66174

Правила работы в микробиологической лаборатории. Иммерсионный микроскоп. Шаровидные бактерии. Простые методы окраски

Практическая работа

Биология и генетика

Знание морфологии бактерий имеет большое значение для микроскопического метода лабораторной диагностики инфекционных заболеваний. Изучение морфологии бактерий осуществляется при микроскопии окрашенных микроскопических препаратов.

Русский

2014-08-14

108 KB

12 чел.

9

Методическое указание для студентов к практическому занятию 1

Тема: Правила работы в микробиологической лаборатории. Иммерсионный микро-

скоп. Шаровидные бактерии. Простые методы окраски.

Цель: Освоения практических навыков работы в микробиологической лаборатории,

приготовление мазков, окраска простыми методами.

Модуль1. Морфология и физиология микроорганизмов.

Содержательный модуль 2. Морфология и структура прокариотов и паразитических одноклеточных эукариотов.

Тема занятия 1. Правила работы в микробиологической лаборатории. Иммерсион-ный микроскоп. Шаровидные бактерии. Простые методы окраски.

Актуальность темы. Современные бактериологические лаборатории требуют особого режима работы. При организации лабораторий, прежде всего, необходимо обеспечить безопасность работы сотрудников. Учебная комната тоже есть, в некоторой мере, бактериологической лабораторией и студенты при выполнении самостоятельной работы тоже должны выполнять правила техники безопасности.

При изучении микроскопических препаратов используются иммерсионные микроскопы, которые имеют преимущество перед световыми. Благодаря использованию иммерсионного масла (кедрового или вазелинового), показатель преломления которого равняется показателю преломление стекла,  разрешающая способность иммерсионного микроскопа равняется 0,2 мкм.

Знание морфологии бактерий имеет большое значение для микроскопического метода лабораторной диагностики инфекционных заболеваний. Изучение морфологии бактерий осуществляется при микроскопии окрашенных микроскопических препаратов. К простым методам окраски относятся: методы окраски метиленовым синим и карболовым фуксином. Окраска метиленовым синим проводится на протяжении 3-5 минут, а окраска карболовым фуксином 1-2 минуты.

Кокки - это шаровидные бактерии, которые в зависимости от расположения делятся на микрококки, диплококки, стафилококки, стрептококки, тетракокки и сарцины. Микрококки располагаются в виде отдельных клеток, диплококки – парами (гонококк, пневмококк, менингококк), так как клетки после деления не расходятся, стрептококки – в виде цепи, стафилококки – неправильными скоплениями в виде гроздьев винограда.

Пневмококк (возбудитель пневмонии) имеет с противоположных сторон ланцетовидную форму, а гонококк (возбудитель гонореи) и менингококк (возбудитель эпидемического менингита) - форму кофейных зерен, обращенных вогнутой поверхностью друг к другу. Стрептококки (от греч. streptos - цепочка) - клетки округлой или вытянутой формы, составляющие цепочку вследствие деления клеток в одной плоскости и сохранения связи между ними в месте деления. Сарцины (от лат. sarcina - связка, тюк) располагаются в виде пакетов из 8 и более кокков, так как они образуются при делении клетки в трех взаимно перпендикулярных областях. Стафилококки (от греч. staphyle - виноградная гроздь) представляют собой кокки, расположенные группами (гроздьями) в результате деления в разных плоскостях.

Конкретные цели:

Ознакомиться с правилами работы в бактериологической лаборатории.

Трактовать методики приготовления бактериологических препаратов.

Описывать морфологические формы шаровидных бактерий.

Трактовать результаты микроскопического исследования микроорганизмов.

Анализировать морфологию шаровидных бактерий.

Уметь:

Готовить микропрепараты из чистых культур шаровидных бактерий.

Красить микропрепараты простыми методами (метиленовым синим и фуксином)

Проводить микроскопию микропрепаратов с помощью иммерсионного микроскопа.

Анализировать морфологию шаровидных бактерий.

Теоретические вопросы:

1. Правила работы в бактериологической лаборатории.

