того или иного возбудителя микоплазмоза, если даже в посевах из исходного материала возбудителя не выделено.

Лабораторная диагностика риккетсиозов животных

Риккетсиозы – группа заболеваний многих видов животных и человека, вызываемые внутриклеточными паразитами (риккетсиями), которые передаются в основном трансмиссивно и проявляются у животных лихорадками, пневмониями, ринитами, абортами и послеродовыми эндометритами, а также поражением лимфатической системы и форменных элементов крови.

Риккетсии названы в честь американского микробиолога Говарда Тейлора Риккетса, открывшего в 1909 году возбудителя одного из риккетсиозов – пятнистую лихорадку Скалистых гор и погибшего при его исследовании (1910).

Риккетсии довольно многочисленная группа, представленная патогенными и непатогенными видами. Патогенных видов значительно меньше. В природе риккетсии обитают преимущественно в организме насекомых (вшей, блох, клещей), а также грызунов, диких и сельскохозяйственных животных.

В соответствии с родовой, видовой принадлежностью большую часть патогенных риккетсий подразделяют на группы заболеваний: заболевания вызываемые эрлихиями – эрлихиозы, коудриями – коудриозы, неориккетсиями – неориккетсиозы, анаплазмами – анаплазмозы, бартонеллами – бартонеллезы и т.д.

Дифференциация риккетсий от вирусов и прокариотных микроорганизмов.

Риккетсии схожи как с вирусами, так и с бактериями, но существует ряд отличительных особенностей.

Сходство с прокариотными микроорганизмами:

риккетсии имеют трехслойную клеточную стенку;

содержат два типа нуклеиновых кислот, рибосомы и систему дыхания сходную с прокариотами;

окрашиваются анилиновыми красителями;

чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда, сульфаниламидам, а некоторые виды (N. hilminthoeca) к широкому спектру антибиотиков.

Сходство с вирусами:

риккетсии облигатные внутриклеточные паразиты;

самые мелкие формы риккетсий обладают фильтруемостью через бактериальные фильтры;

риккетсии способны культивироваться только в живой клетке (РКЭ, КК, организме лабораторных животных);

риккетсии обладают тканевым тропизмом;

для риккетсий характерно отсутствие строгой хозяиноспецифичности.

риккетсии стимулируют выработку интерферона


Сравнительная характеристика прокариотных

микроорганизмов и вирусов

№№

Дифференцирующие

признаки

Бакте-

рии

Микоплазмы

Риккетсии

Хламидии

Вирусы

1.

Размер до 0,5 мкм

-

+

+

+

2.

Клеточная оболочка

+

-

+

+

-

3.

Два типа нуклеиновых кислот (ДНК и РНК)

+

+

+

+

-

4.

Ядро без ограничивающей мембраны

+

+

+

+

-

5.

Бинарное деление

+

+

+

+

-

6.

Рибосомы прокариотного типа

+

+

+

+

-

7.

Окраска анилиновыми красителями

+

+

+

+

-

8.

Рост на искусственных питательных средах

+

+

-

-

-

9.

Рост в живой клетке (РКЭ, КК, организме лабораторных животных)

-

+

+

+

+

10.

Ингибирование антибиотиками и сульфаниламидами

+

+

+

+

11.

Образование внутриклеточных включений в пораженной клетке

-

-

-

+

+

12.

Наличие в биологическом цикле членистоногих

-

-

+

-

Таким образом, для микроорганизмов порядка Rickettsiales свойственны:

плеоморфизм;

неподвижность;

грамотрицательное окрашивание;

патогенность для многих видов сельскохозяйственных животных, человека и членистоногих;

невысокая устойчивость во внешней среде (кроме C. burnetii);

особая чувствительность к антибиотикам тетрациклинового ряда.

Основной отличительной особенностью от прокариотных микроорганизмов и вирусов является наличие в цикле развития риккетсий членистоногих (вшей, клещей, блох).

В настоящее время из группы риккетсиозов наибольшую актуальность имеют: Ку-лихорадка, риккетсиозный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота, анаплазмоз, эперитрозооноз.

Ку-лихорадка (от анг. guery – неясный, неопределённый, сомнительный) – природно-очаговая зооантропонозная болезнь домашних, промысловых и диких млекопитающих и птиц, чаще протекающая бессимптомно, характеризуется развитием ринита, бронхита, пневмонии, конъюнктивита, плеврита, мастита (у самцов орхита), а также абортами.

