66164

Культивирование вирусов, риккетсий, хламидий

Практическая работа

Биология и генетика

Актуальность темы. В связи с отсутствием у вирусов метаболических систем, их репродукция может происходить только в живых клетках в виде продуктивного, интегративного и абортивного типа. Репродукция вирусов в процессе взаимодействия...

Русский

2014-08-14

94 KB

8 чел.

Методическое указание для студентов к практическому занятию 14

Тема: Культивирование вирусов, риккетсий, хламидий.

Цель: Освоение методов культивирования вирусов, риккетсий, хламидий.

Модуль1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммуни-тет.

Содержательный модуль 3. Содержательный модуль 3. Физиология бакте-рий и вирусов.

Тема 14: Культивирование вирусов, риккетсий, хламидий.

Актуальность темы. В связи с отсутствием у вирусов метаболических систем, их репродукция может происходить только в живых клетках в виде продуктивного, интегративного и абортивного типа. Репродукция вирусов в процессе взаимодействия их с клеткой проходит в несколько этапов. Основные этапы взаимодействия вирусов с клетками при продуктивной инфекции: адсорбция, проникновение в клетку, “раздевание”, биосинтез компонентов вируса, образование вирусных частичек, выход вирусов из клетки. При интегративном типе взаимодействия вирусный геном (ДНК-провирус) функционирует как составная часть клеточного генома и клетка получает новые свойства, продолжая выполнять свои функции. Возникает персистенция вирусов. Абортивный тип взаимодействия возникает при проникновение вирусов в нечувствительные клетки, где невозможна репродукция вирусов.

Существуют такие методы культивирования вирусов: в клеточных культурах, в куриных эмбрионах, в организме лабораторных животных.

  1.  Методы культивирования вирусов в клетках наиболее распространенны.

Виды клеточных культур:

а) первичные - готовят из нормальных тканей эмбриональных или взрослых организмов путем трипсинизации, выдерживают 2-4 пассажа.

б) перевиваемые или пассажные - готовят из тканей злокачественных опухо-лей, выдерживают тысячи генераций (HELa);

в) полуперевиваемые - выдерживают до 70 пассажей (диплоидные клетки легких человека).

Для получения однослойной тканевой культуры используются пита-тельные среды: 199, Игла, Хенкса.

Выявление репродукции вирусов в культуре ткани:

а) по цитопатическому действию вирусов:

  •  полная или частичная деструкция монослоя;
  •  изменение формы клеток;
  •  возникновение многоядерных клеток и симпластов;

б) образование внутриклеточных включений - место усиленного размноже-ния вирусов и реакция клетки на внедрение вируса;

в) с помощью реакции гемадсорбции;

г) по цветной пробе;

д) выявление вирусного гемаглютинина или вирусного антигена в РГА и РСК;

е) выявление вирусных бляшек.

2. Культивирование вирусов в куриных эмбрионах используется огра-ниченно, так как только некоторые вирусы репродуцируются в тканях куриного эмбриона (вирус натуральной оспы, гриппа, герпеса простого, эпидемического паротита).

Место введения вирусосодержащего материала: а) в полость амниона и алантоисную; б) в желтковый мешок; в) в мозг, тело эмбриона; г) на хорионалантоисную оболочку.

Определение репродукции вирусов проводится по специфическим из-менениям в эмбрионе и с помощью РГА (вирус гриппа).

Специфические изменения в эмбрионе:

а) бляшки на хорионалантоисной оболочке (вирусы натуральной оспы и ос-повакцины);

б) диффузное помутнение оболочек;

в) появление кровоизлияний;

г) участки некроза.

3. Культивирование вирусов в организме животных (вирусы Коксаки, бешенства) имеет положительные стороны - доступность, четкость симпто-мов, моделирование инфекционного процесса, накопление вируса в большом количестве (для получения вакцин). Недостатки - не все вирусы можно куль-тивировать, лабораторные животные - открытая система, которая содержит собственную микрофлору, в том числе и латентные вирусы.

Культивирование риккетсий и хламидий проводится теми же методами, что и вирусов. Так, риккетсии можно культивировать в желточном мешке куриного эмбриону, в легких белых мышей и кишечника вшей. Хла-мидии также можно культивировать в желточном мешке куриного эмбриона и при внутримозговом заражении белых мышей.

Конкретные цели:

  •  Выучить методы культивирования вирусов в клеточных культурах, в куриных эмбрионах, в организме лабораторных животных.
  •  Выучить методы выявления репродукции вирусов в клеточных культурах, в куриных эмбрионах, в организме лабораторных животных.
  •  Выучить методы культивирования риккетсий.
  •  Выучить методы культивирования хламидий.

