66163

Дыхание бактерий. Выделение чистых культур анаэробов

Практическая работа

Биология и генетика

Выделение чистых культур анаэробов. Выделение чистых культур анаэробов. Дыхание анаэробов происходит путем ферментации субстрата с образованием малого количества энергии. Наличие свободного кислорода для облигатных анаэробов является губительным.

Русский

2014-08-14

78 KB

8 чел.

Методические указания для студентов к практическому занятию №13.

Тема: Дыхание бактерий. Выделение чистых культур анаэробов.

Цель: Изучение методов культивирования анаэробных бактерий.

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов.

Содержательный модуль 3. Физиология бактерий.

Тема 13: Дыхание бактерий. Выделение чистых культур анаэробов.

Актуальность темы: Рост, размножение, подвижность микроорганизмов осуществляется за счет энергии, которая приобретается бактериями в процессе дыхания. Дыхание (или биологическое окисление) микроорганизмов – это совокупность биохимических процессов, которые сопровождаются выделением энергии, последняя необходима для синтеза различных органических компонентов микробной клетки. Большинство микроорганизмов используют молекулярный кислород воздуха потому, что имеют систему цитохромов, что позволяет им использовать кислород как конечный акцептор водорода. Но Л.Пастером было доказано, что некоторые бактерии не могут развиваться в присутствии кислорода воздуха. Поэтому все микроорганизмы по типу дыхания подразделяют на облигатные аэробы –микроорганизмы, использующие для получения энергии свободный кислород, необходимый в качестве акцептора электронов (атомов водорода), при этом выделяется значительное количество энергии (микобактерии туберкулеза), микроаэрофилы – требуют присутствия минимального количества кислорода (лептоспиры, кампилобактерии), факультативные анаэробы – для получения энергии используют аэробный и анаэробный пути утилизации субстрата (кишечная палочка, сальмонелла брюшного тифа), облигатные анаэробы – могут образовывать АТФ при окислении углеродов, белков и липидов путем субстратного фосфорилирования (клостридии столбняка, ботулизма), капнические бактерии – требуют присутствия  CO2.

Дыхание анаэробов происходит путем ферментации субстрата с образованием  малого  количества  энергии. Наличие  свободного  кислорода  для облигатных  анаэробов является губительным. Это связано с тем, что в присутствии кислорода конечным продуктом окисления органических соединений является перекись водорода. Поскольку анаэробы не владеют способностью к продукции фермента каталазы, которая расщепляет перекись водорода, то она накапливается и проявляет токсическое действие на бактерии.

Для культивирования анаэробов необходимо создать сниженное парциальное давление кислорода в среде или в воздухе, с которым она сталкивается, что достигается следующими способами:

  1.  Физические: анаэростат, аппарат Кипа, кипячение сред;
  2.  Механические (добавление  к средам редуцирующих веществ): среда Китт-Тароцци, способ Виньяль-Вейона, среда Вильсон-Блера, агар Цейсслера, молоко по Тукаеву, засев уколом в высокий столбик сахарного агара;
  3.  Химические: поглощение кислорода в замкнутом пространстве химическим поглощением (раствором пирогаллола) в эксикаторе, аппарат Аристовского, свеча Омельянского;
  4.  Биологический: засев Фортнера – аэробный - анаэробный симбиоз бактерий.

Выделение чистых культур анаэробов:

I день – накопление материала. Исследуемый материал засевают на среду Китт-Тароцци, прокипяченную на протяжении 20 минут перед засевом. После засева материала среду нагревают 15 минут при 80 градусах для уничтожения вегетативной флоры; споры анаэробов при этом не погибают. Пробирки с засевами ставят в термостат.

II день – среда мутнеет, иногда в ней появляются пузырьки газа. Делают мазки,  окрашивают их по Граму и выявляют крупные споровые и неспоровые грамположительные бациллы.

Выделение чистой культуры анаэробов можно проводит методом Вейнберга или методом Цейсслера.