Риккетсиозный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота (Инфекционный кератоконъюнктивит, инфекционный кератит, инфекционное воспаление глаз) - остро протекающее заболевание с поражением роговицы и конъюнктивы глаза преимущественно крупного рогатого скота.

Анаплазмоз – трансмиссивное заболевание крупного и мелкого рогатого скота, а также других домашних и диких животных, протекающее осро или хронически с признаками остро выраженной анемии, перемежиющейся лихорадкой, нарушением работы сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта.

Эперитрозооноз - это кровопаразитарная болезнь свиней всех возрастов, протекающая остро  или  хронически, характеризующуяся  желтушностью, анемией, затрудненным  дыханием,  слабостью,  лихорадкой, некрозами, отставанием в росте и развитии.

Возбудители риккетсиозов. Согласно 9-го издания (1994) “Определителя бактерий Берджи” в 2-х томах (М:., Мир, 1997) риккетсии представленны в группе (секции) 9 “Риккетсии и хламидии”, в которой упразднена таксономическая категория “триба”, остальные таксономические категории – семейства, роды и виды – остались без изменений.

Царство Procariotae, отдел Gracilicutes, секция 9. Rickettsii et Chlamydii (Риккетсии и хламидии), порядок I. Rickettsiales, сем. Rickettsiaceae, род 1 Rickettsia, вид  R.conjunctivae   –  возбудитель риккетсиозного  кератоконъюнктивита крупного рогатого скота; в этом же семействе находится род 3 Coxiella, вид  C. burnetii - возбудитель Ку-лихорадки (Ку-риккетсиоза);                                                        

Сем. Anaplasmataceae, род 1 Anaplasma, вид A. centrale - возбудитель анаплазмоза крупного рогатого скота, A. marginale и A. ovis - возбудители анаплазмоза овец и коз;

Род 4 Eperhytrozoon, вид Ep. suis - возбудитель эперитрозооноза свиней, вид Ep. ovis - возбудитель эперитрозооноза овец и Ep. wenyonii - возбудитель эперитрозооноза крупного рогатого скота   

Лабораторная диагностика Ку-лихорадки

Материал для исследования. Объектами лабораторного исследования могут быть: при жизни животного – кровь, взятая из яремной вены (2-1,5 мл), клещи, собранные с животных, на пастбище, мелкие зверьки, грызуны (полевки, крысы), или их свежие трупы, экссудат из матки и влагалища, плацента абортировавшего животного, от погибших или убитых с диагностической целью сельскохозяйственных животных, части пораженного легкого, головного мозга, селезенки, регионарных лимфоузлов, паренхимы вымени, кровь.

Материал отправляют в специализированную лабораторию в герметизированных контейнерах, поддерживая температуру в контейнерах +4 0С.

Лабораторная диагностика лихорадки-Ку заключается в:

выявлении специфических антител в сыворотке крови сельскохозяйственных животных и грызунов в реакции длительного связывания комплемента (РДСК) с использованием антигена из возбудителя фазы 1 лихорадки-Ку (ретроспективная диагностика);

обнаружении и идентификации возбудителя этой болезни в исследуемом материале грызунов и сельскохозяйственных животных, а также от клещей, собранных в природном очаге и от животных, путем постановки биологической пробы и микроскопии препаратов-мазков.

Микроскопическое исследование. Риккетсии Бернета (Coxiella burnetii) – плеоморфные микроорганизмы, преобладают кокковидные и палочковидные формы шириной 0,2-0,4 мкм и длиной 0,4-1 мкм, реже нитевидной формы до 10-12 мкм, располагаются одиночно, попарно, иногда короткими цепочками. Образуют фильтрующиеся формы, способны к фазовой изменчивости. Встречаются в природе в I фазе, а после длительных пассажей превращаются во II фазу. Иногда образуют спорообразные формы, обеспечивающие устойчивость к высоким температурам и высушиванию.

Микроскопическое исследование препаратов-мазков на наличие возбудителя Ку – лихорадки проводят с использованием окраски по методу Здродовского. Высушенные на воздухе мазки фиксируют обычным способом на пламени и окрашивают основным фуксином Циля, разведенным бидистиллированной водой из расчета 15-18 капель фуксина на 10 мл воды. Мазки окрашивают в течение 5 минут, затем фуксин смывают водой, препарат погружают на 2-3 секунды в 0,5 % раствор лимонной кислоты и промывают водой. Затем в течение 15-30 секунд окрашивают 0,5 % водным раствором метиленовой сини и снова промывают водой, мазок высушивают на воздухе и микроскопируют в иммерсионной системе при увеличении х630 и выше. При этом риккетсии имеют вид палочек или кокков красного цвета на синем фоне.

