50915

Физиология крови. Учебно-методическое пособие

Книга

Биология и генетика

Смесители а для подсчета эритроцитов; б для подсчета лейкоцитов; 1 капилляр; 2 ампула; 3 наконечник I II III группа крови агглютинины сывороток неизвестная кровь эритроциты антиА антиВ антиАВ цоликлоны неизвестная кровь эритроциты Rh Rh группа крови цоликлон антиД наличие или отсутствие агглютинации неизвестная кровь эритроциты группа крови Rh Rh Новосибирская Государственная медицинская академия Кафедра нормальной физиологии ФИЗИОЛОГИЯ...

Русский

2014-02-02

1.02 MB

33 чел.

32


Рис.1. Смесители

а - для подсчета эритроцитов; б - для подсчета лейкоцитов;

1 - капилляр; 2 - ампула; 3 - наконечник

I    II   III

      

группа крови

агглютинины сывороток

неизвестная кровь (эритроциты)

анти-А                 анти-В   анти-АВ

цоликлоны 

неизвестная кровь (эритроциты)

Rh+     Rh-

группа крови

цоликлон анти-Д

наличие или отсутствие агглютинации

неизвестная кровь (эритроциты)

группа крови

Rh+     Rh-

Новосибирская Государственная медицинская академия

Кафедра нормальной физиологии

ФИЗИОЛОГИЯ  КРОВИ

Учебно-методическое пособие

по проведению лабораторных работ

по курсу нормальной физиологии

Новосибирск

2004


Новосибирская Государственная медицинская академия

Кафедра нормальной физиологии

ФИЗИОЛОГИЯ  КРОВИ

Учебно-методическое пособие

по проведению лабораторных работ

и оформлению протоколов опытов

на занятиях по нормальной физиологии

Авторы-составители: Антропова Л.К., ассистент кафедры нормальной физиологии, канд.мед.наук

Курдубан Л.И., профессор кафедры нормальной физиологии, доктор мед.наук

Новосибирск

2004


УДК  612.1(072)

Физиология крови. Учебно-методическое пособие по проведению лабораторных работ и оформлению протоколов опытов  на занятиях по нормальной физиологии. Новосибирск: Новосибирская Государственная медицинская академия, 2001.  32с.

Настоящее учебно-методическое пособие представляет практические работы по физиологии крови человека и животных. Пособие составлено в соответствии с требованиями учебных программ по нормальной физиологии и предназначено для самостоятельной работы студентов при выполнении лабораторных работ.

Издание рассчитано на студентов всех факультетов медицинских академий, педагогических академий и университетов.

Печатается по постановлению ЦКМС от «17» июня 1998 г., протокол №7.

Авторы-составители: Антропова Л.К., ассистент кафедры нормальной физиологии, канд.мед.наук

Курдубан Л.И., профессор кафедры нормальной физиологии, доктор мед.наук

Редактор: Куликов В.Ю., заведующий кафедрой нормальной физиологии, профессор, доктор мед.наук

Технический редактор: Пыстина Е.А.

Рецензенты: доцент каф.педагогики и мед.психологии Меркушев В.В.

Доцент кафедры патологической физиологии

Начаров Ю.В.

  Новосибирская государственная медицинская академия, 2004


О г л а в л е н и е

  

Предисловие

2

1. Кровь как внутренняя среда организма

3

2.1.Определение осмотической резистентности эритроцитов

3

2.2.Буферные системы крови

4

2.3.Расчет осмотического и коллоидно-осмотического (онкотического) давления в биологических жидкостях

7

2. Форменные элементы крови

8

3.1.Подсчет форменных элементов крови

8

3.1.1.Подсчет эритроцитов в счетной камере с использованием смесителя для разведения

8

3.1.2.Подсчет эритроцитов в счетной камере с использованием пробирочного метода для разведения

12

3.1.3.Подсчет лейкоцитов в счетной камере с использованием смесителя для разведения

12

3.1.4.Подсчет лейкоцитов в счетной камере с использованием пробирочного метода для разведения

13

3.2.Определение количества гемоглобина

14

3.3.Вычисление цветового показателя

16

3. Плазма крови. Антигенные свойства крови

18

4.1.Определение скорости оседания эритроцитов

18

4.2.Определение группы крови системы АВО

20

4.2.1.Определение группы крови с помощью стандартных гемагглютинирующих сывороток

20

4.2.2. Определение группы крови с помощью цоликлонов

23

4.3.Определение группы крови системы резус

25

4.3.1.Определение группы крови с помощью стандартных гемагглютинирующих сывороток

25

4.3.2. Определение группы крови с помощью цоликлонов

26

4. Механизмы свертывания крови

28

5.1.Анализ механизма свертывания крови

28

5.2.Определение времени свертывания крови

30

5.3.Коагулография (коагулометрия)

31


ПРЕДИСЛОВИЕ

Настоящее учебно-методическое пособие является логическим продолжением предыдущего и посвящено вопросам проведения практических занятий по физиологии крови. Оно содержит разработки форм выполнения на современном методическом уровне ряда классических лабораторных работ, традиционно включаемых в курс обучения студентов.

Пособие знакомит студентов с принципами работы, возможностями и правилами использования новых медицинских приборов, выпускаемых отечественной промышленностью для научно-исследовательских лабораторий и клиник.

Методическое пособие включает описание наиболее важных методов исследования крови, имеющих значение для клиники; содержит разработки лабораторных работ, знакомящих студентов с рядом современных теоретических и практических проблем физиологии.

Вместе с тем в пособии сохранены ценные в методическом отношении классические лабораторные работы в общепринятой форме их выполнения.

В каждом разделе даны рекомендации по оформлению протоколов выполненных работ.


Глава
I

физиология крови

1. кРОВЬ КАК ВНУТРЕННЯЯ СРЕДА ОРГАНИЗМА

1.1.  Определение осмотической резистентности эритроцитов по отношению к гипотоническим растворам

Для оценки физико-химических свойств эритроцитов исследуют резистентность (стойкость) эритроцитов к различным воздействиям. Наибольшее распространение в клинической практике получило исследование осмотической резистентности эритроцитов.

   При помещении эритроцитов в изотонический раствор (0,9% раствор хлорида натрия) форма и объем клеток не изменяются, так как количество воды, поступающее в эритроцит, будет равно количеству воды, выходящему из него.

   В гипертонических растворах эритроциты сморщиваются, так как согласно осмотическим законам жидкость покидает клетку.

   В гипотонических растворах вода поступает из окружающей среды в эритроциты, они набухают, увеличиваются в размерах, оболочка клеток разрывается и гемоглобин выходит в раствор, окрашивая его в красный цвет.

