31010

Методы лабораторной диагностики болезней пчел и рыб

Лекция

Медицина и ветеринария

Диагноз на американский гнилец ставят на основании эпизоотологических данных характерных признаков поражения расплода и результатов лабораторного исследования. Для исследования в лабораторию направляют образцы сотов размером 10 х 15 см с больными и погибшими личинками. Заплесневевший материал для исследования непригоден. ПЕРВЫЙ ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: Готовят мазки из массы разложившихся личинок или сухих корочек.

Русский

2013-08-25

78.5 KB

28 чел.

ЛЕКЦИЯ №18

Методы лабораторной диагностики болезней пчел и рыб

ПЛАН

  1.  Методы лабораторной диагностики американского гнильца пчел
  2.  Методы лабораторной диагностики европейского гнильца пчел
  3.  Методы лабораторной диагностики парагнильца пчел
  4.  Методы лабораторной диагностики сальмонеллеза пчел
  5.  Методы лабораторной диагностики септицемии пчел
  6.  Методы лабораторной диагностики псевдомонозов рыб и аэромоноза карпов

1. Американский гнилец (злокачественный гнилец, гнилец закрытого расплода) - инфекционная болезнь пчелиных и трутневых личинок в возрасте 7-9 дней. Болезнь проявляется во вторую, наиболее жаркую половину лета.

Зараженные личинки погибают, разлагаются, становятся вязкими, тягучими, приобретают запах растопленного столярного клея. Постепенно гнилостная масса высыхает в плотную корочку, которая с трудом извлекается из ячейки.

Крышечки ячеек над погибшими личинками темнеют, становятся продырявленными, просевшими (пестрый расплод).

Возбудитель болезни – Bacillus larvae - грамположительные, спорообразующие, подвижные, прямые палочки с закругленными концами, располагающиеся одиночно или короткими цепочками.

Диагноз на американский гнилец ставят на основании эпизоотологических данных, характерных признаков поражения расплода и результатов лабораторного исследования.

Для исследования в лабораторию направляют образцы сотов размером 10 х 15 см с больными и погибшими личинками. Образцы пересылают в фанерном или деревянном ящике, отделяя их друг от друга и от стенок деревянными планками. Соты нельзя обертывать бумагой.

Заплесневевший материал для исследования непригоден.

Лабораторная диагностика американского гнильца включает микроскопию мазков из патологического материала и выделение культуры возбудителя с последующей ее идентификацией.

ПЕРВЫЙ ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Готовят мазки из массы разложившихся личинок или сухих корочек. С этой целью из ячеек сотов пинцетом извлекают не менее 10 погибших личинок и помещают в 5 мл стерильного физиологического раствора. Содержимое пробирки доводят до кипения над пламенем спиртовки, охлаждают и растирают до получения однородной суспензии.

Из суспензии готовят мазки, окрашивают по Граму и для обнаружения спор - 2%-ным спиртовым раствором карболового фуксина в течение 1,5-2 мин.

При наличии возбудителя в мазках обнаруживают овальные споры и одиночные грамположительные палочки.

Затем суспензию высевают в МПБ и на Эндо, МПА с добавлением 10% нормальной сыворотки крови лошади или среду Уайта.

Посевы инкубируют в термостате при температуре 37-38°С в течение 24-72 ч.

В положительном случае в МПБ Вас. larvae дает помутнение, через 48-72 ч среда просветляется, на дне пробирки образуется осадок.

На плотных средах через 48-72 ч культивирования появляются шероховатые, локонообразные слегка выпуклые колонии, вначале прозрачные, затем серовато-белые. Позднее наблюдается сплошной, рост в виде серовато-белых наложений на поверхности агара.

Выделенные культуры идентифицируют по морфологическим(окраска по Граму), культуральным и биохимическим свойствам. Ферментативные свойства изучают путем выращивания в течение 2-5 суток на жидких средах Гисса с добавлением 10% нормальной сыворотки крови лошади.

Возбудитель расщепляет глюкозу с образованием кислоты без газа, не сбраживает мальтозу, сахарозу, арабинозу, восстанавливает нитраты в нитриты, не образует каталазу, не обладает гемолитической активностью.

Диагноз на американский гнилец считается установленным при выделении из патологического материала культуры со свойствами, характерными для Bacillus larvae.

Срок исследования до 10 дней.

2. Европейский гнилец (доброкачественный гнилец, гнилец открытого расплода) - инфекционная болезнь открытого, а при хроническом течении и печатного расплода.