Вирусологическое исследование

Метод выделения и культивирования риккетсий: C. burnetii – аэроб, культивируется при 37˚С и будучи облигатным внутриклеточным паразитом не растут на обычных питательных средах.

В условиях лаборатории коксиелл культивируют в РКЭ, организме лабораторных животных (белые мыши, морские свинки, хомячки, кролики), реже – в иксодовых клещах, а также в культурах клеток (фибробласты, клетки L и другие).

Определение патогенности проводят биопробой на лабораторных животных, РКЭ и культурах клеток. Биопробу проводят или на морских свинках с живой массой 300-400 г или белых мышах с живой массой 8-10 г или 6-7-дневных куриных эмбрионах (КЭ).

Заражение морских свинок. Для каждого исследуемого материала берут по 4 морских свинки. Приготовленный материал вводят внутрибрюшинно по 2,5 мл. продолжительность инкубационного периода может колебаться от 3-5 дней до 2-4 недель. Морских свинок ежедневно термометрируют. Болезнь характеризуется повышением температуры до 40,5˚С и выше, угнетением общего состояния и потерей аппетита. Для получения четкой реакции проводят 3-5 «слепых» пассажей. На 2-3 день после повышения температуры проводят диагностический убой морских свинок. Из паренхиматозных органов готовят препараты-отпечатки и исследуют микроскопическим методом. Патологоанатомические изменения характеризуются признаками пневмонии, дегенеративными изменениями печени, на селезенке обнаруживают фибринозный налет.


Схема бактериологическогоисследования на Ку-лихорадку

                                                                                                                                                                   

                  


В случае отсутствия клинических признаков заболевания у морских свинок через 30 дней после введения исследуемого материала, берут сыворотку и исследуют на наличие специфических антител. Постановку реакции проводят согласно «Методическим указаниям по серологической диагностике лихорадки Ку животных».

Заражение белых мышей.

Для каждой исследуемой пробы материала берут не менее 4-х белых мышей. Исследуемый материал вводят внутрибрюшинно по 0,5-1,0 мл. Наблюдение ведут в течение 12 дней. Мыши, павшие в течение 3 дней после введения материала, утилизируются. Мышей, павших через 4 и более дней и оставшихся в живых, по истечении 12 дней убивают под эфирным наркозом и вскрывают с соблюдением асептики. Для микроскопии готовят препараты-отпечатки из селезенки. При патологоанатомическом исследовании обнаруживаются признаки пневмонии, увеличение селезенки и печени.

В качестве лабораторных животных можно использовать белых крыс, хомячков, сусликов и кроликов.

Если заражать лабораторных животных внутривенно или в переднюю камеру глаза (после предварительно анестезии) Ку-риккетсиоз протекает бессимптомно. После убоя животных риккетсий обнаруживают в почках, селезенке (Т.С. Костенко, 1989 г.).

Заражение развивающихся куриных эмбрионов

При использовании КЭ исследуемый материал вводят в желточный мешок не менее 4 эмбрионов 6-7 дневного, по 0,3-0,5 мл и наблюдают в течение 12 дней. Гибель эмбрионов на 1-3 сутки после введения материала считается неспецифической и они утилизируются. Погибших эмбрионов через 4 и более дней, оставшихся в живых через 12 дней вскрывают в асептических условиях, извлекают желточные мешки и из них готовят препараты-отпечатки и препараты-мазки для микроскопии.

 Лабораторный диагноз. Диагноз на Ку-лихорадку считают установленным при получении одного из следующих результатов:

- выявлении специфических антител в сыворотке крови сельскохозяйственных животных и грызунов в реакции длительного связывания комплемента с использованием антигена из возбудителя фазы I лихорадки Ку (ретроспективная диагностика);

- обнаружении и идентификации возбудителя Ку-лихорадки в исследуемом материале от грызунов и сельскохозяйственных животных, а также от клещей, собранных в природном очаге и от животных, путем постановки биологической пробы и микроскопии препаратов-мазков.

Лабораторная диагностика

риккетсиозного кератоконъюнктивита

Материал для исследования. Cоскобы с конъюнктивы верхнего века и роговицы пораженных глаз больных животных, слизь из носа, слезная жидкость на второй – пятый день заболевания. Исследуют только свежий материал. В случае длительной транспортировки материал замораживают при температуре – 5-10˚С и перевозят в термосе со льдом.