   Осмотическая резистентность эритроцитов определяется такой концентрацией гипотонического раствора, при которой они не подвергаются гемолизу. Эритроциты одной и той же крови обладают неодинаковой осмотической резистентностью, поэтому различают начало гемолиза, то есть ту концентрацию гипотонического раствора, при которой гемолизу подвергаются наименее стойкие эритроциты (появляется слабое окрашивание гипотонического раствора жидкости), и полный гемолиз - ту концентрацию гипотонического раствора, при которой гемолизируются все эритроциты (раствор ярко окрашен, осадок отсутствует).

   Для работы необходимы: донорская кровь, гипотонический раствор хлорида натрия  разной концентрации (0,6%; 0,55%; 0,45%; 0,40%; 0,35%; 0,30%; 0,25%), восемь пробирок, штатив, глазная пипетка.

   Проведение работы. В штатив помещают 8 пробирок, в каждую из которых налито по 2 мл гипотонического раствора  хлористого натрия различной концентрации (от 0,6% до 0,25%). Затем в каждую пробирку глазной пипеткой капают по 2 капли дефибринированной крови. После заполнения всех пробирок кровью их встряхивают и оставляют стоять в течение часа при комнатной температуре. После этого по цвету раствора отмечают  минимальную и максимальную осмотическую резистентность эритроцитов. Границы осмотической резистентности эритроцитов человеческой крови: минимальная - 0,48% и максимальная - 0,32%.

   Оформление протокола. Записать полученные результаты в таблицу, оценить их, выявив наличие полного, частичного гемолиза или отсутствие его.

Таблица оформления протокола

№ пробирки

1

2

3

4

5

6

7

8

Концентрация (%) раствора NaCl Количество раствора (мл)

0,6

0,55

0,5

0,45

0,4

0,35

0,3

0,25

2.0

2.0

2.0

2.0

2.0

2.0

2.0

2.0

Результаты:

гемолиза нет (-),

гемолиз

неполный (+-),

гемолиз полный (+)

Вывод: Сравнить полученные результаты с физиологической нормой, дать определение понятий минимальной и максимальной резистентности эритроцитов, указать возможные клинические варианты изменений этого показателя.

1.2.  Буферные системы крови

   Наглядно убедиться в буферных свойствах сыворотки путем титрования (по Фриденталю) равных объемов сыворотки и воды (для сравнения) кислотой и щелочью до сдвига реакции соответственно в кислую и щелочную сторону.

    Кровь высших животных и особенно человека отличается большим постоянством активной реакции. Величена pH в среднем составляет 7.36 и колеблется в очень узких границах, не выходя за пределы 7.3-7.4, т.е. слабо щелочной реакции. Постоянство pH крови сохраняется, несмотря на непрерывное поступление в кровь кислых и щелочных продуктов обмена. Особенно много в тканях образуется кислых веществ (углекислота, молочная кислота и др.). Известно, что для того, чтобы сделать реакцию сыворотки щелочной (по фенолфталеину), к ней приходится прибавить в несколько десятков раз (40-70) больше едкого натра, чем к дистиллированной воде. А чтобы сделать реакцию кислой (по метилоранжу), к сыворотке нужно прибавить в несколько сотен раз (300– 400) больше соляной кислоты, чем к дистиллированной воде.

    Постоянство pH крови обеспечивается целым рядом регуляторных механизмов и в первую очередь следующими буферными системами: 1) гемоглобин (оксигемоглобин и восстановленный гемоглобин); 2) угольной кислоты – двууглекислый натрий (карбонатный буфер; 3) одно- и двузамещенного фосфата натрия (фосфатный буфер); 4) белков плазмы (белковый буфер).

    Для работы необходимы: 4 стаканчика, сыворотка крови, разведенная в 10 раз, 0.01N раствор NaOH, 0.1N раствор HCl, дистиллированная вода, индикаторы (метилоранж и фенолфталеин).

    Проведение работы. Для наблюдения буферных свойств  крови берут два стаканчика: один с сывороткой крови (5 мл), другой с дистиллированной водой (5 мл). Прибавляют в оба стаканчика по 2 капли метилоранжа и титруют, считая капли, 0.1N раствором соляной кислоты до появления неисчезающего при взбалтывании красного окрашивания. Титрование необходимо начинать с воды, которая не обладает буферными свойствами и служит для контроля. Для простоты отсчет титрования ведут в каплях.

    Затем берут два других стаканчика и снова наливают в один - 5 мл сыворотки крови, а в другой - 5 мл дистиллированной воды. Прибавляют в каждый стаканчик по 2 капли фенолфталеина и, считая капли,  титруют 0.01N раствором едкого натра до неисчезающего в течение минуты слабого фиолетового окрашивания. Для более точного сравнения нужно поставить оба стаканчика рядом на белую бумагу.

    

Оформление протокола. Записать полученные результаты в таблицу, сделать вывод по результатам проведенного исследования. Ответить на вопросы.

Таблица оформления протокола

Исследуемая жидкость

Индикатор

Титрующий раствор

Количество титрующего раствора (капли)

Вода

Метилоранж

2 капли

HCl

Сыворотка крови

Метилоранж

2 капли

HCl

Вода

Фенолфталеин 2 капли

NaOH

Сыворотка крови

Фенолфталеин 2 капли

NaOH

Вывод: Сравнить полученные результаты титрования: а)воды и сыворотки крови; б)сыворотки крови щелочью и кислотой.

Объяснить, что доказывает проведенный опыт. Ответить на вопросы.

  1.  Как объяснить то, что на титрование сыворотки крови идет больше кислоты (HCl) и щелочи (NaOH), чем для воды?
  2.  Что называется щелочным резервом крови?
  3.  Во сколько раз больше нужно прибавить соляной кислоты к неразведенной сыворотке крови, чем к воде, чтобы сделать реакцию кислой (по метилоранжу)?
  4.  Во сколько раз больше нужно прибавить едкого натра к неразведенной сыворотке крови, чем к воде, чтобы сделать реакцию щелочной (по фенолфталеину)?
  5.  Как можно объяснить то, что кровь способна нейтрализовать кислоты в большей степени, чем щелочи?

1.3. Расчет осмотического и коллоидно-осмотического

(онкотического) давлений в биологических жидкостях

Осмотическая концентрация жидкости зависит от общего числа растворенных в ней частиц и измеряется в осмолях.

Осмоль - осмотическая концентрация одного моля неэлектролита, растворенного в 1 литре воды. (Моль вещества - это молекулярный вес, выраженный в граммах). Осмотическое давление, которое может развить этот раствор равно 22,4 атмосферы. Одна атмосфера равна 760 мм рт.ст.

