66164

Культивирование вирусов, риккетсий, хламидий

Практическая работа

Биология и генетика

Актуальность темы. В связи с отсутствием у вирусов метаболических систем, их репродукция может происходить только в живых клетках в виде продуктивного, интегративного и абортивного типа. Репродукция вирусов в процессе взаимодействия...

Русский

2014-08-14

94 KB

10 чел.

Методическое указание для студентов к практическому занятию 14

Тема: Культивирование вирусов, риккетсий, хламидий.

Цель: Освоение методов культивирования вирусов, риккетсий, хламидий.

Модуль1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммуни-тет.

Содержательный модуль 3. Содержательный модуль 3. Физиология бакте-рий и вирусов.

Тема 14: Культивирование вирусов, риккетсий, хламидий.

Актуальность темы. В связи с отсутствием у вирусов метаболических систем, их репродукция может происходить только в живых клетках в виде продуктивного, интегративного и абортивного типа. Репродукция вирусов в процессе взаимодействия их с клеткой проходит в несколько этапов. Основные этапы взаимодействия вирусов с клетками при продуктивной инфекции: адсорбция, проникновение в клетку, “раздевание”, биосинтез компонентов вируса, образование вирусных частичек, выход вирусов из клетки. При интегративном типе взаимодействия вирусный геном (ДНК-провирус) функционирует как составная часть клеточного генома и клетка получает новые свойства, продолжая выполнять свои функции. Возникает персистенция вирусов. Абортивный тип взаимодействия возникает при проникновение вирусов в нечувствительные клетки, где невозможна репродукция вирусов.

Существуют такие методы культивирования вирусов: в клеточных культурах, в куриных эмбрионах, в организме лабораторных животных.

  1.  Методы культивирования вирусов в клетках наиболее распространенны.

Виды клеточных культур:

а) первичные - готовят из нормальных тканей эмбриональных или взрослых организмов путем трипсинизации, выдерживают 2-4 пассажа.

б) перевиваемые или пассажные - готовят из тканей злокачественных опухо-лей, выдерживают тысячи генераций (HELa);

в) полуперевиваемые - выдерживают до 70 пассажей (диплоидные клетки легких человека).

Для получения однослойной тканевой культуры используются пита-тельные среды: 199, Игла, Хенкса.

Выявление репродукции вирусов в культуре ткани:

а) по цитопатическому действию вирусов:

  •  полная или частичная деструкция монослоя;
  •  изменение формы клеток;
  •  возникновение многоядерных клеток и симпластов;

б) образование внутриклеточных включений - место усиленного размноже-ния вирусов и реакция клетки на внедрение вируса;

в) с помощью реакции гемадсорбции;

г) по цветной пробе;

д) выявление вирусного гемаглютинина или вирусного антигена в РГА и РСК;

е) выявление вирусных бляшек.

2. Культивирование вирусов в куриных эмбрионах используется огра-ниченно, так как только некоторые вирусы репродуцируются в тканях куриного эмбриона (вирус натуральной оспы, гриппа, герпеса простого, эпидемического паротита).

Место введения вирусосодержащего материала: а) в полость амниона и алантоисную; б) в желтковый мешок; в) в мозг, тело эмбриона; г) на хорионалантоисную оболочку.

Определение репродукции вирусов проводится по специфическим из-менениям в эмбрионе и с помощью РГА (вирус гриппа).

Специфические изменения в эмбрионе:

а) бляшки на хорионалантоисной оболочке (вирусы натуральной оспы и ос-повакцины);

б) диффузное помутнение оболочек;

в) появление кровоизлияний;

г) участки некроза.

3. Культивирование вирусов в организме животных (вирусы Коксаки, бешенства) имеет положительные стороны - доступность, четкость симпто-мов, моделирование инфекционного процесса, накопление вируса в большом количестве (для получения вакцин). Недостатки - не все вирусы можно куль-тивировать, лабораторные животные - открытая система, которая содержит собственную микрофлору, в том числе и латентные вирусы.

Культивирование риккетсий и хламидий проводится теми же методами, что и вирусов. Так, риккетсии можно культивировать в желточном мешке куриного эмбриону, в легких белых мышей и кишечника вшей. Хла-мидии также можно культивировать в желточном мешке куриного эмбриона и при внутримозговом заражении белых мышей.