Лабораторная диагностика риккетсиозного кератоконъюнктивита включает:

1. Микроскопический метод;

2. Выделение культуры риккетсий на РКЭ;

3. Биологический метод.

Микроскопический метод:

1) Световая микроскопия: трехкратно с интервалом 1-2 дня микроскопируют препараты-мазки из патматериала, окрашенные  методами – Романовского-Гимзе или Здродовскому.

Rickettsia conjunctivae это мелкие полиморфные организмы, палочковидные, кольцевидные, подкововидные, бобовидные, но чаще кокковидные формы, размер 0,5-3 мкм.

По Романовскому-Гимзе окрашиваются в красно-фиолетовый цвет (фиолетовые с красными гранулами), по Здродовскому – в красный цвет. Обнаруживают риккетсий как в клетках (внутриклеточный паразитизм), так и вне их.

2) Люминесцентная микроскопия: для обнаружения риккетсий под люминесцентным микроскопом применяют метод флуорохромирования. Препарат фиксируют в метаноле 5 минут, обрабатывают раствором акридинового оранжевого (1 : 3 0000, рН 3,8), промывают дистиллированной водой, высушивают и просматривают под иммерсионным объективом с использованием нефлуоресцирующего иммерсионного масла (светофильтры – СЗС-7, Ж-1, БС-8 и КС-18).

Риккетсии флуоресцируют зеленым и красным цветом и четко выделяются на темном фоне препарата.

Вирусологическое исследование

Метод выделения и культивирования риккетсий.

Выделение и культивирование возбудителя проводят на РКЭ. Культивирование проводят в РКЭ. Заражают 5-6 дневные куриные эмбрионы и желточный мешок. В процессе культивирования риккетсий проводят 4-6 «слепых» пассажей, используя для этого отмытые в стерильном физрастворе, растертые и суспензированные оболочки желточных мешков. В положительном случае отмечают гибель или отставание в развитии (по сравнению с контрольными) зараженных эмбрионов.

Определение патогенности возбудителя кератоконъюнктивита проводят заражением бычков в возрасте 2-5 месяцев или кроликов, внося материал в глаз животного. Суспензию (1:5) готовят из исходного материала или из эмбриональной культуры. Заболевание у бычков проявляется через 7-12 суток в виде кератоконъюнктивита и продолжается 8-10 суток и дольше. У кроликов заболевание проявляется на 2-4 сутки в 90 % случаев. При вскрытии их, помимо воспалительных явлений в области инфицированного глаза, выявляется очаговое катаральное воспаление легких.


Схема

бактериологического

исследования на риккетсиозный кератоконъюнктивит

                                                                                                                                                                   

                  


Лабораторный диагноз
. Диагноз на риккетсиозный кератоконъюнктивит считают установленным при обнаружении возбудителя в исследуемом материале микроскопическим методом исследования с определением патогенности на бычках или кроликах.


Исследуемый материал:

Бронхиальная слизь, плевральный экссудат, пунктат лимфаузлов, молоко, моча, паренхиматозные органы, жидкость из суставов и отечной ткани; соскобы со слизистой гортани, трахеи, стенки воздухоносных мешков, эмбрионы птиц

Микроскопия препаратов, окрашенных по Граму или Романовскому-Гимзе

Посев суспензии патматериала после обработки антибиотиками на мартеновский бульон и агар с 15-20%-тами сыворотки крови лошади и 1-2% лактозы, среду Эдварда, бульон Хоттингера с 15-20%-тами сыворотки крови лошади. Инкубируют при 37-380С, 5-10 дней с ежедневным просмотром. Посев на среды: МПБ, МПА, МППБ для проверки на бактериальную обсемененность.

икроскопия культуры (окраска по Граму, Романовского-Гимзе)

Характер роста на питательных средах

Изучение биохимических свойств

Биопроба: при перипневмонии кр.рог. скота – телята 6-8 мес. экссудат из плевры, л/узлов, легочной ткани п/к в области подгрудка; респираторный микоплазмоз- КРЭ или 1-2 мес. цыплята или индюшата – интратрахеально

Серологическая диагностика: РСК, РТГА, РИД, ККРА, СКРА

ВЫДЕЛЕНИЕ

Срок исследования до 20 суток и более с учетом биопробы

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

выделение чистой культуры и ее идентификация

Исследуемый материал:

кровь, взятая из яремной вены (2-1,5 мл), клещи, мелкие зверьки, грызуны (полевки, крысы), или их свежие трупы, экссудат из матки и влагалища, плацента абортировавшего животного, от погибших или убитых с диагностической целью сельскохозяйственных животных, части пораженного легкого, головного мозга, селезенки, регионарных лимфоузлов, паренхимы вымени, кровь