Осмотическая концентрация плазмы крови и других биологических жидкостей измеряется в миллиосмолях (мосм), 1 мосм составляет 1/1000 осмоля.

Оформление протокола. Решить задачи, сделать вывод.

Задача 1. Осмотическая концентрация плазмы крови равна 300 мосм. Какое осмотическое давление может развить этот раствор? Выразите его в атмосферах и в мм рт.ст.

Задача 2. Осмотическое давление белков плазмы равно 25 мм рт.ст. Выразите эту величину в атмосферах. Чему равна осмотическая концентрация этого раствора в мосм? Какая часть общей осмолярности крови обеспечивается белками (в %%)?

Задача 3. Концентрация глюкозы в крови 6,6 мосм/л. Какая часть общей осмолярности крови зависит от содержания в ней глюкозы (в %%)?

Задача 4. Концентрация натрия в крови 145 ммоль/л. Изотонический коэффициент хлористого натрия 1,8. Какая часть общей осмолярности крови обеспечивается за счет хлорида натрия (в %%)?

Вывод. Указать какое осмотически активное вещество играет главную роль в формировании осмолярности крови. Дать определение понятиям: «осмотическое давление» и «осмотическая концентрация». Написать в каких единицах измеряются эти величины.


2. ФОРМЕННые ЭЛЕМЕНТЫ КРОВИ
 

2.1.  Подсчет форменных элементов крови

В качестве унифицированных методов подсчета форменных элементов крови (эритроцитов, лейкоцитов) приняты два способа: подсчет в счетной камере и в автоматическом счетчике.

Подсчет в счетной камере осуществляется под микроскопом в определенном количестве квадратов счетной сетки. Кровь предварительно разбавляют в специальных смесителях (меланжерах) или пробирочным методом, чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчета. Заполняют разбавленной кровью счетную камеру и подсчитывают число форменных элементов. Зная объем камеры и степень разведения крови, рассчитывают число клеток крови в 1 мкл цельной крови.

Метод автоматического подсчета эритроцитов (лейкоцитов) производится с помощью счетчика форменных элементов. Это облегчает выполнение исследования и делает его более производительным. Принцип работы большинства счетчиков основан на кондуктометрическом методе. Определенное количество разведенной изотоническим раствором хлористого натрия крови пропускают через микроотверстие. Проходящая клетка увеличивает сопротивление между электродами, возникающий импульс передается на счетное устройство с цифровой индикацией.

2.1.1. Подсчет количества эритроцитов в счетной камере

с использованием меланжеров для разведения крови

Для работы необходимы:  донорская кровь, смеситель (меланжер) для эритроцитов, камера с сеткой Горяева, 3% раствор хлористого натрия, стаканчик для разбавляющего раствора, микроскоп, вата.

Проведение работы. Ознакомиться с устройством меланжера и счетной камеры.

Меланжер для подсчета эритроцитов представляет собой капилляр с ампулообразным расширением и с бусинкой красного цвета внутри. На меланжере нанесены три метки: 0,5; 1,0; 101.

1. Разведение крови

В меланжер кровь набирают до метки «0,5». Излишки крови собирают марлевым тампоном.

Затем опускают кончик капилляра смесителя в стаканчик с гипертоническим (3%) раствором хлорида натрия и набирают его (раствор) с помощью резиновой трубки и мундштука до метки «101», чем достигают разведения в 200 раз. Гипертонический раствор хлорида натрия вызывает плазмолиз эритроцитов, повышающий оптическую плотность клеток. Во избежание нарушения точности анализа, нельзя допускать попадания воздуха в капилляр.

Покачиванием смесителя, отверстия которого зажимают между пальцами, кровь тщательно перемешивают для равномерного распределения  эритроцитов.

2. Заполнение счетной камеры

Рис.2. Счетная камера. А - вид сверху; Б - вид сбоку; В - сетка Горяева: 1 - маленький квадрат, 2 - большой квадрат.

Счетная камера (рис.2) состоит из толстого прямоугольной формы стекла с двумя сетками Горяева, нанесенными на средние площадки камеры. Кнаружи от желобков, образующих букву «Н», находятся две прямоугольные пластинки, к которым прикладывается покровное стекло. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, 25 из которых разделены поперечными и продольными полосками на 16 малых. Сторона малого квадрата составляет 1/20 мм, площадь - 1/400 мм2, глубина камеры - 1/10 мм, следовательно, объем камеры над малым квадратом равен 1/4000 мм3.

Незаполненную счетную камеру помещают под микроскоп и вначале под малым, а затем большим увеличением рассматривают сетку, находят большие и малые квадраты.

Затем счетную камеру и покровное стекло промывают водой, протирают марлевым тампоном, смоченным эфиром, спиртом и сухой полотняной салфеткой.

Придавливают покровное стекло к боковым поверхностям камеры (см. описание камеры).

Перед заполнением камеры выпускают на ватный тампон две-три капли содержимого из капилляра смесителя, затем заполняют камеру: наносят каплю разведенной крови на среднюю пластинку у края покровного стекла. В силу капиллярности жидкость равномерно распределится над сеткой.

После заполнения камеру оставляют на одну минуту для равномерного распределения и оседания эритроцитов.

3. Подсчет эритроцитов

Камеру кладут на предметный столик микроскопа, установленный горизонтально, и приступают к подсчету эритроцитов при малом увеличении микроскопа (объектив 8x, окуляр 10x или 15x). Поле зрения должно быть затемнено диафрагмой и несколько опущенным конденсатором. Подсчитывают эритроциты в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых (всего в 5 x 16 = 80 малых квадратах), расположенных по диагонали. Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границах квадратов руководствуются правилом Егорова: считают эритроциты, находящиеся внутри квадрата и на его верхней и левой границах.

Подсчитав, таким образом, сумму эритроцитов в 5 больших квадратах (т.е. в 80 малых), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном малом квадрате - Э/80. Зная, что объем пространства камеры над одним малым квадратом равен 1/4000 мм3, умножают найденное число на 4000. Получают число эритроцитов в 1 мкл разведенной крови. Умножив на кратность разведения (200), рассчитывают количество эритроцитов в 1 мкл цельной крови.

Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

                        Х =  (А 4000 200) / 80,

где Х - искомое число эритроцитов в 1 мкл крови;

А - число эритроцитов в 80 малых квадратах;

1/4000 мм3 - объем разведенной крови над одним малым

квадратом;

80 - число малых квадратов;

200 - степень разведения.

Полученное число эритроцитов умножают на 106 и получают содержание клеток в 1 литре крови.

Ошибка метода составляет 2-3%.

Возможные источники ошибок при подсчете эритроцитов:

  1.  Образование сгустка во время взятия и разведения крови.