Чаще расплод погибает весной и в первую половину лета. Пораженные личинки поворачиваются в ячейках кверху спиной, распрямляются, становятся мутно-белыми, сморщиваются и погибают. Погибшие личинки разлагаются, превращаясь в массу коричневого цвета с кислым гнилостным запахом. Высохшая масса образует коричневые корочки, легко извлекаемые из ячеек.

Болезнь имеет полимикробную этиологию. Основными возбудителями являются: Melissococcus pluton (Str. pluton), Str. liquifaciens  (Str. apis),  Bacillus alvei, Bacillus laterosporus (Bacillus orpheus).

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, характерных признаков поражения расплода, результатов лабораторного исследования.

В лабораторию направляют образцы сотов размером 10 х 15 см с больными и погибшими личинками (в случае гибели открытого расплода образец должен содержать неразложившиеся личинки). Образцы пересылают в фанерном или деревянном ящике, отделяя их друг от друга и от стенок ящика деревянными планками. Соты нельзя обертывать бумагой.

Заплесневевший материал для исследования непригоден.

Исследование на европейский гнилец включает микроскопию мазков из патологического материала и выделение культур возбудителей с последующей их идентификацией.

ПЕРВЫЙ ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Из ячеек сотов стерильным пинцетом извлекают 10-15 погибших личинок или корочек, заливают 5 мл стерильного физиологического раствора и растирают до получения однородной суспензии (корочки предварительно размачивают в стерильном физиологическом растворе в течение 15-20 минут).

Из суспензии готовят мазки окрашивают по Граму и 2%-ным спиртовым раствором карболового фуксина в течение 1,5-2 минут.

Чаще обнаруживают грамположительные ланцетовидные кокки Melissococcus pluton, расположенные одиночно, попарно или в виде характерных скоплений - "розетками". При окраске одним из спец. Методов – можно обнаружить капсулу. Реже обнаруживают короткие цепочки грамположительных кокков Str. Liquifaciens, расположенные частоколом споры Bacillus alvei, а также одиночные споры и грамположительные палочки Bacillus laterosporus.

Суспензию высевают на среды Бейли или Черепова в чашках, а также в МПБ и на МПА. Посевы на в чашках инкубируют в анаэробных условиях при температуре 34-35°С в течение 5 суток, на МПА и МПБ - в аэробных условиях в течение 24-48 ч при этой же температуре.

В положительном случае Melissococcus pluton образует круглые, мелкие (диаметром 1,0-1,5 мм) выпуклые зернистые колонии жемчужно-белого цвета.

Чистую культуру (делают мазки) пересевают на среды Гисса для определения ферментативных свойств. Melissococcus pluton ферментирует глюкозу с образованием кислоты без газа, не сбраживает маннит и сорбит.

На обычных питательных средах обращают внимание на интенсивность помутнения, образование осадка или пленки в МПБ, форму и цвет колоний на МПА.

Str. liquifaciens через сутки вызывает равномерное помутнение МПБ. На МПА образует мелкие прозрачные колонки или налет, легко снимающийся петлей.

В мазках из типичных колоний стрептококки располагаются короткими цепочками.

При обнаружении роста, характерного для Str. liquifaciens, делают дробный пересев на 2-3 чашки с глюкозо-кровяным агаром и на среды Гисса.

Str. liquifaciens разлагает с образованием кислоты без газа глюкозу, маннит, сорбит и не обладает гемолитической активностью.

Bacillus alvei через сутки в МПБ образует помутнение, слизистый осадок, сероватую нестабильную пленку, при встряхивании опадающую на дно пробирки.

На МПА образует крупные прозрачные неправильной формы колонии с блестящей поверхностью. В мазках из типичных колоний обнаруживают грамположительные палочки.

При обнаружении роста характерного для Bacillus alvei делают дробный пересев на 2-3 чашки с глюкозо-кровяньм агаром и среды Гисса, а также определяют способность восстанавливать нитраты, кагалазную активность и характер гемолиза.

Bac. alvei разлагает мальтозу и сахарозу с образованием кислоты, не разлагает арабинозу, не восстанавливает нитраты, каталазоположителен, вызывает -гемолиз.

Bacillus laterosporus через 24 ч инкубирования в МПБ дает равномерное помутнение, через 48 ч образуется осадок, а бульон просветляется.

На МПА образует мелкие колонии с ровными краями, серовато-белого цвета с металлическим блеском. К 48 ч образует пышные серовато-белые наложения.

В мазках из типичных колоний обнаруживают крупные грамположительные палочки, расположенные одиночно. Вегетативные формы подвижны. Образует характерные споры, при этом палочка изгибается.

Bacillus laterosporus ферментирует мальтозу с образованием кислоты без газа, не ферментирует сахарозу, арабинозу, нитраты восстанавливает в нитриты, каталазоположителен, вызывает -гемолиз.