Конкретные цели:

  •  Выучить методы культивирования вирусов в клеточных культурах, в куриных эмбрионах, в организме лабораторных животных.
  •  Выучить методы выявления репродукции вирусов в клеточных культурах, в куриных эмбрионах, в организме лабораторных животных.
  •  Выучить методы культивирования риккетсий.
  •  Выучить методы культивирования хламидий.

Теоретические вопросы:

1. Особенности размножения вирусов.

2. Современные методы культивирования вирусов.

3. Культивирование вирусов в курином эмбрионе.

4. Культивирование вирусов в клеточных культурах.

5. Характер ЦПД вирусов на клеточные культуры.

7. Методы культивирования риккетсий.

8. Методы культивирования хламидий.

 

Практические задачи, которые выполняются на занятии:

Микроскопия клеточных культур в норме и с цитопатическим действием вирусов, их анализ и зарисовывание в протокол.

Ознакомление со строением куриного эмбриона (схема).

Заражение куриных эмбрионов вирусом осповакцины в алантоисную полость.

Разрез куриных эмбрионов, которые раньше были заражены вирусом осповакцины.

Анализ изменений алантоисной оболочки зараженных эмбрионов, и запись выводов в протокол.

Оформление протокола.

Литература:

  1.  Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.
  2.  Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.: ГЕОТАФ-МЕД, 2001.- 768с.
  3.  Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія.- К.: "Вища школа", 1992.– 431с.
  4.  Конспект лекций.

Дополнительная литература:

Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби.- К., 1995.– 321с.

Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.- М.: Медицина, 1990.- 559с.

БМЭ, Т. 1, 2, 7.

Короткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа состоит из микроскопии клеточных  культур в норме и с цитопатическим действием вирусов, их анализа и зарисовывание в протокол. После ознакомления со строением куриного эмбриона по схеме, студенты проводят заражение куриных эмбрионов вирусом осповакцины в алантоисную полость. Потом проводится разрез куриных эмбрионов, которые раньше были заражены вирусом осповакцины.

Дальше студенты анализируют изменения алантоисной оболочки зараженных эмбрионов, и записывают выводы в протокол.

В конце занятие проводится тестовый контроль и анализ итогов результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

п/п

Этапы

Вре-мя в мин.

Средства обучения

Оснащение

Место проведения

1

Проверка и коррекция ис-ходного уровня подготовки к занятию

20'

Тестовые задачи исходного уровня

Таблицы

У

Ч

Е

Б

Н

А

Я

К

О

М

Н

А

Т

А

2

Самостоятель-ная работа

35'

Графы логической структуры.

Клеточные куль-туры в норме и с ЦПД вирусов, питательные среды (199, Хен-кса, Игла), мик-роскопы, кури-ные эмбрионы здоровые и зара-женные вирусом осповакцины, материал для за-ражения, стери-льные шприцы, копья, пипетки Пастера, пара-фин, овоскоп, альбом с фото “Культивирова-ние риккетсий”

3

Самоконтроль и коррекция ус-воения матери-ала

15'

Целевые учебные задания

4

Тестовый контроль

15'

Тесты

5

Анализ резуль-татов работы

5'

Алгоритм лабораторной работы:

  1.  Микроскопия тканевых культур в норме.
  2.  Микроскопия тканевых культур в норме с цитопатическим действием вирусов.
  3.  Анализ цитопатического действия вирусов и зарисовывание препаратов в протокол.
  4.  Ознакомление со строением куриного эмбриона по схеме.
  5.  Заражение куриных эмбрионов вирусом осповакцины в алантоисную полость.
  6.  Разрез куриных эмбрионов, которые раньше были заражены вирусом осповакцины.
  7.  Анализ изменения алантоисной оболочки зараженных эмбрионов и запись выводов в протокол.
  8.  Оформление протокола.


Тестовые задачи исходного уровня:

  1.   При каком типе взаимодействия вируса с клеткой образуется ДНК-провирус:

А. Продуктивном

В. Интегративном

С. Абортивном

D. Ассоциированном

Е. -

  1.  

  1.   Бляшки при культивировании вирусов в клеточных культурах - это:

А. Накопление вирусных частичек

В. Здоровые клетки

С. Разрушенные вирусом клетки

D. Место образования вирусных

 частичек в клетке

Е. -

  1.  