2. Строение иммерсионного микроскопа.

3. Характеристики иммерсионного объектива.

4. Правила использования иммерсионного микроскопа при микроскопии окрашенных препаратов.

5. Красители для простых методов окраски.

6. Техника приготовления препаратов из культур бактерий и окраска их простыми методами.

7. Шаровидные бактерии, их морфология.

8. Примеры кокков патогенных для человека и заболеваний, вызванных ними.

 Практические задачи, которые выполняются на занятии:

Приготовление микропрепаратов из чистых культур шаровидных бактерий.

Окраска микропрепаратов простыми методами.

Микроскопия микропрепаратов из чистых культур бактерий, их анализ и зарисовка в протокол.

Микроскопия демонстрационных микропрепаратов: стафилококк (окраска метиле-новым синим), стрептококк (окраска метиленовым синим), пневмококк (окраска метиленовым синим),

Зарисовка демонстрационных микропрепаратов в протокол.

Оформление протокола.

Литература:

  1.  Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией. – Киев: Высшая шк.., 1992. – 431 с.
  2.  Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Э.П., Рыбакова А.М. Микробиология. – Г.: Медицина,1998. – 336с.
  3.  Медицинская микробиология / Под редакцией В.И.Покровского. – Г.: ГЄОТАР-МЕД, 2001. – 768с.
  4.  Конспект лекции.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения правил техники безопасности при работе в бактериологической лаборатории, изучения  правил работы с иммерсионным микроскопом. Студенты готовят микропрепараты, красят их простыми методами и проводят микроскопию. Потом студенты зарисовывают микропрепараты и дают необходимые объяснения. В состав самостоятельной работы входит  также микроскопия демонстрационных препаратов, и их зарисовка.

В конце занятие проводится тестовый контроль и анализ итогов  результатов самостоятельной работы каждого студента.


Технологическая карта проведения практического занятия

№ п/п

Этапы

Время в мин.

Средства обучения

Оснащения

Место прове-дения

1.

Проверка и коррекция исходного уровня подготовки к занятию

20

Тестовые задачи исходного уровня

Таблицы, атлас

Учеб-ная комната

2.

Самостоятельная работа

35

Графы логической структуры

Иммерсионный микроскоп, красители, предметные стекла, бактериологические петли, посевы чистых культур бактерий.

3.

Самопроверка и коррекция усвоения материала

15

Целевые учебные задания

4.

Тестовый контроль.

15

Тесты

5.

Анализ результатов работы.

5

Тестовые задания исходного уровня:

  1.  Иммерсионный микроскоп отличается от светового:

А. Использованием дополнительного источника света

В. Использованием специального конденсора

С. Использованием иммерсионного масла

D. Использованием специального окуляра

E. Использованием  диафрагмы

  1.  Оптическая часть иммерсионного микроскопа состоит из:

А. Объектив, зеркало

В. Объектив, окуляр

С. Объектив, окуляр, зеркало

D. Объектив, окуляр, конденсор

Е. Объектив, окуляр, конденсор, зеркало

  1.   Полезное увеличение микроскопа определяется:

А. Суммой увеличения объектива и окуляра

В. Умножением увеличений объектива на окуляр

С. Увеличением объектива и конденсора

D. Увеличением объектива, конденсора, окуляра

Е. –

Целевые учебные задания:

1. У мужчины 54 лет, страдающего хроническим тонзилитом, в мазке из зева выявлены шаровидные бактерии, которые образуют гроздевидные скопления. Как называются бактерии с таким расположением?

А. Стафилококки

В. Стрептококки

С. Микрококки

D. Сарцины

E. Менингококки

2. При плановом обследовании персонала одного из детских садов на бактерионосительство патогенных бактерий, у одной из воспитательниц выделена чистая культура шаровидных бактерий. При микроскопии в микропрепарате выявлены грамеположительные бактерии в виде коротких цепочек. Носительство какого вида бактерий можно заподозрить в этом случае?