МИКРОСКОПИЯ

Окраска препаратов по Здродовскому

ВЫДЕЛЕНИЕ 

И

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ

(белые мыши, моские свинки, РКЭ)

БИОПРОБА:

белые мыши, моские свинки в/б, суспензия материала, РКЭ в желточный мешок

Микроскопия  препаратов-мазков и отпечатков из органов лабораторных животных и РКЭ окраска по Здродовскому

Характерные патологоанатомические изменения у лабораторных животных и в РКЭ

Обнаружение специфических антител в исследуемых сыворотках крови животных в РДСК

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Срок исследования – до 30 дней

Исследуемый материал:

соскобы с конъюнктивы верхнего века и роговицы пораженных глаз больных животных, слизь из носа, слезная жидкость на второй – пятый день заболевания.

МИКРОСКОПИЯ

Окраска препаратов по Здродовскому и Романовского-Гимзе, методом флуорохромирования

ВЫДЕЛЕНИЕ 

И

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ

(РКЭ)

БИОПРОБА:

Бычки или кролики, суспензия материала, на конъюнктиву глаза

Микроскопия  препаратов-мазков и отпечатков из органов лабораторных животных и РКЭ окраска по Здродовскому, Романовского-Гимзе, методом флуорохромирования

Характерные клинические признаки и патологоанатомические изменения у лабораторных животных и в РКЭ

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Срок исследования – до 45 дней


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

79588. Значимые аспекты журналистского расследования 369 KB
  Актуальность темы. Сам жанр журналистского расследования предполагает всестороннее и подробное исследование некой мало изученной, закрытой или тщательно скрываемой темы, в процессе работы над которой приходится преодолевать нежелание определенных структур предоставить интересующую вас информацию.
79589. Автоматизированная система управления, действующая на ЕвразЗСМК 1.91 MB
  До настоящего времени пользователи системы главным образом работали через терминалы поэтому приходилось писать программное обеспечение под нужды каждого пользователя. В настоящее время данное подразделение ДИТ занимается проблемами реинжиниринга системы управления на комбинате.
79590. Аналіз стану і розвитку фондового ринку в Україні в умовах становлення ринкових відносин 1.86 MB
  Теоретико-методологічною основою дипломної роботи є використання сучасних досягнень вітчизняних і зарубіжних вчених в економічній науці стосовно проблем функціонування фондового ринку. Статистичну базу дослідження становлять дані Державної комісії з цінних папрів та фондового ринку, Держкомстату та економічних і політичних періодичних видань.
79591. Экономико-организационная структура Красногвардейского отделения банка «Украина» 541 KB
  Для выполнения работы были использованы квартальные и ежедневные балансы отчеты о прибылях и убытках ежедневные ведомости расшифровки остатков на балансовых счетах данные об инвентаризации кредитного портфеля банка отчеты об остатках просроченной задолженности по ссудам банка информация...
79592. Коррекция агрессивного поведения школьников в сфере досуга 472.5 KB
  Цель исследования: разработать методику, направленную на снижение агрессии у детей подросткового возраста в сфере досуга Задачи исследования: В рамках теоретического анализа исследовать специфику агрессивности подростков. На основе полученных данных разработать методику работы с агрессивными подростками.
79593. АТФ индуцированное изменение внутриклеточной концентрации кальция в нейронах неокортекса крыс 3 MB
  Молекула АТФ давно известна как повсеместно распространенный источник энергии для внутриклеточного метаболизма. Но ее свойства как нейротрансмитера были обнаружены сравнительно недавно. Сегодня уже не осталось никаких сомнений, что АТФ является нейротрансмитером в автономных нейромышечных соединениях...
79594. Анализ истории развития вексельного обращения в России 520.5 KB
  Характерным примером последних являются векселя. Безусловность векселя как долгового обязательства строгость и быстрота взыскания по нему послужили основой создания других видов платежей и расчетов банкнот чеков аккредитивов.
79595. РОЗРОБКА АНТИКРИЗОВОЇ ПРОГРАМИ ПІДПРИЄМСТВА 249 KB
  У магістерській роботі розкрита сутність і принципи політики антикризового управління підприємством. Дана класифікація кризових явищ. На прикладі діючого підприємства проведено аналіз господарської діяльності та на основі отриманих даних розроблені та обґрунтовані заходи, необхідні для ефективного виводу підприємства з кризового стану.