  1.   К полуперевиваемым клеточным культурам относятся:

А. НеLа

В. НЕР-1

С. НЕР-2

D. Клетки эмбриональных тканей человека

Е. Диплоидные клетки легких человека

4. Метод культивирования вирусов в клеточных культурах был разработан:

А. Дж. Эндерсом

В. Л. Пастером

С. Ф. Бернетом

D. Г. Эрлихом

Е. Р. Кохом

5. Внутриклеточные включения определяются при инфекциях:

  1.  

  1.  Бешенство
  2.  Грипп
  3.  Натуральная оспа
  4.  Все вышеперечисленное
  5.  Никаких

6. Перед заражением вируссодержащим материалом производят просвечивание эмбрионов для определения их жизнеспособности. Какие характеристики подтверждают жизнеспособность куриного эмбриона?

A. Движение эмбриона под действием света.

B. Хорошо определяемые кровеносные сосуды.

C. Наличие воздушного пространства.

D. Правильные ответы А и В.

E. Все выше перечисленное.

7. Какие процедуры не проводятся при подготовке куриного эмбриона к заражению вирусосодержащим материалом:

A. Дезинфекция скорлупы спиртом и раствором йода.

B. Просвечивание под лампой.

C. Маркировка воздушного мешка.

D. Проделывание отверстия в скорлупе.

E. Отбор аллантоисной жидкости.

8. Какие из перечисленных культур сохраняют диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани, в течение 50 пассажей:

  1.  Диплоидные культуры клеток
  2.  Первичные культуры клеток
  3.  Полуперевиваемые культуры клеток
  4.  Перевиваемые культуры клеток
  5.  Все выше перечисленное

9. Какие из перечисленных культур клеток, получаемые из злокачественных и нормальных линий клеток, обладают способностью длительно размножаться in vitro в определенных условиях:

  1.  Диплоидные культуры клеток
  2.  Первичные культуры клеток
  3.  Полуперевиваемые культуры клеток
  4.  Перевиваемые культуры клеток
  5.  Все выше перечисленное

10. Какие методы используются для изучения изменений в клетке, индуцированных вирусом:

A. Световая микроскопия

B. Люминесцентная микроскопия

C. Реакция гемаглютинации

D. Бляшкообразование

E. Все выше перечисленное

11. Какие тест-системы не используются для культивирования риккетсий:

  1.  

  1.  Среда Хенкса
  2.  Культура клеток HeLa
  3.  Вши
  4.  Белые мыши
  5.  

  1.  Желточный мешок куриного эмбриона

Целевые учебные задачи:

Для выделения вируса гриппа в материале, который поступил в лабораторию, использовали куриные эмбрионы. Какой из перечисленных показателей есть основным для выявления накопления вируса через 48-72 часов?

А. РА

В. Гибель куриного эмбриона

С. РГА с алантоисною жидкостью

Д. Наличие крови в алантоисной оболочке

Е. Образование бляшек на алантоисной оболочке

2. В детскую инфекционную больницу доставили ребенка в тяжелом состоянии с подозрением на вирусную инфекцию. Как выделить вирус, вызвавший заболевание, из материала, взятого у ребенка?

А. Сделать посев на среду Хенкса

В. Сделать посев на среду 199

С. Сделать посев на среду Китт-Тароцци

Д. Заразить вшей

Е. Заразить клеточную культуру

3. На практическом занятии студенты провели заражение куриных эмбрионов вирусом осповакцины. Какой из перечисленных показателей есть основным для выявления накопления вируса через 48-72 часов?

А. РА

В. Образование бляшек на алантоисной оболочке

С. РГА с алантоисной жидкостью

Д. Наличие крови в алантоисной оболочке

Е. Гибель куриного эмбриона

4. У пациента С. с уретритом заподозрили хламидиоз. Для подтверждения диагноза в лабораторию направили выделение из уретры для выявления хламидий. Какой метод выделения хламидий надо использовать для подтверждения диагноза?

А. Заразить куриные эмбрионы в амниотическую полость

В. Заразить куриные эмбрионы в алантоисную полость

С. Провести внутримозговое заражение белых мышей

Д. Заразить вшей

Е. Сделать посев на среду 199

5. В вирусологическую лабораторию были доставлены куриные эмбрионы с разным сроком эмбриогенеза. Какого срока эмбриогенеза необходимо придерживаться при заражении куриных эмбрионов вирусами?