А.Менингококки

B. Стрептококки

C. Микрококки

D. Сарцины

E. Стафилококки

3. После перенесенной инфекции верхних дыхательных путей ребенок длительное время жалуется на боли в суставах, которые усиливаются в осенний период. Какой микроорганизм был наиболее вероятной причиной перенесенного заболевания?

A. S. аureus

В. S. рyogenes

С. S. pneumoniae

D. N. meningitides

E. N. gonorrhoeae

4. В хирургическом отделении возникла вспышка госпитальной инфекции, вызванная S.aureus. Как располагается S.aureus в микропрепаратах?

А. Группами по 4 клетки

В. В виде цепочки

С. Парами

D. В виде пакетов

Е. Гроздевидно

5. В больницу обратился больной с жалобами на гнойные выделения из уретры и боль при мочеиспускании. Какай вид бактерий, вероятнее всего, вызвал данное заболевание?

A. S. аureus

В. S. рyogenes

С. S. pneumoniae

D. N. meningitides

Е. N. gonorrhoeae

6. Известно, что при фиксации мазков используют различные растворы и методы. Каким образом необходимо проводить фиксацию мазков, приготовленных из крови?

А. Карболовым фуксином

В. Смесью Никифорова

С. Этиловый спирт (96о )

D. Пламя

Е. Хлороформ

Алгоритм лабораторной работы:

  1.  Изучение инструкции «Правила работы в бактериологической лаборатории».
  2.  Изучение правил работы с иммерсионным микроскопом.
  3.  Знакомство с оборудованием для проведения бактериологической работы, способа стерилизации бактериологической петли.
  4.  Приготовление мазков из культуры стафилококка.
  5.  Фиксация мазков пламенем.
  6.  Окрашивание мазков метиленовым синим на протяжении 3-5 минут.
  7.  Окрашивание мазков фуксином на протяжении 1-2 минут.
  8.  Микроскопия мазков с помощью иммерсионного микроскопа.
  9.  Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов.
  10.  Зарисовывание препаратов в протокол.
  11.  Оформление протокола.


Методическое указание для студентов к практическому занятию 2

Тема: Палочковидные бактерии. Окраска по Граму. Ультраструктура бактериальной

клетки.

Цель: Освоения практических навыков окраски по методу Грама. Изучения струк-

туры бактериальной клетки.

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов.

Содержательный модуль 2. Морфология и структура прокариотов и парази-тических одноклеточных эукариотов.

Тема занятия 2. Палочковидные бактерии. Окраска по Граму. Ультраструктура бактериальной клетки.

Актуальность темы. По своей структуре бактерии (прокариоты) существенным образом отличаются от эукариотической клетки. Прокариоты – гаплоидные организмы, которые содержат один геном, не имеют ядра и большинства органоидов. Состоят из нуклеоида, цитоплазмы и оболочки. В цитоплазме могут находиться плазмиди – генетические структуры в виде небольших молекул ДНК, рибосомы и включения. Включения могут быть в виде волютина, гликогена, гранульози, пигментов, капель серы, кальция гидрокарбоната и используются при идентификации некоторых бактерий. Например, возбудитель дифтерии содержит на концах зерна волютина (метафосфаты), что позволяет их идентифицировать. Изучение морфологии бактерий осуществляется при микроскопии окрашенных микроскопических препаратов. Основным методом окраски бактерий есть окраска по Граму. Соответственно особенностям окраски по Граму все бактерии делятся на грамположительные и грамотрицательные. Этому признаку придают большое значение в современной таксономии.Деление на группы зависит от строения клеточной стенки.  Основное вещество клеточной стенки – пептидогликан (муреин), связанный с липопротеидами, фосфолипидами, липополисахаридами. В клеточной стенке грамположительных бактерий содержание пептидогликана составляет 90%, а в грамотрицательных – 5-20%. У грамположительных бактерий есть пласт гликопептидов с тейхоевой кислотой, которая предопределяет стабильность ферментов клетки. При окраске по Граму, такое строение клеточной стенки грамположительных бактерий предопределяет стойкое соединение ее с генцианвиолетом и раствором Люголя и бактерии даже после обработки спиртом остаются сине-фиолетового цвета. Грамотрицательные бактерии обесцвечиваются спиртом и при дополнительной окраске фуксином становятся красными.