Теоретические вопросы:

1. Особенности размножения вирусов.

2. Современные методы культивирования вирусов.

3. Культивирование вирусов в курином эмбрионе.

4. Культивирование вирусов в клеточных культурах.

5. Характер ЦПД вирусов на клеточные культуры.

7. Методы культивирования риккетсий.

8. Методы культивирования хламидий.

 

Практические задачи, которые выполняются на занятии:

Микроскопия клеточных культур в норме и с цитопатическим действием вирусов, их анализ и зарисовывание в протокол.

Ознакомление со строением куриного эмбриона (схема).

Заражение куриных эмбрионов вирусом осповакцины в алантоисную полость.

Разрез куриных эмбрионов, которые раньше были заражены вирусом осповакцины.

Анализ изменений алантоисной оболочки зараженных эмбрионов, и запись выводов в протокол.

Оформление протокола.

Литература:

  1.  Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.
  2.  Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.: ГЕОТАФ-МЕД, 2001.- 768с.
  3.  Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія.- К.: "Вища школа", 1992.– 431с.
  4.  Конспект лекций.

Дополнительная литература:

Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби.- К., 1995.– 321с.

Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.- М.: Медицина, 1990.- 559с.

БМЭ, Т. 1, 2, 7.

Короткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа состоит из микроскопии клеточных  культур в норме и с цитопатическим действием вирусов, их анализа и зарисовывание в протокол. После ознакомления со строением куриного эмбриона по схеме, студенты проводят заражение куриных эмбрионов вирусом осповакцины в алантоисную полость. Потом проводится разрез куриных эмбрионов, которые раньше были заражены вирусом осповакцины.

Дальше студенты анализируют изменения алантоисной оболочки зараженных эмбрионов, и записывают выводы в протокол.

В конце занятие проводится тестовый контроль и анализ итогов результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

п/п

Этапы

Вре-мя в мин.

Средства обучения

Оснащение

Место проведения

1

Проверка и коррекция ис-ходного уровня подготовки к занятию

20'

Тестовые задачи исходного уровня

Таблицы

У

Ч

Е

Б

Н

А

Я

К

О

М

Н

А

Т

А

2

Самостоятель-ная работа

35'

Графы логической структуры.

Клеточные куль-туры в норме и с ЦПД вирусов, питательные среды (199, Хен-кса, Игла), мик-роскопы, кури-ные эмбрионы здоровые и зара-женные вирусом осповакцины, материал для за-ражения, стери-льные шприцы, копья, пипетки Пастера, пара-фин, овоскоп, альбом с фото “Культивирова-ние риккетсий”

3

Самоконтроль и коррекция ус-воения матери-ала

15'

Целевые учебные задания

4

Тестовый контроль

15'

Тесты

5

Анализ резуль-татов работы

5'

Алгоритм лабораторной работы:

  1.  Микроскопия тканевых культур в норме.
  2.  Микроскопия тканевых культур в норме с цитопатическим действием вирусов.
  3.  Анализ цитопатического действия вирусов и зарисовывание препаратов в протокол.
  4.  Ознакомление со строением куриного эмбриона по схеме.
  5.  Заражение куриных эмбрионов вирусом осповакцины в алантоисную полость.
  6.  Разрез куриных эмбрионов, которые раньше были заражены вирусом осповакцины.
  7.  Анализ изменения алантоисной оболочки зараженных эмбрионов и запись выводов в протокол.
  8.  Оформление протокола.


Тестовые задачи исходного уровня:

  1.   При каком типе взаимодействия вируса с клеткой образуется ДНК-провирус:

А. Продуктивном

В. Интегративном

С. Абортивном

D. Ассоциированном

Е. -

  1.  

  1.   Бляшки при культивировании вирусов в клеточных культурах - это:

А. Накопление вирусных частичек

В. Здоровые клетки

С. Разрушенные вирусом клетки

D. Место образования вирусных

 частичек в клетке

Е. -

  1.  

  1.   К полуперевиваемым клеточным культурам относятся:

А. НеLа

В. НЕР-1

С. НЕР-2

D. Клетки эмбриональных тканей человека

Е. Диплоидные клетки легких человека

4. Метод культивирования вирусов в клеточных культурах был разработан:

А. Дж. Эндерсом

В. Л. Пастером

С. Ф. Бернетом

D. Г. Эрлихом

Е. Р. Кохом

5. Внутриклеточные включения определяются при инфекциях:

  1.  

  1.  Бешенство
  2.  Грипп
  3.  Натуральная оспа
  4.  Все вышеперечисленное
  5.  Никаких

6. Перед заражением вируссодержащим материалом производят просвечивание эмбрионов для определения их жизнеспособности. Какие характеристики подтверждают жизнеспособность куриного эмбриона?