А. 3-5 дней

В. 8-13 дней

С. 15-18 дней

Д. 18-21 дней

Е. Во все сроки


Граф логической структуры темы «КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ, РИККЕТСИЙ, ХЛАМИДИЙ»


Культивирование вирусов

куриных эмбрионах

В тканевых культурах

В организме лабора-торных животных

Первичные

Перевива-емые

Полупере-виваемые

Индикация вирусов

Гемад-сорбция

Вклю-чения

Бляшки

ЦПД

Деструкция клеток

Сим-пласты

Смена фор-

мы клетки

Индикация вирусов

Индикация вирусов

Бляшки

Кровоизлияния

Участ-ки некро-за

Реакция нейт-рализации

РГА

Помут-

нения оболочки


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

84610. Разработка рецептуры питьевого йогурта со злаковыми культурами 1.25 MB
  Целью нашей работы является разработка рецептуры питьевого йогурта со злаковыми культурами. Рецептуры указаны в государственных отраслевых стандартах технических условиях технологических инструкциях.
84611. Модернизация системы автоматического регулирования температуры в термокамере машины ТО-180 14.69 MB
  Стабилизацией называю. процесс придания камвольным тканям - тканям из смеси шерсти с синтетическими волокнами устойчивых фиксированных размеров и рисунков ткацкого переплетения, а также способности противостоять образованию необратимых деформаций в процессах последующей обработки и эксплуатации.
84612. Расчет и проектирование фундаментов зданий и сооружений 1.29 MB
  Проектирование фундаментов на естественном основании Предварительное назначение основных параметров и размеров фундаментов Определение расчетного сопротивления грунта Конструирование фундамента и уточнение действующих нагрузок Определение вертикального напряжения от собственного веса грунта на...
84613. АНАЛИЗ И СИНТЕЗ ТИПОВЫХ ЭЛЕКТРОННЫХ УСТРОЙСТВ 15.7 MB
  Построение логарифмической амплитудно-частотной характеристики (ЛАЧХ) преобразователя сигналов на операционном усилителе. Для заданной схемы преобразователя аналоговых сигналов на операционном усилителе (ОУ) рассчитать и построить его ЛАЧХ и определить основные параметры данного устройства.
84614. Основы организации и функционирования бюджетной системы Российской Федерации 327.7 KB
  Цель данной курсовой работы – определение места и значимости внебюджетных фондов социального назначения в социальной политике государства. Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи: Рассмотреть сущность и задачи социальной политики государства.
84615. Фирменные холодные блюда и закуски ресторанов г. Омска: ассортимент, технология приготовления и оформления 757.41 KB
  Цель курсовой работы: изучить ассортимент, технологию приготовления и оформления холодных блюд и закусок ресторанов г.Омска. Задачи курсовой работы: Провести сравнительный анализ ассортимента холодных блюд и закусок в предприятиях общественного питания г.Омска. Дать рекомендации по обновлению меню.
84616. Маркетинговые службы в системе управления предприятием ресторанно-гостиничного бизнеса, их функции и задачи 72.32 KB
  На Западе о маркетинге заговорили лишь начиная с середины девятнадцатого века. Первым, кто высказал предположение о том, что маркетинг должен быть центральным направлением деятельности предприятия, а работа с собственным кругом потребителя – задачей менеджера, был Сайрус Маккормик.
84617. Кодирование информации в защищенных компьютерных сетях 833.5 KB
  При цифровом кодировании дискретной информации применяют потенциальные и импульсные коды. В потенциальных кодах для представления логических единиц и нулей используются только значение потенциала сигнала, а его перепады, формирующие законченные импульсы, во внимание не принимаются.
84618. Технология приготовление длинных смешанных напитков: джулепы, коблеры, кулеры, сэнгер, флипы, слинги 1.27 MB
  Длинные смешанные напитки — это напитки объемом более 150 мл, разбавленные наполнителем. Наполнитель может быть газированным (вода из сифона, фруктово-ягодные напитки, минеральная вода, тонические воды) и негазированным (соки). Приготавливают длинные напитки путем смешивания компонентов в питьевом стакане.