Знание морфологии палочковидных бактерий имеет большое значение, так как большинство инфекционных болезней вызываются именно палочковидными бактериями. Они делятся на собственно бактерии, бациллы и клостридии. Палочковидные бактерии различаются по размерам, форме концов клетки и взаимному расположению клеток. Длина палочковидных бактерий 1-10мкм, толщина – 0,5-2мкм. Палочки могут быть правильной (кишечная палочка и др.) и неправильной (коринебактерии и др.) формы, в том числе ветвящиеся, например актиномицеты. Наиболее мелкие палочковидные бактерии - риккетсии. Концы палочек могут быть как бы обрезанными (сибиреязвенная бацилла), закругленными (кишечная палочка), заостренными (фузобактерии) или в виде утолщения, и тогда палочка похожа на булаву (коринебактерии дифтерии).

К собственно бактериям относятся бактерии, которые не образуют спор (эшерихии, шигелли, возбудители дифтерии и др.). Бациллы и клостридии большей частью образуют споры и отличаются местоположением спор, характером концов палочек и их расположением. Так, клостридии имеют заостренные концы и напоминают веретено, а у бацилл концы палочек обрубленные. К бациллам относятся возбудители сибирской язвы, к клостридиям – возбудители столбняка, ботулизма и др.

Конкретные цели:

Выучить ультраструктуру бактериальной клетки.

Проанализировать отличия в строении эукариотов (простейших) и прокариотов.

Ознакомиться со строением клеточной стенки грамположительных и грамотри-цательных бактерий.

Уметь дифференцировать грамположительные и грамотрицательные бактерии в микропрепаратах.

Описывать морфологические формы палочковидных бактерий.

Анализировать морфологию палочковидных бактерий.

Уметь:

Готовить микропрепараты из чистых культур палочковидных бактерий.

Готовить микропрепараты из смеси бактерий.

Красить микропрепараты по методу Грама.

Распознавать грамположительные и грамотрицательные бактерии в смеси бактерий.

Проводить микроскопию микропрепаратов с помощью иммерсионного микроскопа.

Анализировать морфологию палочковидных бактерий.

Теоретические вопросы:

1. Морфология палочковидных бактерий.

2. Деление палочковидных бактерий по форме, размеру, характеру их концов и взаимному расположению.

3. Деление палочек на бактерии, бациллы и клостридии.

4. Ультраструктура бактериальной клетки.

5. Строение клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий.

6. Окраска по методу Грама (механизм метода, техника).

7. Отношения разных групп бактерий к окраске по Граму. Практическое значение.

8. Примеры грамположительных и грамотрицательных бактерий, патогенных для человека и заболеваний, вызванных ними.

 Практические задачи, которые выполняются на занятии:

  1.  Приготовление микропрепаратов из чистых культур палочковидных бактерий и смеси бактерий.
  2.  Окраска микропрепаратов по Граму.
  3.  Микроскопия микропрепаратов из чистых культур палочковидных бактерий, их анализ и зарисовка в протокол.
  4.  Микроскопия демонстрационных микропрепаратов: собственно бактерии, стрепто-бацилли (окраска по Граму), эритроциты и палочки (окраска по Романовскому-Гимза).
  5.  Зарисовка демонстрационных микропрепаратов в протокол.
  6.  Оформление протокола.

Литература:

  1.  Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией. – Киев: Высшая шк.., 1992. – 431 с.
    1.  Ворбьев А.В., Быков А.С., Пашков Э.П., Рыбакова А.М. Микробиология. – Г.: Медицина,1998. – 336с.
      1.  Медицинская микробиология / Под редакцией В.И.Покровского. – Г.: ГЄОТАР-МЕД, 2001. – 768с.
        1.  Конспект лекции.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из  приготовления микропрепаратов из чистых культур палочковидных бактерий и смеси бактерий, окраски их по Граму, проведения микроскопии. Потом студенты зарисовывают микропрепараты и дают необходимые объяснения. В состав самостоятельной работы входит  также микроскопия демонстрационных препаратов, и их зарисовка.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итогов  результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

№ п/п

Этапы

Время в мин.