Диагноз на европейский гнилец считается установленным при обнаружении одного или ассоциации возбудителей европейского гнильца с характерными для них свойствами.

Срок исследования до 8 дней.

3. Парагнилец - инфекционная болезнь пчелиных семей, поражающая открытый и печатный расплод, а при хроническом течении и куколки.

Болезнь проявляется чаще в первую половину лета. На сотах обнаруживают много потемневших утолщенных крышечек, а в ячейках под ними - гнилостную тягучую массу с неприятным запахом. После высыхания личинок образуются корочки, легко отделяющиеся от стенок ячеек.

Возбудитель болезни - Bacillus paraalvei - грамположительная, крупная, подвижная палочка. В погибших личинках и на питательных средах образует споры.

Диагноз на парагнилец ставят на основании эпизоотологических данных, характерных признаков поражения расплода и данных лабораторного исследования.

Для исследования в лабораторию направляют образцы сотов размером 10 х 15см с больными и погибшими личинками (в случае гибели открытого расплода образец должен содержать неразложившиеся личинки). Образцы пересылают в деревянном или фанерном ящике, отделяя их друг от друга и от стенок ящика деревянными планками. Соты нельзя обертывать бумагой.

Заплесневевший материал для исследования непригоден.

Лабораторная диагностика парагнильца включает микроскопию мазков из патологического материала и выделение культуры возбудителя с последующей ее идентификацией.

ПЕРВЫЙ ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Суспензию из материала и приготвление мазков также как при исследовании на европейский гнилец.

В положительных случаях в мазках обнаруживают одиночные грамположительные палочки с закругленными концами и крупные овальные споры, расположенные центрально.

Из суспензии, делают высевы в МПБ и на МПА с добавлением 10% нормальной сыворотки крови лошади. Через 24-48 ч культивирования при 37-38°С возбудитель вызывает легкое помутнение бульона. Позднее МПБ просветляется, а на дно пробирки выпадает осадок, поднимающийся при встряхивании в виде косички.

На МПА возбудитель образует плоские расплывчатые колонии с неровными краями или дает нежный ползучий рост.

В мазках из типичных колоний обнаруживают одиночные крупные грамположительные палочки. При микроскопии 2-3-суточных культур обнаруживают споры, расположенные центрально.

Выделенные культуры идентифицируют по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам.

Вас. paraalvei ферментирует с образованием кислоты без газа сахарозу, мальтозу, не ферментирует арабинозу, не восстанавливает нитраты, каталазоположителен, не вызывает гемолиза (течение 2-3 сут).

Диагноз на парагнилец считается установленным при выделении из патологического материала культуры со свойствами, характерными для Bac. paraalvei.

Срок исследования до 6 дней.

4. Сальмонеллез пчел - инфекционная болезнь пчелиных семей, вызываемая бактериями рода Salmonella.

Болезнь возникает при неудовлетворительных условиях содержания пчел в конце зимы и весной и характеризуется интенсивным размножением возбудителя в гемолимфе, куда он попадает из пораженного кишечника.

Больные пчелы в период весеннего облета выделяют зловонный, клейкий полужидкий кал желто-бурого цвета. Кишечник погибших пчел вздут и имеет грязно-серый или желто-серый цвет.

Болезнь могут вызывать следующие сальмонеллы: S. pullorum, S. gallinarum, S. typhimurium, S. dublin, S. cholerae suis и др.

Диагноз на сальмонеллез ставят на основании эпизоотологических данных, характерных признаков поражения пчелиных семей и результатов лабораторного исследования.

Для исследования в лабораторию направляют не менее 50 живых пчел с признаками заболевания. Пчел помещают в стеклянные банки, которые обвязывают 2-3 слоями марли.

Лабораторная диагностика сальмонеллеза включает микроскопию мазков из патологического материала и выделение культуры возбудителя с последующей ее идентификацией.

ПЕРВЫЙ ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Для приготовления мазков от 10-15 пчел, убитых парами эфира или хлороформа берут гемолимфу, делая прокол перепонки между 3 и 4  сегментами брюшка тонко оттянутой пастеровской пипеткой. Гемолимфу наносят на предметное стекло, мазок высушивают, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают по Граму.

В положительных случаях в мазках находят мелкие полиморфные грамотрицательные палочки.

Гемолимфу высевают в МПБ, на МПА и среду Эндо, Плоскирева или Левина.

Выделение и идентификацию возбудителей сальмонеллеза пчел осуществляют в соответствии с действующими Методическими указаниями по бактериологической диагностики сальмонеллеза животных.