A. Движение эмбриона под действием света.

B. Хорошо определяемые кровеносные сосуды.

C. Наличие воздушного пространства.

D. Правильные ответы А и В.

E. Все выше перечисленное.

7. Какие процедуры не проводятся при подготовке куриного эмбриона к заражению вирусосодержащим материалом:

A. Дезинфекция скорлупы спиртом и раствором йода.

B. Просвечивание под лампой.

C. Маркировка воздушного мешка.

D. Проделывание отверстия в скорлупе.

E. Отбор аллантоисной жидкости.

8. Какие из перечисленных культур сохраняют диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани, в течение 50 пассажей:

  1.  Диплоидные культуры клеток
  2.  Первичные культуры клеток
  3.  Полуперевиваемые культуры клеток
  4.  Перевиваемые культуры клеток
  5.  Все выше перечисленное

9. Какие из перечисленных культур клеток, получаемые из злокачественных и нормальных линий клеток, обладают способностью длительно размножаться in vitro в определенных условиях:

  1.  Диплоидные культуры клеток
  2.  Первичные культуры клеток
  3.  Полуперевиваемые культуры клеток
  4.  Перевиваемые культуры клеток
  5.  Все выше перечисленное

10. Какие методы используются для изучения изменений в клетке, индуцированных вирусом:

A. Световая микроскопия

B. Люминесцентная микроскопия

C. Реакция гемаглютинации

D. Бляшкообразование

E. Все выше перечисленное

11. Какие тест-системы не используются для культивирования риккетсий:

  1.  

  1.  Среда Хенкса
  2.  Культура клеток HeLa
  3.  Вши
  4.  Белые мыши
  5.  

  1.  Желточный мешок куриного эмбриона

Целевые учебные задачи:

Для выделения вируса гриппа в материале, который поступил в лабораторию, использовали куриные эмбрионы. Какой из перечисленных показателей есть основным для выявления накопления вируса через 48-72 часов?

А. РА

В. Гибель куриного эмбриона

С. РГА с алантоисною жидкостью

Д. Наличие крови в алантоисной оболочке

Е. Образование бляшек на алантоисной оболочке

2. В детскую инфекционную больницу доставили ребенка в тяжелом состоянии с подозрением на вирусную инфекцию. Как выделить вирус, вызвавший заболевание, из материала, взятого у ребенка?

А. Сделать посев на среду Хенкса

В. Сделать посев на среду 199

С. Сделать посев на среду Китт-Тароцци

Д. Заразить вшей

Е. Заразить клеточную культуру

3. На практическом занятии студенты провели заражение куриных эмбрионов вирусом осповакцины. Какой из перечисленных показателей есть основным для выявления накопления вируса через 48-72 часов?

А. РА

В. Образование бляшек на алантоисной оболочке

С. РГА с алантоисной жидкостью

Д. Наличие крови в алантоисной оболочке

Е. Гибель куриного эмбриона

4. У пациента С. с уретритом заподозрили хламидиоз. Для подтверждения диагноза в лабораторию направили выделение из уретры для выявления хламидий. Какой метод выделения хламидий надо использовать для подтверждения диагноза?

А. Заразить куриные эмбрионы в амниотическую полость

В. Заразить куриные эмбрионы в алантоисную полость

С. Провести внутримозговое заражение белых мышей

Д. Заразить вшей

Е. Сделать посев на среду 199

5. В вирусологическую лабораторию были доставлены куриные эмбрионы с разным сроком эмбриогенеза. Какого срока эмбриогенеза необходимо придерживаться при заражении куриных эмбрионов вирусами?

А. 3-5 дней

В. 8-13 дней

С. 15-18 дней

Д. 18-21 дней

Е. Во все сроки


Граф логической структуры темы «КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ, РИККЕТСИЙ, ХЛАМИДИЙ»