Конкретные цели:

  1.  Ознакомиться с классификацией микроорганизмов по типу дыхания.
  2.  Разобрать и выучить схему дыхания бактерий при участии ферментов, обеспечивающих биологическое окисление.
  3.  Научиться трактовать принципы  и методы культивирования облигатных анаэробных бактерий.
  4.  Сделать выводы о наличии бактериального роста микроорганизмов на средах, предназначенных для культивирования облигатных анаэробов.
  5.  Научиться трактовать и анализировать результаты бактериологического и микроскопического исследования микроорганизмов.

Уметь:

  •  Осуществить посев на питательные среды: Китт-Тароцци, молоко под вазелиновым маслом.
    •  Приготовить фиксированные препараты  из чистых культур анаэробов.
    •  Окрасить микропрепараты  из чистых культур анаэробов по Граму.
    •  Провести микроскопию препаратов из чистых культур анаэробов с помощью иммерсионного микроскопа.
    •  Анализировать бактериологические и морфологические признаки анаэробов.

Теоретические вопросы:

1. Типы дыхания микроорганизмов.

2. Ферменты, которые принимают участие в биологическом окислении.

3. Классификация микроорганизмов по типу дыхания.

4. Методы создания анаэробных условий.

5. Разбор схемы выделения чистых культур анаэробов.

6. Методы выделения чистых культур анаэробов (метод Цейсслера и метод Вейнберга).

Практические задания, которые выполняются на занятии:

1. Микроскопия демонстрационных препаратов из чистых культур анаэробов.

2. Приготовление фиксированных препаратов из бактериальной культуры анаэробов.

3. Окраска микропрепаратов по Граму.

4. Микроскопия микропрепаратов с помощью иммерсионного микроскопа, анализ и зарисовка препаратов в протокол.

5. Зарисовка демонстрационных препаратов и схемы выделения чистых культур анаэробов в протокол.

6. Осуществление засева на питательные среды: Китт-Тароцци, молоко под вазелиновым маслом.

7.Оформление протокола.

Литература:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, Санкт-Петербург: «Специальная литература», 1998.- 592с.

2. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.- М.: Медицина, 1983.- 512с.

3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.- Киев: Вища школа, 1992.- 431с.

4. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.- 768с.

5. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Никифоров В.В. Ботулизм. М.: Медицина, 1985.- 200с.

2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби.- К., 1995.– 321с.

3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.- М.: Медицина, 1990.- 559с.

4. БМЭ, Т. 1, 2, 7.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения классификации микроорганизмов по типу дыхания, разбора схемы дыхания бактерий при участии ферментов, обеспечивающих биологическое окисление. Изучение методов культивирования облигатных анаэробных бактерий. Студенты осуществляют засев на питательные среды: Китт-Тароцци и молоко под вазелиновым маслом. Потом готовят микропрепараты, окрашивают их по Граму, проводят микроскопию, зарисовывают микропрепараты и дают необходимые пояснения. В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных препаратов и их зарисовка в протокол занятия.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итоговых результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия.

п/п

Этапы

Время в мин

Способы обучения

Оборудование

Место прове дения

1

Проверка и коррекция исходного уровня подготовки к занятию

20

Тестовые задания исходного уровня

Таблицы, атлас

Учебная комната

2

Самостоятельная работа

35

Граф логической структуры

Иммерсионный микроскоп, красители, предметные стекла, бактериологические петли, питательные среды, посевы чистых культур анаэробов

3

Самостоятельная проверка и коррекция освоения материала

15

Целевые обучающие задания

4

Тестовый контроль

15

Тесты

5

Анализ результатов работы

5


Целевые обучающие задания:

1. В хирургическом отделении имеет место случай анаэробной инфекции после плановой хирургической операции. Какой материал необходимо направить для бактериологического исследования?

А. Мочу

В. Кровь

D. Раневое отделяемое

Е. Кусочки ткани

С. Перевязочный и шовный хирургический материал

2. В бактериологическую лабораторию поступил материал от больного с подозрением на анаэробную инфекцию. Какую из перечисленных питательную среду следует использовать для выделения возбудителя заболевания?

А. Эндо

В. 10% желчный бульон

С. Китт-Тароцци

D. Мясопептонный агар

Е. 1% пептонную воду

3. В бактериологической лаборатории провели исследование вяленой рыбы домашнего приготовления, ставшей причиной тяжелого пищевого отравления. При микроскопии выделенной на среде Китт-Тароцци культуры выявлены микроорганизмы, напоминающие теннисную ракетку. Развитие какого заболевания наиболее вероятно?