Несоблюдение условий, обеспечивающих должную высоту камеры (неправильный выбор покровного стекла и плохое его прижатие к камере).

Проведение подсчета сразу после заполнения камеры, когда клетки еще не распределились равномерно и не осели.

Попадание воздуха в капилляр с кровью.

Оформление протокола.  Указать чем разводится кровь для подсчета эритроцитов и почему. Написать формулу подсчета эритроцитов, провести ее анализ – описать значение всех цифр в формуле. Нарисовать фрагмент сетки Горяева, указать площадь малого квадрата и объем крови над ним. Начертить пять больших квадратов, указать подсчитанное количество эритроцитов в них. Записать нормальные значения количества эритроцитов у мужчин, женщин (новорожденных).

Вывод. Сравнить полученный результат с нормой.

2.1.2. Подсчет эритроцитов с использованием пробирочного

метода разведения крови

Для работы необходимы: донорская кровь, химические или серологические пробирки с пробками, капиллярная пипетка от гемометра Сали, градуированная пипетка для отмеривания разводящей жидкости, камера с сеткой Горяева, 3% раствор хлористого натрия (желательно подкрасить красителем типа метиленового синего), микроскоп, вата.

Проведение работы. В чистую пробирку точно отмеривают 4 мл разводящей жидкости и закрывают ее резиновой пробкой. Кровь в количестве 20 мкл набирают до метки в капилляр от гемометра Сали. Осторожно выдувают кровь из капилляра в пробирку и тщательно перемешивают и промывают капилляр разводящей жидкостью; полученное разведение можно приравнять к 1:200. Капиллярную пипетку промывают несколько раз дистиллированной водой.

Заполнение камеры, подсчет эритроцитов, анализ результатов и оформление протокола осуществляют, как указано в работе 3.1.1. в пунктах 2 и 3. Источник ошибок и точность метода такие же, как и в работе 3.1.1.

2.1.3. Подсчет лейкоцитов в счетной камере

с использованием меланжеров для разведения крови

Для работы необходимы: донорская кровь, смеситель (меланжер) для лейкоцитов, камера с сеткой Горяева, 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим, микроскоп, вата.

Проведение работы. Взятие и разведение крови осуществляется с помощью смесителя для лейкоцитов (рис.1.). Смеситель имеет меньший объем ампулы по сравнению со смесителем для эритроцитов и содержит белую бусинку. Набирают кровь до метки «0,5», а затем - уксусную кислоту до метки «11», чем достигают разведения в 20 раз. Для разрушения оболочки эритроцитов и подкрашивания ядер лейкоцитов после перемешивания содержимого ждут 5 минут.

Заполнение камеры проводят также, как описано в работе 3.1.1. Подсчет лейкоцитов осуществляется в 25 больших квадратах, что соответствует 25 16 = 400 малым. Количество лейкоцитов в 1мкл крови вычисляют по фопрмуле:

                        Х =  (А 4000 200) / 80,

где А - найденное количество лейкоцитов в 400 больших квадратах;

20 - степень разведения крови;

1/4000 мм3 - объем разведенной крови над малым квадратом.

Для определения числа лейкоцитов в 1 л крови, полученный результат умножают на 106.

Ошибка метода составляет в среднем 7%.

Источники ошибок при подсчете лейкоцитов те же, что и при подсчете эритроцитов. Кроме того, в число лейкоцитов могут войти и эритробласты, если они имеются в крови. Их наличие у испытуемого выясняют при изучении морфологии клеток в фиксированных и окрашенных препаратах.

Оформление протокола. Коротко описать метод, указать чем разводят кровь для подсчета лейкоцитов; записать формулу расчета количества лейкоцитов - провести ее анализ. Выписать нормальные значения количества лейкоцитов у мужчин, женщин (новорожденных).

2.1.4. Подсчет лейкоцитов с использованием пробирочного

метода разведения крови

Для работы необходимы: донорская кровь, химические или серологические пробирки с пробками, капиллярная пипетка от гемометра Сали, градуированная пипетка для отмеривания разводящей жидкости на 1 мл, камера с сеткой Горяева, 4-5% раствор уксусной кислоты (подкрашенный метиленовым синим), дистиллированная вода, микроскоп, вата.

Проведение работы. В чистую пробирку точно отмеривают 4мл 5% раствора уксусной кислоты. Капиллярной пипеткой от гемометра Сали набирают кровь до метки (20 мкл) и осторожно выдувают ее в разводящую жидкость; промывают этой жидкостью капилляр, пробирку закрывают пробкой и тщательно перемешивают. Таким образом, достигается разведение крови в 20 раз. После взятия крови капиллярная пипетка должна быть промыта несколько раз дистиллированной водой.

Заполнение камеры, подсчет лейкоцитов, анализ результатов и оформление протокола осуществляют, как указано в работе 3.1.1. Источник ошибок и точность метода такие же, как и в работе 3.1.1.

2.2. Определение количества гемоглобина в крови

по методу Сали

Гемоглобин (Hb) – основной дыхательный пигмент эритроцитов, относящийся к хромопротеидам и обеспечивающий ткани кислородом, состоит из белка – глобина и гема – соединения протопорфирина IX с железом. Последний придает гемоглобину характерную окраску. Присоединение к гему различных химических групп сопровождается изменением окраски. На этом основано определение концентрации гемоглобина крови.

Для определения содержания Hb в крови предложено много различных методов. Наибольшее распространение получили колориметрические методы, основанные на колориметрии производных гемоглобина. В настоящее время принят унифицированный гемиглобинцианидный метод определения количества гемоглобина. Гемоглобин окисляют в метгемоглобин (гемиглобин) железосинеродистым калием; образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид) определяют колориметрически с помощью фотоэлектроколориметра, счетчика и гематологического автомата.

Наиболее распространенным в прошлом было определение количества гемоглобина по методу Сали. Этот метод чрезвычайно прост и быстро выполним, но недостаточно точен. Он основан на колориметрии солянокислого гематина. При смешивании крови с соляной кислотой Hb превращается в солянокислый гематин, имеющий коричневый цвет. Полученную смесь разбавляют дистиллированной водой до цвета раствора в стандартных пробирках, находящихся в крайних гнездах гемометра. Этот раствор имеет интенсивность окраски, соответствующую содержанию гемоглобина, равному 166,7 г/л.

В норме в крови содержится около 140 г/л гемоглобина (у женщин 120-140 г/л, у мужчин 130-160 г/л, у новорожденных – 217 г/л).

Рис.3. Гемометр Сали

1 - пробирки со стандартным раствором; 2 – пробирка для исследуемой крови; 3 - пипетка для крови; 4 - пипетка для воды

Для работы необходимы: донорская кровь, гемометр Сали, 0.1N раствор соляной кислоты, дистиллированная вода.