Культивирование вирусов

куриных эмбрионах

В тканевых культурах

В организме лабора-торных животных

Первичные

Перевива-емые

Полупере-виваемые

Индикация вирусов

Гемад-сорбция

Вклю-чения

Бляшки

ЦПД

Деструкция клеток

Сим-пласты

Смена фор-

мы клетки

Индикация вирусов

Индикация вирусов

Бляшки

Кровоизлияния

Участ-ки некро-за

Реакция нейт-рализации

РГА

Помут-

нения оболочки


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

26313. Крестьянская война в Германии. Т.Мюнцер 40.51 KB
  Крестьянская война в Германии: Обострение классовой борьбы народных масс в деятельность союза Башмак С наступлением феодальной реакции нарастала борьба крестьян. характерно значительно более тесное сближение крестьянской массы с городскими низами чем в предшествовавший период. Усиление же крестьянскоплебейского лагеря не могло не оказать влияния на радикальные элементы в бюргерстве и на известный подъём бюргерской оппозиции вообще. Такое крестьянское общество было раскрыто в 1502 г.
26314. Реформация в Швейцарии. У.Цвингли и Ж.Кальвин 34.59 KB
  Начало же этому было положено в Цюрихе где в 1518 году священником кафедрального собора был избран известный проповедник Ульрих Цвингли. Даже изгнание Цвингли торговца индульгенциями монаха Самсона удостоилась не осуждения а похвалы представителя местного епископа. Так продолжалось до 1522 года когда Цвингли сам пошел на обострение ситуации. Однако и этот вызов не вызвал ожидаемых мер со стороны римского священноначалия напротив папский легат передал Цвингли письмо в котором ему сулились огромные блага если бы он стал поддерживать...
26315. Реформация и религиозные (гражданские) войны во Франции 29.06 KB
  Широко стали распространяться идеи Кальвина во Франции при короле Генрихе II. Именно при Генрихе II кальвинизм во Франции достиг наибольшего распространения. Ослабление королевской власти при сыновьях Генриха II благоприятствовало политическим притязаниям феодальной аристократии и борьба за религиозную свободу слилась с борьбой за власть. Своего короля Генриха Наваррского гугеноты воспринимали как конституционного государя.
26316. Реформация в Англии 14.33 KB
  Реформация в Англии Англия страна известная своими реформаторскими тенденциями. Однако решающую роль в Реформации в Англии предстояло сыграть другому человеку. Реформацию в Англии можно в полном смысле назвать Реформацией сверху так как во главе её стал английский король Генрих VIII. Реформация в Англии при Генрихе VIII Первоначально Генрих был противником Реформации даже написал книги против Лютера В защиту семи таинств 1521 в основе которой были не аргументы а брань в адрес виттенбергского реформатора.
26317. Контрреформация в странах Западной Европы 25.22 KB
  Контрреформация Контрреформация в Западной Европе католическое движение возникшее после выдвижения идей Лютера Кальвина Цвингли и других реформаторов имевшее своей целью восстановить престиж католической церкви и веры. Кроме этих мер принимались и решения по изменению организации церкви. Упрёки по поводу упадка нравов внутри церкви были слышны уже в XII в. И внутри церкви были те кто пытался искоренить эти недостатки.
26318. Абсолютизм в Западной Европе (на примере Англии, Франции, Испании) 64.42 KB
  В XIV в. Но все же парламент сыграл прогрессивную роль в политическом развитии Англии XIV XVвв. Фронда Людовик XIII лишь несколькими месяцами пережил своего министра и престол перешёл к его сыну Людовику XIV 1643 1715 годы во время малолетства которого управляли мать его Анна Австрийская и кардинал Мазарини продолжатель политики Ришельё. Людовик XIV Дело кончилось победой кардинала Мазарини но молодой король вынес из этой борьбы крайне печальные воспоминания.
26319. Социально – экономичское и политическое развитие Нидерландов в п.п. XVI в. 29.97 KB
  XVI в. был создан тот трамплин отталкиваясь от которого Нидерланды осуществили поразивший современников динамичный прыжок в XVI столетие. На рынках Эклоо Гента Куртре к середине XVI в. В XVI в.
26320. Усиление феодально – католической реакции при Филиппе II. Назревание революционной ситуации 16.7 KB
  Усиление испанского гнета во второй половине XVI в. Филипп II c самого начала решил установить в Нидерландах бюрократическую систему испанского абсолютизма с целью полного экономического политического и религиозного подчинения страны. Для достижения этой цели испанское правительство наметило следующие мероприятия: увеличение количества испанских войск в стране; сосредоточение фактической власти в руках узкого состава государственного совета консульты членами которого были верные слуги испанского правительства придание епископам...
26321. Основные этапы Нидерландской буржуазной революции и их характерные особенности 25.61 KB
  В рамках усилий по созданию стабильного и надёжного правительства Нидерландов Филипп назначил Маргариту Пармскую штатгальтером Нидерландов. Он продолжил политику своего отца при назначении членов высшего дворянства Нидерландов в Государственный совет руководящий орган семнадцати провинций. Тем не менее уже в 1558 году штаты провинций и генеральный штат Нидерландов стали противоречить пожеланиям Филиппа возражая против его налоговой политики и требуя вывода испанских войск с юга Нидерландов. Несмотря на это к 1570 году испанцы в целом...