Лабораторный диагноз на сальмонеллез считают установленным при выделении из патологического материала бактерий рода Salmonella.

Срок исследования до 5 дней.


5.
Септицемия - инфекционная болезнь пчелиных семей, сопровождающаяся размножением возбудителя в гемолимфе пчел.

Болезнь проявляется преимущественно весной и осенью на пасеках, расположенных в низких заболоченных местах и вызывает гибель взрослых пчел. Больные пчелы не способны к полету, тело их легко расчленяется на части, а гемолимфа приобретает мутный или молочно-белый цвет.

Возбудитель болезни – Pseudomonas apisepticum - полиморфная, подвижная грамотрицательная палочка, не образующая спор и капсул, факультативный аэроб.

Диагноз на септицемию ставят на основании эпизоотологических данных, характерных признаков поражения пчелиных семей и результатов лабораторного исследования.

Для исследования в лабораторию направляют не менее 50 живых пчел с признаками заболевания. Пчел помещают в стеклянные банки, закрытые 2-3 слоями марли.

Лабораторная диагностика включает микроскопию мазков из патологического материала и выделение культуры возбудителя с последующей ее идентификацией.

ПЕРВЫЙ ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Мазки из гемолимфы готовят как при сальмонеллезе. В положительном случае в мазках обнаруживают однородные грамотрицательные палочки.

Гемолимфу высевают в МПБ и на МПА. Для этого поверхность хитинового покрова 10-15 пчел слегка обжигают над пламенем горелки и берут гемолимфу.

Посевы инкубируют в термостате в аэробных условиях при температуре 37-38°С в течение 20-24 ч.

Pseudomonas apisepticum  вызывает помутнение МЛБ с образованием легкого осадка.

На поверхности МПА образует крупные, хорошо очерченные бесцвет-ные колонии с темним центром. Позднее появляется сплошной рост и культура приобретает зеленовато-мутный оттенок.

Идентификацию возбудителя проводят по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам.

Pseudomonas apisepticum ферментирует (через 2-3 суток инкубирования в термостате при  37-38°С) с образованием газа глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннит и лактозу (наиболее вирулентные штаммы маннит и лактозу не расщепляют), восстанавливает нитраты в нитриты, образует сероводород, реакция Фorec-Проскауэра положительная.

Диагноз на септицемию считается установленным при выделении из патологического материала культуры со свойствами, характерными для Pseudomonas apisepticum.

Срок исследования 5 суток.

болезни рыб

6. Псевдомоноз - инфекционная болезнь тепловодных, холодноводных и аквариумных рыб, встречающаяся в прудовых и индустриальных хозяйствах.

Возбудителями псевдомоноза рыб являются вирулентные штаммы бактерий рода Pseudomonas. Чаще всего встречаются виды Ps. fluorescens, Ps. putida, Ps. aureofaciens, Ps. cyprinisepticum, Ps. intestinalis, Ps. anguilliseptica, Ps. chlororaphis. Каждый из этих видов может вызвать заболевание самостоятельно, в ассоциации друг с другом или c другими микроорганизмами. При росте на МПБ вызывают помутнение среды, муаровые волны и образуют осадок; на МПА – колонии росинчатые, полупрозрачные, выпуклые, с ровными краями и гладкой поверхностью. На твердых средах бактерии образуют желто-зеленый флюоресцирующий пигмент.

 Для бактериологического исследования берут только живую больную рыбу. В каждом случае исследуют не менее 5 экземпляров рыб с признаками болезни.

Высевы производят из асцитной жидкости, печени, почек, селезенки, из крови (отдельно из каждой пробы) на чашки с МПА.

Посевы инкубируют при 25-26°С в течение 48-72 часов. На МПА бактерии рода Pseudomonas образуют бесцветные или серовато-белые полупрозрачные, круглые выпуклые колонии с ровными краями. На 3-4-е сутки отмечают образование желто-зеленого или оранжево-желтого флюоресцирующего пигмента. Рs. cyprinisepticum и некоторые штаммы Рs. fluorescens могут образовывать слизистые колонии.

При обнаружении на агаре характерного роста, делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют, затем подозрительные колонии пересевают на среду Клиглера и через 18 часов культуры, давшие на этой среде щелочную реакцию (столбик и скошенная поверхность окрашивается в малиновый цвет), подвергают дальнейшему изучению.

Для определения видовой принадлежности культур проводят высевы на среды Гисса с маннитом, сахарозой, мальтозой, лактозой, определяют подвижность.

Биологическую пробу ставят на 6-10 клинически здоровых рыбах того же вида и возраста, от которых выделена культура возбудителя, завезенных из хозяйства, благополучного по данному заболеванию.