Проведение работы

  1.  В градуированную пробирку гемометра наливают до первой метки 0,1N раствор соляной кислоты.
  2.  Капиллярной пипеткой набирают кровь точно до метки 20 мм и осторожно выдувают ее на дно пробирки. Не вынимая пипетки из пробирки, промывают ее соляной кислотой, встряхивая пробирку, тщательно перемешивают ее содержимое. Для завершения реакции смеси дают постоять не менее пяти минут.
  3.  Специальной пипеткой прибавляют к смеси по каплям дистиллированную воду, перемешивая содержимое палочкой. Это продолжается до тех пор, пока цвет исследуемой жидкости не сравняется с окраской стандартного раствора.
  4.  Отмечают по шкале, на каком делении стоит уровень верхнего края мениска, полученного раствора солянокислого гематина. Если по шкале пробирки единица измерения Hb  г%, то, чтобы выразить результат в системе СИ, умножают найденную цифру на 10. Например, Hb = 13,2 г% 10 = 132 г/л.

Источниками ошибок могут быть: выцветшие стандартные растворы в старых гемометрах; неточное соблюдение пятиминутной выдержки перед началом разведения; попадание воздуха в капилляр с кровью.

Оформление протокола. Назвать принцип метода определения количества Hb, отметить чем разводится кровь и почему. Записать найденное количество гемоглобина и нормальное содержание гемоглобина у мужчин и женщин (у детей); зарисовать гемометр Сали и капилляр для взятия крови.

Вывод. Сравнить полученные результаты с нормой, указать соответствует ли норме найденное количество гемоглобина.

2.3. Вычисление цветового показателя

Цветовой показатель (ЦП) - относительная величина, которая дает представление о содержании гемоглобина (Hb) в отдельном эритроците (Э) по сравнению со стандартом.

Стандарт вычисляется следующим образом. Содержание Hb в одном Э равно частному от деления количества Hb на количество Э. Если за нормальное количество гемоглобина принять 166 г/л, а эритроцитов 51012/л, то содержание Hb в одном Э равно = 33пикограмма/л. Эта величина 33 пг условно принимается за единицу.

Формула, выражающая отношение стандартной величины () к содержанию этих же показателей в исследуемой крови (например, ) после ряда преобразований имеет следующий вид

    Hb г/л 3       

ЦП = _________________________________________  

2 первые цифры числа эритроцитов 10    

В нашем примере

          118 г/л 3

ЦП = __________ = 0,9

3910

Цветовой показатель используется в клинике для дифференцировки анемий. Большинство анемий сопровождается гипохромией (уменьшением количества Hb в Э), ЦП при этом будет меньше 1. Гипохромия наступает либо в результате уменьшения размеров Э, либо количества гемоглобина (при анемиях, вызванных кровопотерей, инфекцией и др.). Гиперхромия  наблюдается при злокачественных анемиях, при тяжелых анемиях у детей. ЦП в этих случаях будет больше 1. Гиперхромия зависит исключительно от увеличения размеров эритроцитов.

У здоровых ЦП = 0,8-1,0.

Проведение работы. Для выполнения работы следует использовать результаты определения количества Э и Hb. Полученные у одного и того же человека (в нашем случае данные предыдущих работ – 3.1, 3.2).

Оформление протокола. Написать, что называется цветовым показателем, формулу расчета ЦП, рассчитать ЦП исследуемой крови.

Вывод. Сравнить полученный результат с нормой, назвать возможные изменения в составе крови, являющиеся причиной гипо- и гиперхромии.


3. ПЛАЗМА КРОВИ. АНТИГЕННЫЕ СВОЙСТВА КРОВИ
 

3.1. Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ)

по Панченкову

При стоянии стабилизированной крови эритроциты в силу тяжести оседают. При этом кровь делится на два слоя: верхний (бесцветный, прозрачный) - плазму и нижний (красный, непрозрачный) - эритроциты.

Скорость оседания эритроцитов сильно колеблется в зависимости от состояния организма.

Рис.4. Прибор Панченкова

Для определения СОЭ применяют прибор Панченкова. Прибор представляет собой штатив, в котором могут быть укреплены в вертикальном положении специальные капилляры. Капилляры градуированы в миллиметрах. Метка «О» стоит на расстоянии 100 мм от нижнего конца. На капилляре есть еще две метки: «К» (кровь) - на уровне «нуль» и метка «Р» (реактив) - на уровне 50 мм.

Для работы необходимы: прибор Панченкова, часовое стекло, вата, 5% раствор лимоннокислого натрия (цитрат).

Проведение работы

  1.  Капилляр промывают 5% раствором цитрата. Затем набирают цитрат до метки «Р» (реактив) и выдувают его на часовое стекло.
  2.  В тот же капилляр двукратно набирают донорскую кровь до метки «К».
  3.  Обе порции крови смешивают на часовом стекле с имеющимся цитратом.
  4.  Полученную таким образом смесь крови с цитратом (в соотношении 4:1) набирают в капилляр до метки «О» и ставят капилляр в штатив.

Следует иметь в виду, что капилляр держат горизонтально, погрузив его кончик в основание капли, при этом кровь по закону капиллярности сама заполняет капилляр. Через час  смотрят, скольким миллиметрам равна высота образовавшегося вертикального столбика плазмы в капилляре. Число миллиметров плазмы и является мерой СОЭ.

Норма СОЭ от 1 до 10 мм/час у мужчин, от 2 до 15 мм/час у женщин, до 45 мм/час у беременных женщин.

Обратите внимание, что СОЭ нельзя вычислять, измеряя сколько плазмы образовалось за 30 минут и умножая на 2, т.к. процесс оседания протекает во времени неравномерно.

Оформление протокола. Зарисовать прибор Панченкова и отдельно капилляр с метками. Отметить чем и в каком соотношении разводится кровь.

Вывод. Указать нормальные величины СОЭ у мужчин, женщин (детей), сравнить с ними полученные результаты. Объяснить предполагаемый механизм СОЭ, как влияет на СОЭ увеличение содержания глобулинов, фибриногена.

Определение группы крови

В клинической практике применяют два способа определения групп крови: с помощью стандартных гемагглютинирующих сывороток и цоликлонов – специальных реагентов, содержащих человеческие антитела.

3.2.  Определение группы крови системы АВО

3.2.1. Определение группы крови с помощью стандартных гемагглютинирующих сывороток

На основании реакции агглютинации эритроцитов установлено, что кровь каждого человека принадлежит к одной из четырех групп.  Кровь различных групп отличается наличием агглютининов и агглютиногенов. Агглютинины (склеивающие вещества) находятся в  плазме. Агглютиногены – вещества, способные  склеиваться, содержатся в эритроцитах.