Средства обучения

Оснащение

Место прове-дения

1.

Проверка и кор-рекция исходного уровня подготовки к занятию

20

Тестовые задачи исходного уровня

Таблицы, атлас

Учеб-ная комната

2.

Самостоятельная работа

35

Графы логической структуры

Иммерсионный микроскоп, красители, предметные стекла, бактериологические петли, посевы чистых культур бактерий, смесь бактерий.

3.

Самопроверка и коррекция усвое-ния материала

15

Целевые учебные задания

4.

Тестовый контроль.

15

Тесты

5.

Анализ результатов работы.

5

Целевые учебные задания:

  1.  В больницу обратился ветеринарный врач по поводу образования на коже карбункула. При микроскопии гноя из карбункула выявили грамположительные стрептобациллы. Какие бактерии могли вызвать образование карбункула в этом случае?

A. Возбудитель столбняка

B. Возбудители дифтерии

C. Возбудитель ботулизма

D. Возбудитель сибирской язвы

E. Возбудитель туберкулеза

  1.  

  1.  У ребенка 5 лет, больного ангиной, в мазке из зева выявили бактерии, которые имели булавовидные утолщения на концах. Как называются бактерии с такой морфологией?

A. Возбудитель столбняка

B. Возбудители дифтерии

C. Возбудитель ботулизма

D. Возбудитель сибирской язвы

E. Возбудитель туберкулеза

  1.  

  1.  Известно, что ДНК в клетках прокариот образует нуклеоид. Какая из перечисленных структур клеток бактерий также может быть носителем генетической информации, кроме нуклеоида?

A. Рибосомы

B. Жгутики

C. Капсула

D. Мезосомы

E. Плазмиды

  1.  

  1.  Во время самостоятельной работы студентам предложено выявить внутриклеточные включения гликогена у аеробных бацилл. Каким раствором необходимо провести обработку препарата для выявления гликогена?

A. Раствором генцианвиалетом

B. Раствором фуксина

C. Раствором Люголя

D. Раствором метиленового синего

E. Раствором спирта

  1.  

  1.  У новорожденного, болеющего колиэнтеритом, при бактериологическом исследовании фекалия изолировано чистую культуру бактерий, которые в микропрепаратах имели вид маленьких грамотрицательных беспорядочно расположенных палочек с округлыми концами. Какие бактерии были изолированы в данном случае?

A. Эшерихии

B. Стрептобациллы

C. Коринобактерии

D. Клостридии

E. Стрептобактерии

  1.  

  1.  Известно, что в цитоплазме прокариот есть различные включения. Какие включения, имеющие диагностическое значение, можно выявить у Corynebacterium diphteriae?

A. Гликоген

B. Волютин

C. Гранулеза

D. Пигмент

E. Сера

Алгоритм лабораторной работы:

  1.  Изучение инструкции «Правила работы в бактериологической лаборатории».
  2.  Изучение правил работы с иммерсионным микроскопом.
  3.  Знакомство с оборудованием для проведения бактериологической работы, способа стерилизации бактериологической петли.
  4.  Приготовление мазков из культуры стафилококка.
  5.  Фиксация мазков пламенем.
  6.  Окрашивание мазков метиленовым синим на протяжении 3-5 минут.
  7.  Окрашивание мазков фуксином на протяжении 1-2 минут.
  8.  Микроскопия мазков с помощью иммерсионного микроскопа.
  9.  Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов.
  10.  Зарисовывание препаратов в протокол.
  11.  Оформление протокола.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

62620. Урок как основная форма обучения экологии в школе 24.24 KB
  Задач конкретного урока и его места в общей системе уроков определение оптимального содержания урока и с учетом подготовки учащихся выбор рациональных методов приемов и средств стимулирования и контроля сочетание различных форм работы с деятельностью учащихся...