Двухсуточную бульонную культуру вводят 4-6 рыбам внутримышечно и 4-6 рыбам внутрибрюшинно в дозе 0,3 мл. Температура воды в аквариуме, где содержится зараженная рыба, должна быть в пределах 15-25°С.

Одновременно ставят контроль на 6-10 рыбах, которым вводят стерильный МПБ в тех же дозах. Срок наблюдения 16 суток.

Биологическую пробу считают положительной, если все зараженные рыбы заболевают и не менее 50% из них погибает с признаками псевдомоноза, а из крови и внутренних органов реизолируют исходную культуру.

Лабораторный диагноз на псевдомоноз рыб считают установленным при выделении культуры со свойствами, характерными для возбудителей болезни, и патогенной для подопытных рыб.

7. АЭРОМОНОЗ КАРПОВ (краснуха, геморрагическая септицемия, инфекционная брюшная водянка, Люблинская болезнь) – инфекционная болезнь карповых рыб, характеризующаяся воспалением кожного покрова с образованием язв и рубцов, ерошением чешуи и пучеглазием.

Возбудитель болезни – Aeromonas hydrophila, А. punctata, A. sobria –  подвижные грамотрицательные палочки, спор и капсул не образуют. На МПБ создают равномерное помутнение, муаровые волны при встряхивании и хлопьевидный, беловато-серый осадок на дне. На поверхности среды образуется пленка. При инкубации посевов на МПА в течении суток вырастают круглые колонии, с ровными краями, выпуклые, блестящие, полупрозрачные, с голубоватым или беловато-матовым оттенком. Высоковирулентные штаммы Aeromonas hydrophila вызывают в опыте гибель белых мышей при внутрибрюшинном введении в дозе 0,01–0,1 мл двухсуточной бульонной культуры, а слабовирулентные – гибель белых мышей в дозе 0,025–0,5 мл.

ДИАГНОСТИКА. Диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов бактериологического исследования (выделение вирулентной культуры возбудителя ставится биопроба на карпах или мышах).


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

9149. Технология организации педагогической деятельности классного руководителя 113.5 KB
  Технология организации педагогической деятельности классного руководителя Технологические аспекты деятельности классного руководителя. Функции классного руководителя. Взаимодействие классного руководителя с учителями-предметниками,...
9150. Технология работы педагога по профилактике девиантного поведения подростков 120 KB
  Технология работы педагога по профилактике девиантного поведения подростков 1. Причины и факторы возникновения девиантного поведения. 2. Общая характеристика и психологические типы девиантного поведения учащихся. 3. Система работы педагога по устран...
9151. Ученическое самоуправление в школе. Деятельность организаций и объединений учащихся 65.5 KB
  Ученическое самоуправление в школе. Деятельность организаций и объединений учащихся Суть ученического самоуправления. Формы школьного самоуправления. Условия, способствующие развитию самоуправления. Детское движение и детские объед...
9152. Формирование мировоззрения, нравственно-эстетической и гражданской культуры личности 96.5 KB
  Формирование мировоззрения, нравственно-эстетической и гражданской культуры личности Формирование научного мировоззрения учащихся. Формирование нравственной культуры школьников. Развитие эстетической культуры детей в педагогическом...
9153. Формирование экологической культуры и здорового образа жизни учащихся 82 KB
  Формирование экологической культуры и здорового образа жизни учащихся. Понятия экология, экологическое образование и экологическое воспитание. 2. Задачи и содержание экологического воспитания школьников. Валеология как наука о здор...
9154. История развития научной психологии 25.75 KB
  История развития научной психологии Структура конспекта: Этапы становления и развития психологии как самостоятельной науки Основные направления зарубежной психологии XX века Основные направления отечественной психологии XX века...
9155. Предмет и методы психологии 22.57 KB
  Предмет и методы психологии Предмет психологии - закономерные связи субъекта с физическим и социальным миром, запечатленные в системе чувственных и умственных образов этого мира, мотивов, побуждающих действовать, а также в самих действиях, переживан...
9156. Психика и организм 18.13 KB
  Психика и организм Нервная система- совокупность нервных образований в организме человека и позвоночных животных. Ее основные функции: обеспечение контактов с внешним мироминтеграция внутренних органов в системы, координация и регуляция...
9157. Психика, поведение и деятельность 28.67 KB
  Психика, поведение и деятельность. Развитие психики в филогенезе Первый вопрос, который возникает при исследовании развития психики в онтогенезе, это вопрос об объективном критерии, который отделяет психическую жизнь от допсихической. Су...