Имеются два вида агглютиногенов – А и В  и соответственно два вида агглютининов – и . Реакция агглютинации, т. е. склеивание  эритроцитов, наступает лишь при смешении одноименных агглютининов и агглютиногенов, например и А или и В. Агглютинацию нельзя смешивать с процессом  свертывания крови – выпадением фибрина в  виде нерастворимых нитей.

Определение группы крови имеет практическое значение для  переливания  крови. При  этом учитывают, прежде всего, свойства эритроцитов донора, так как плазма вводится в малом количестве и, разводясь в крови реципиента, теряет свои агглютинирующие качества.  Однако при переливании значительного количества крови, учитывают и агглютинины донора.

Для работы необходимы: донорская кровь, стандартные сыворотки I, II и III групп двух разных серий, предметные стекла (чашка Петри), пипетки, стеклянные палочки.

Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток,  содержащих известные агглютинины.

  1.  На чистые чашки Петри в обозначенные участки наносят по 1 капле сыворотки I, II и III групп двух серий, содержащих соответственно агглютинины:  I и , II и III.
  2.  В каждую каплю сыворотки с помощью стеклянных палочек или разных углов предметных стекол вносят небольшое количество донорской крови и тщательно размешивают кровь в капле сыворотки палочкой до тех пор, пока смесь не примет равномерного розового цвета.
  3.  Покачивают чашку Петри в течение 5 минут. При  наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков.
  4.  По мере наступления агглютинации, но не раньше, чем через 3 минуты в каждую смесь добавляют по одной капле физиологического раствора для предупреждения образования «монетных столбиков» из эритроцитов.
  5.  Определяют наличие агглютинации в каждой капле и устанавливают группу крови.
  •  Отсутствие агглютинации во всех трех  каплях говорит об отсутствии агглютиногенов А и В в эритроцитах исследуемой крови, такая кровь принадлежит O(I) группе.
  •  Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащих соответственно агглютинины  и , то, следовательно, эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит  А(II) группе.
  •  Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащих агглютинины  и , то эритроциты исследуемой крови  содержат агглютиноген В и эта кровь принадлежит В(III) группе.
  •  Наличие агглютинации в сыворотках всех трех групп указывает на присутствие в эритроцитах исследуемой крови агглютиногенов А и В, следовательно, она принадлежит АВ(IV) группе. Однако, в этом случае для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов необходимо провести дополнительное исследование со стандартной сывороткой группы АВ (IV). Отсутствие агглютинации в этой капле позволит считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к АВ(IV).

Источниками ошибок могут быть:

  1.  Оценка реакции отрицательной при фактическом наличие агглютинации. Это может быть обусловлено:
    1.  Поздней или слабовыраженной агглютинацией в связи с малой активностью стандартных сывороток;
    2.  Нарушением соотношения 1:10 при взятии большого количества крови;
    3.  Наличием температуры воздуха большей, чем 25оС. В таких случаях исследования проводят при охлаждении стекла.
  2.  Оценка реакции положительной  при практическом отсутствии агглютинации. Это может быть обусловлено:
    1.  Образованием «монетных столбиков»;
    2.  Наличием панагглютинации, которая развивается при

t=15 оС; для ее исключения следует повторить определение при более высокой температуре;

  1.  Подсыханием сывороток и образованием по краям капель «зернистости», принимаемой за агглютинацию. Это может быть в тех случаях, когда чтение результатов производится более чем через 5 минут.

Оформление протокола. Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученные результаты: обозначить номер группы крови, агглютинины стандартных сывороток и отсутствие или наличие агглютинации, например, -

Вывод. Назвать и правильно записать группу крови. Обосновать полученный результат. Указать в каких случаях исследуемая кровь может быть использована в качестве донорской. Нарисовать схему  совместимости групп крови системы АВО.

3.2.1. Определение группы крови системы АВО

с помощью цоликлонов

Цоликлон – реагент, действующим началом которого являются моноклональные человеческие антитела. Моноклональные человеческие антитела продуцируются гетерогибридомой, полученной в результате слияния человеческой лимфобластоидной линии с миеломной клеточной линией мыши. Цоликлоны изготовляются из асцитической жидкости таких мышей.

Для определения групп крови системы АВО используются цоликлоны анти-А, анти-В и цоликлон анти-АВ, содержащий смесь анти-А и анти-В антител.

Анти-А и анти-В антитела цоликлона при смешивании с нативной кровью вызывают прямую агглютинацию эритроцитов, содержащих соответствующие А и В антигены. Заключение о присутствии антигена в исследуемых эритроцитах делают по наличию положительной реакции агглютинации.

Для работы необходимы: донорская кровь, цоликлоны (анти-А, анти-В, анти-АВ), предметные стекла (чашка Петри), пипетки, стеклянные палочки.

Проведение работы. Принцип определения групп крови человека системы АВО с помощью цоликлонов такой же, как и со стандартными гемагглютинирующими сыворотками.

  1.  Наносят на чашку Петри индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.
  2.  Рядом с каплями антител помещают по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл).
  3.  Смешивают кровь с реагентом.
  4.  Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании чашки Петри в течение 3 минут.
  5.  Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов.
  •  Отсутствие агглютинации во всех трех  каплях говорит об   отсутствии агглютиногенов А и В в эритроцитах исследуемой крови, такая кровь принадлежит O(I) группе.
  •  Если агглютинация произошла с цоликлонами анти-А и анти- АВ (I, II капли реагента), то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит  А(II) группе.
  •  Если агглютинация произошла с цоликлонами анти-В и анти-АВ, то эритроциты исследуемой крови  содержат агглютиноген В и эта кровь принадлежит В(III) группе.

Наличие агглютинации с цоликлонами анти-А, анти-В и анти-АВ свидетельствует о присутствии в эритроцитах исследуемой крови агглютиногенов А и В, следовательно, она принадлежит АВ(IV) группе.

Оформление протокола. Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученные результаты, обозначив содержание анти-А, анти-В и анти-АВ антител в чашках Петри и отсутствие или наличие агглютинации, например:

Вывод. Назвать и правильно записать группу крови. Обосновать полученный результат. Указать в каких случаях исследуемая кровь может быть использована в качестве донорской. Нарисовать схему  совместимости групп крови системы АВО, и схему оценки результатов определения группы крови по цоликлонам.

3.3.  Определение группы крови системы резус

3.3.1. Определение группы крови человека системы резус

с применением стандартной сыворотки

Для работы необходимы: донорская кровь, универсальная сыворотка, содержащая анти-Д-антирезус-антитела, 2 пробирки, пипетки, физиологический раствор, микроскоп.