А. Брюшного тифа

В. Дизентерии

С. Холеры

D. Ботулизма

Е. Сальмонеллеза

4. Через два дня после ДТП в больницу доставили пострадавшего с травмой бедра и диагнозом «газовая раневая инфекция». На каких из перечисленных питательных сред культивируются клостридии анаэробной инфекции?

  1.  

  1.  Печеночный бульон
  2.  Щелочная пептонная вода
  3.  Казеиново-угольный агар
  4.  Среда Китт-Тароцци
  5.  Среда с сывороткой

5. В лабораторию поступили консервированные грибы, ставшие причиной ботулизма у гражданина К. Какой метод необходимо использовать для выделения чистой культуры возбудителя?

A. Левенштейна-Йенсена

B. Вейнберга

C. Леффлера

D. Тинсдаля-Садыковой

E. Ожешки

6. В лабораторию направлено раневое отделяемое больного с подозрением на раневую анаэробную инфекцию. Какой метод  необходимо использовать для выделения чистой культуры возбудителя?

А. Цейсслера

B. Тукаева

C. Тинсдаля-Садыковой

D. Мак-Коя

Е. Леффлера

7. В инфекционной больнице находится на лечении больной с диагнозом «ботулизм». Какие морфологические и тинкториальные свойства характерны для C. botulinum?

А. Грамположительные палочки с терминально расположенными спорами

В. Грамположительные палочки с субтерминально расположенными спорами

С. Грамотрицательные палочки с центральным расположением спор

D. Грамположительные неспорообразующие палочки

Е. Грамположительные палочки с центрально расположенными спорами

8. Для ускоренного исследования гноя из послеоперационной раны при подозрении на газовую анаэробную инфекцию необходимо использовать следующие среды:

А. Молоко под маслом и среда Вильсона-Блера

В. Среда Эндо

С. Среда Ру

D. Среда Виньяль-Вейона

Е. Сахарный агар

9. Какой из перечисленных факторов влияет на рост бактерий:

А. Давление О2 и СО2

B. Содержание неорганических ионов в окружающей среде

C. Наличие факторов роста

D. Содержание органических соединений в окружающей среде

Е. Все выше перечисленное

10. В чем заключается метод Фортнера, который используется для культивирования анаэробов?

А. Посев культуры в капилляр

B. Посев культуры в высокий столик сахарного агара

C. Посев культуры в молоко под вазелиновым маслом

D. Посев культуры на чашки Петри с сохранением в анаэростате

Е. Одномоментный посев культур аэробных и анаэробных бактерий на сектора чашки Петри

Алгоритм лабораторной работы:

1. Разбор схемы дыхания бактерий с участием ферментов, обеспечивающих биологическое окисление.

  1.  Ознакомление с классификацией микроорганизмов по типу дыхания.
  2.  Изучение методов культивирования облигатных анаэробных бактерий.
  3.  Приготовление фиксированных препаратов из бактериальной культуры анаэробов.
  4.  Окрашивание микропрепаратов по Граму.
  5.  Микроскопия микропрепаратов с помощью иммерсионного микроскопа, их анализ и зарисовка в протокол занятия.
  6.  Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов из чистых культур анаэробов.
  7.  Зарисовка демонстрационных препаратов и схемы выделения чистых культур анаэробов в протокол.
  8.  Осуществление посева на питательные среды: Китт-Тароцци, молоко под вазелиновым маслом, в высокий столбик сахарного и кровяного агара.
  9.    Оформление протокола.