Проведение работы 

  1.  В обе пробирки внести по одной капле исследуемых эритроцитов (донорской крови). Затем добавить по 2 капли универсального реагента (сыворотки, содержащей антирезус-Д-агглютинины).
  2.  Содержимое пробирок перемешать, положив их сначала на один бок (в течение 1,5 мин), затем – на другой на 1,5 мин. Такие манипуляции усиливают растекание смеси по стенкам пробирок и ускоряют агглютинацию. Как правило, агглютинация наступает в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса «антиген-антитело», а также ввиду возможности замедленной реакции при слабовыраженной агглютинабельности эритроцитов, наблюдение проводят 3 мин. Через 3 мин, оценивают результаты.
  3.  Перед чтением результатов, для исключения неспецифической агрегации эритроцитов, добавляют 5-8 мл физиологического раствора хлористого натрия. Смесь перемешивают, не взбалтывая, путем одно-двухкратного перевертывания пробирок.
  4.  Оценку результатов проводят визуально. Появление хлопьев из эритроцитов (агглютинатов) на фоне прозрачной жидкости указывает на наличие резус-фактора в исследуемой крови (положительная реакция). При отрицательной реакции в пробирке видна равномерно окрашенная в розовый цвет, слегка опалесцирующая жидкость.

Оформление протокола. Записать принцип метода, ход работы. Зарисовать результаты реакции при микроскопическом исследовании, например,

Вывод. Назвать и правильно записать группу крови, например, кровь резус положительная (Rh+) или резус отрицательная (Rh-). Обосновать это заключение. Дать определение резус-иммунизации. Зарисовать схему резус-иммунизации крови.

3.3.2. Определение группы крови системы резус

с помощью цоликлона анти-Д

Действующим началом цоликлона анти-Д являются моноклональные человеческие анти-Д-антитела. Последние вызывают агглютинацию эритроцитов, содержащих «Д» антиген.

Для работы необходимы: донорская кровь, цоликлон анти-Д, предметные стекла (чашка Петри), пипетка, стеклянная палочка.

Проведение работы. Принцип определения группы крови человека системы резус тот же, что и при определении по системе АВО.

  1.  На чашку Петри (предметное стекло) наносят большую капле (0,1 мл) цоликлона анти-Д.
  2.  Рядом с этой каплей помещают маленькую каплю исследуемой крови (0,01-0,05 мл).
  3.  Индивидуальной стеклянной палочкой смешивают кровь с цоликлоном анти-Д.
  4.  Через 20-30с после смешивания реагента с кровью начинают легкое покачивание чашки Петри и продолжают его в течение 3 минут.
  5.  Наблюдают за ходом реакции визуально.
  6.  Результаты реакции учитывают через 3 минуты. Положительный результат выражается в плотной крупнолепестковой реакции агглютинации.

Заключение о присутствии Д-антигена в исследуемых эритроцитах делают по наличию положительной реакции агглютинации: есть реакция агглютинации – кровь резус положительная (Rh+), нет агглютинации – кровь резус отрицательная (Rh-).

Оформление протокола. Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученный на чашке Петри результат: обозначить содержание анти-Д-антител в капле цоликлона и указать отсутствие или наличие агглютинации, например,

Вывод. Назвать и правильно записать группу исследуемой крови (Rh+ или Rh-). Обосновать это заключение. Реципиенту с какой группой крови системы резус можно перелить Rh+, Rh- кровь. Дать определение резус-иммунизации. Зарисовать схему резус-иммунизации крови.


4.
СВОЙСТВА ПЛАЗМЫ. мЕХАНИЗМЫ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ

4.1. Анализ механизма свертывания крови

Свертывание крови относится к важнейшим  защитным реакциям организма. Свертываясь,  кровь образует сгустки, что ведет к прекращению кровотечения. Свертывание крови обусловлено функцией свертывающей системы, под которой понимают сложный биохимический и физиологический комплекс.

Для работы необходимы: донорская кровь, 7 пробирок (одна из них мерная), штатив, растворы гепарина (1:100), щавеливокислого натрия (5%), хлористого кальция (5%), пипетка для забора плазмы крови, металлическая “метелка” для дефибринирования крови, стакан с холодной водой и льдом, секундомер, центрифуга.

Проведение работы 

  1.  Взять пробирки 1, 2, 3, 4, 5. Предварительно в пробирку 4 налить 1-2 капли гепарина (раствор 1:100), в пробирку 5 – 0,5 мл щавелевокислого натрия. Затем во все пробирки налить донорскую кровь в следующем объеме:

Пробирка 1 – 1 мл,

Пробирка 2 – 1 мл,

Пробирка 3 – 4 мл,

Пробирка 4 – 1 мл,

Пробирка 5 – 4 мл.

Заметить время взятия крови.

  1.  Пробирку 1 поместить в штатив, а пробирку 2 – в стакан с холодной водой. В обеих пробирках наблюдать скорость свертывания крови. Для этого каждую минуту с момента взятия крови наклонять пробирку. Как только образуется сгусток, кровь перестает вытекать из пробирки. Отметить разницу во времени свертывания крови в 1-ой и 2-ой пробирках.
  2.  Кровь в пробирке 3 сразу же после взятия взбалтывать «метелочкой» в течение 10-15 минут. Выпадающие нити фибрина наматываются на «метелочку» и кровь теряет способность свертываться. Под водопроводной водой отмыть нити фибрина от эритроцитов.
  3.  Содержимое пробирки 4 хорошо перемешать, через 15-20 минут наклонить пробирку и отметить отсутствие сгустка.
  4.  Содержимое пробирки 5 хорошо перемешать. Выждав 20 минут, половину крови из пробирки 5 отлить в пробирку 6 и добавить в нее 1 каплю 5% раствора CaCl2. Отметить восстановление способности крови к свертыванию.
  5.  Пробирку 5 отдать лаборанту для центрифугирования. В процессе центрифугирования кровь в пробирке 5 разделится на плазму и форменные элементы. Осторожно специальной пипеткой перенести плазму в пробирку 7, прибавить к ней одну каплю 5% раствора CaCl2. Отметить, что процесс свертывания крови протекает в плазме. Проследить время образования «белого» сгустка.

Оформление протокола. Начертить таблицу, заполнить ее по образцу, в графе 4 написать ожидаемый результат, в графе выводы – указать причину соответствующей реакции. Зарисовать схемы: сосудисто-тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза, таблицу антисвертывающей системы крови.

Таблица оформления протокола

№ пробирки

Количество крови

Воздействие

Изменение времени свертывания*

Выводы**

1

2

3

4

5

  1.  

1

  1.  

1

холод

  1.  

4

дефибринирование

  1.  

1

гепарин

  1.  

4

щавелевокислый натрий

  1.  

2 мл из пробирки 5

CaCl2

  1.  

плазма из пробирки 5 после центрифугирования

CaCl2

Примечание: * - увеличилось, уменьшилось, осталось в норме;

** - графу 5 сделать самой широкой, чтобы вместить текст выводов

4.2. Определение времени свертывания крови по способу Масс и Магро

Метод основан на установлении скорости появления нитей или сгустка фибрина в исследуемой крови.

Для работы необходимы: кровь донора,  часовое стекло,  покрытое тонким слоем парафина, капилляр от гемометра Сали, вазелиновое масло.

Проведение работы. На покрытое парафином  часовое стекло помещают каплю вазелинового масла. Из пальца капилляром, предварительно смоченным изнутри вазелиновым маслом,  берут каплю крови и помещают ее в каплю вазелинового масла на стекле. Каждые 2 минуты кровь снова насасывают в капилляр, выдувая ее затем обратно на часовое стекло. С момента наступления свертывания насосать кровь становится невозможно. Замечают время от момента взятия крови до начала свертывания. В норме у человека при температуре  воздуха 15 – 25оС по этой методике оно равно  8 – 12 минутам.

Оформление протокола. Кратко опишите принцип метода определения времени свертывания крови по методу Масс и Магро.

Вывод. Укажите нормальную величину этого показателя.

4.3. Коагулография

Принцип: с помощью прибора электрокоагулографа регистрируются начало свертывания и изменения электрического сопротивления сгустка крови во времени. Метод позволяет определять образование, ретракцию и лизис сгустка крови.

Реактивы: 1. 3,8% раствор цитрата натрия;

 2. раствор хлорида кальция (концентрация указывается в инструкции к прибору).

Оборудование: Коагулограф Н-334.

Материал для исследования: цельная нестабилизированная кровь (в этом случае реактивы не требуются), цитратная кровь, цитратная плазма.

Нормальные величины: устанавливаются эмпирически для каждого прибора.

Клиническое значение: с помощью электрокоагулографа (коагулографа) могут быть выявлены и количественно оценены хронометрическая и/или структурная гипокоагуляция (замедленное свертывание и /или образование сгустка с недостаточно высоким сопротивлением), хронометрическая и/или структурная гиперкоагуляция (ускоренное свертывание и /или образование сгустка с чрезмерно высоким сопротивлением), а также гипофибринолиз и гиперфибринолиз (замедленное или ускоренное уменьшение электрического сопротивления образовавшегося сгустка крови после достижения максимальных значений).

Проведение работы

  1.  Произвести включение прибора и подогревающей камеры термостата кнопкой ВКЛ.

Открыть крышку камеры термостата.

Взять подогретую в течение 10 мин ячейку  и залить в нее  кровь.

Закрыть крышку ячейки и установить ее в камеру, на качающийся держатель.

Закрыть камеру и нажать кнопку МОТОР на передней панели коагулографа.

Запись вести в течение 20-30 мин.

Получение результатов

Определяют:

  1.  начало свертывания крови - Т1 (до первого колебания с уменьшенной амплитудой).

конец свертывания крови - Т2 (до первого колебания с минимальной амплитудой).

продолжительность процесса свертывания - Т (= Т2 - Т1).

Примечание: время считают от момента забора крови, записывают в сек (Скорость движения диаграммы = 600 мм/ч = 1/6 мм/с, следовательно, t=6S или время между двумя импульсами = 10 сек).


Практикум по физиологии

Учебно-методическое пособие

по проведению лабораторных работ

по курсу нормальной физиологии

часть I (в двух частях)

Авторы-составители: Антропова Л.К., Перехвальская Т.В., Пиковская Н.Б.

Редактор: Куликов В.Ю., заведующий кафедрой нормальной физиологии, профессор, доктор мед.наук

Технический редактор: Пыстина Е.А.

Рецензенты: доцент каф.педагогики и мед.психологии, Меркушев В.В.

Доцент кафедры патологической физиологии

Начаров Ю.В.

Подписано в печать                 г. Сдано в набор               г. Усл.печ.л. 2,0.

Уч.-метод.л. Формат 64x84/16. Тираж  100  экз. Заказ №         .

Редакционно-издательский отдел Новосибирского государственного медицинского института. 630091, г.Новосибирск, Красный пр., 52

Типография СО РАМН, г.Новосибирска, ул.Ядринцевская, 14.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

68809. Реконструкция жилого дома 91 KB
  Квартиры в этих домах как правило имеют заниженные площади в том числе площади жилых комнат и подсобных помещений а также проходы через гостиную в кухню или в спальни. Модернизация жилого дома приведение к современным требованиям его объемно-планировочных решений и архитектурных качеств в результате...
68810. Проект аккумуляторного отделения на 386 автомобилей ПАЗ-672М 309.74 KB
  ТО – это комплекс операций или операция по поддержанию работоспособности или исправности автомобиля при использовании по назначению, при стоянке, хранении или транспортировании. ТО является профилактическим мероприятием и проводится принудительно в плановом порядке, через строго определенные...
68812. Разработка технологического процесса механической обработки детали типа «Вал» 353.34 KB
  В пояснительной записке изложен анализ данной детали её материала обоснование метода получения заготовки и последовательность механической обработки характеристика металлообрабатывающего оборудования. На основании сформулированной темы работы можно определить задачи которые необходимо рассмотреть...
68813. Проект шиномонтажного отделения на 536 автомобилей ВАЗ 2109 485.5 KB
  Выбранные нормативные значения периодичности ТО и пробега автомобилей до КР приводят к конкретным условиям эксплуатации подвижного состава с помощью коэффициентов учитывающих категорию условий эксплуатации К1 модификацию подвижного состава и организацию его работы К2 природно-климатические условия...
68814. Расчет редуктора для привода конвейера 2.22 MB
  Редуктором называют механизм, состоящий из зубчатых и червячных передач, выполненный в виде отдельного агрегата и служащий для передачи от вала двигателя к валу рабочей машины. Кинематическая схема привода может включать, помимо редуктора, открытые зубчатые передачи, цепные или ременные передачи.
68816. Проект редуктора двухступенчатого с цилиндрическими колесами для привода конвейера 598.75 KB
  Редуктор состоит из корпуса в котором размещают элементы передачи зубчатые колеса валы подшипники и т. Как горизонтальные так и вертикальные редукторы могут иметь колеса с прямыми косыми и круговыми зубьями. Редуктор двухступенчатый выполненный по развернутой схеме с цилиндрическими колесами.