Граф логической структуры темы: “ДЫХАНИЕ БАКТЕРИЙ. ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АНАЭРОБОВ”

Способы


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

22045. Радиорелейные системы передачи. 175 KB
  облучатель в фокусе плоское зеркало парабола фидер облучающая парабола Радиооборудование ПРМ ПРД Радиооборудование Оборудование состоящее из передатчика приемника и антенны называют радиорелейной станцией РРС....
22046. Системы с ЧРК 1.71 MB
  Электрические сигналы при передаче от одного абонента к другому проходит через нелинейные преобразователи усилители промежуточные линейные – от понятия линии связи усилители усилители – регенераторы узловые АТС линии связи. А это в свою очередь приводит к стандартным длинам участков линии связи через которые необходимо ставить линейные усилители – регенераторы восстанавливающие сигнал и необходимое превышение его уровня над шумами. Затухание в линии связи всегда растёт с ростом частоты сигнала. Рекомендуется использовать линии...
22047. Структура многоканальной системы передачи с ЧРК 53 KB
  ГРУППОБРАЗОВАНИЕ уплотнение каналов в системе с ЧРК носит иерархический характер. На основе каналов ТЧ с рассмотренными выше характеристиками строятся следующие групповые каналы тракты: Наименование группы каналов Диапазон занимаемых частот кГц Число каналов ТЧ Число объединяемых групп Предварительная группа ПрГ Первичная группа ПГ Вторичная группа ВГ Третичная группа ТГ Четверичная группа ЧГ 1224 60108 312552 8122044 851612388 3 12 60 300 900 используется редко 4 ПрГ 5 ПГ 5 ВТ 3 ТГ Совокупность устройств...
22048. Одно и двухнаправленные системы передачи 222 KB
  Для компенсации потерь и коррекции фазочастотных искажений сигнала через определенные расстояния в линию включаются линейные усилители. Схемы включения дифференциальных трансформаторов Основное назначение РУ – обеспечить передачу сигнала в направлении клемм от 11 к 33 с малыми потерями и прием сигнала с клемм 44 к 11. Конечная величина затухания a43 приводит к тому что часть сигнала из передающей пары проводников переходит в приемные проводники действие на ближнем конце. Неполное согласование РУ на дальнем конце...
22049. Шумы в линии передачи. Расчёт длины усилительного участка. 100.5 KB
  Для такой ЭГЦ средняя за час псофометрическая мощность помехи WЭ10000 пВт или пВт 1 км для международных пВт.23LЭ и тогда Мощности различных видов шумов определяются по следующим формулам: Мощность собственных шумов тепловые шумы линии элементов схем флуктуации электропроводности дробовые шумы электронных приборов и т. Увеличивать длину l усилительного участка по сравнению с нормами МККТТ можно либо увеличивая мощность полезного сигнала – но не допуская увеличения нелинейных шумов уменьшая собственные шумы усилителей – новая...
22050. Формирование групповых сигналов в системах с ЧРК 173 KB
  Итого любой канал ТЧ в системе с ЧРК может иметь полосу f=4 кГц. Общая ширина должна быть F1= 12f=48 кГц это абсолютная ширина спектра первичной группы. Значит после преобразования НЧ спектра с полосой F1=48 кГц вверх по частоте нижняя граница нового спектра должна быть выше второй гармоники от 48 кГц.
22051. Барокко 43.5 KB
  Барокко К XVII в. широкого распространения достигли мотивы и настроения барокко утверждавшего что человек лишь странник на этой бренной жалкой земле. Это усиление лирического начала особенно заметно в поэзии барокко или в поэзии которая в той или иной степени соприкасалась с барокко. В немецких условиях именно литература барокко в течение длительного времени оказывала решающее воздействие на духовную жизнь страны.
22052. Пастораль, городской роман, шельмовской (плутовской) роман 49.5 KB
  Пастораль городской роман шельмовской плутовской роман Пастораль Пастораль франц. Жанровые формы Ппасторали многообразны: эклога поэма роман; после стихотворной драмы Сказание об Орфее Полициано 1480 развивается драматическая Пастораль принятая особенно в 16 17 вв. Систему поэтики немецкой романной пасторали XVII в. В немалой мере такому положению способствовала также устойчивая репутация пасторального романа как если не вторичной периферийной то все же некой побочной маргинальной ветви в системе немецкого романа XVII в.
22053. Пиетизм 30 KB
  Основателем Пиетизма является Ф. Становление и развитие Пиетизма таким образом детерминировано теми же факторами которые обусловили в свое время оформление протестантизма в целом и которые питают историческую эволюцию мистической традиции см. Основателями и лидерами пиетизма были Ф. Движение Пиетизма началось с молитвенных собраний в доме Шпенера.