ID: 66202

Название работы: Питание бактерий. Простые питательные среды. Посев на МПА и МПБ. Методы стерилизации

Категория: Практическая работа

Предметная область: Биология и генетика

Описание: Цель: Изучение принципов культивирования бактерий особенностей транспортирования инфицированного материала методов стерилизации и дезинфекции. Питание бактерий. Автотрофы многочисленная группа свободно существующих микроорганизмов бактерий грибов водорослей...

Язык: Русский

Дата добавления: 2014-08-15

Размер файла: 102.5 KB

Работу скачали: 19 чел.

Методическое указание для студентов к практическому занятию 9

Тема: Питание бактерий. Простые питательные среды. Посев на МПА и МПБ. Методы стерилизации.

Цель: Изучение принципов культивирования бактерий, особеннос-тей транспортирования инфицированного материала, методов стерилизации и дезинфекции.

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов.

Содержательный модуль 3. Физиология микроорганизмов.

Тема 9. Питание бактерий. Простые питательные среды. Посев на МПА и МПБ. Методы стерилизации.

Актуальность темы:

Всем микроорганизмам присущий непрерывный обмен с окружающей средой - метаболизм. Метаболизм состоит из двух противоположных, но взаимозависимых процессов: ассимиляции (анаболизм, конструктивный метаболизм); и диссимиляции (катаболизм, энергетический метаболизм).

За типом питания все микроорганизмы разделяют на автотрофы и гетеротрофы.

Автотрофы – многочисленная группа свободно существующих микроорганизмов (бактерий, грибов, водорослей), основным (факультативные автотрофы) или единым (облигатные автотрофы) источником углерода или азота для которых есть неорганические вещества.

Гетеротрофы – организмы, которые приобретают углерод и азот из органических веществ.

За характером использования источника энергии различают три группы бактерий:

1.  Фототрофы, как источник энергии используют солнечный свет;
2.  Литотрофы – неорганический углерод;
3.  Органотрофы – органический углерод (углеводы, жирные кислоты).

Важнейшие объекты для медицинской микробиологии - хемоорганотрофы, их разделяют на сапрофиты и паразитов.

Сапрофиты в процессе своей жизнедеятельности используют органические вещества, которые есть в окружающей среде.

Паразиты питаются за счет органических соединений животных и человека.

Прототрофы – синтезируют все соединения из глюкозы и солей аммония.

Ауксотрофы дополнительно нуждаются в специальных веществах – факторов роста.

Поглащение бактериями, грибами, водорослями питательных веществ, осуществляется галофильно (питательные вещества должны быть в растворимом виде) благодаря

1.  пассивной диффузии
2.  облегченной диффузией
3.  активным транспортом (при участии специальных ферментов - пермеаз)
4.  транслокацией химических групп

В лабораторных условиях бактерии выращивают на питательных средах. Питательные среды должны имитировать естественные условия, в которых находятся микроорганизмы, и содержать:

1. источник энергии

2. источник углерода

3. источник азота

4. соли (сульфаты, фосфаты, хлориды и прочие)

5. факторы роста (триптофан для S.typhi, глютатион для гонококков)

6. иметь рН 7,2-7,6

7. быть стерильными

Питательные среды разделяют на четыре основных группы:

1.  Универсальные (МПА, МПБ) - содержат питательные вещества, в присутствии которых растут много видов патогенных бактерий.
2.  Специальные - применяют для выращивания бактерий, которые не размножаются на универсальных средах (кровяной агар, сывороточный бульон, сывороточный агар и др.)
3.  Выборочные (элективные) - характеризуются тем, что на них хорошо развиваются только определенные виды бактерий и плохо или совсем не растут другие виды (щелочная пептонная вода - для холерного вибриона). Питательные среды, которые содержат определенные концентрации антибиотиков, элективные для стойких к этим антибиотикам штаммов и вместе с тем селективные для антибиотико-чувствительных культур.
4.  Дифференциально-диагностические среды (Гисса, Эндо, Плоскирева).

МПБ - мясо-пептонный бульон

МПА - мясо-пептонный агар

Пептон - белок частично переварен пепсином или трипсином

Агар-агар - комплексные полисахариды, которые выделено из водорослей. Разрежаются при температуре 80-1000С, уплотняются при температуре 35-420С.

Стерилизация – процесс, который сопровождается разрушением всех видов микроорганизмов, включая споры и вирусы.

Дезинфекция – процесс разрушения патогенных микроорганизмов, которые могут вызвать инфекцию.

Стерилизация может осуществляться двумя методами:

Физический (солнечное излучение, сухой жар, пар, фильтрование, влияние радиационного излучения, ультразвука).

Химический (кислоты, щелочи, галогены, редуцирующие агенты, формальдегид, фенол, мыла, краски и др.)

Конкретные цели:

1.  Студенты должны знать химический состав бактерий, и как он влияет на нужды бактерий в питательных веществах.
2.  Студенты должны знать классификацию бактерий за типом питания и классификацию питательных сред.
3.  Студенты должны привести состав МПБ и МПА, и знать технику посева бактерий на эти питательные среды.
4.  Студенты должны продемонстрировать фундаментальные знания методов стерилизации и дезинфекции, и оценить их роль в предупреждении инфекционных болезней и гнойно-септических осложнений.

 Уметь:

1.  Приготовить мазки из чистых культур E.coli, S.epidermidis, B.anthracoides и красить их по Граму.
2.  Микроскопировать мазки, окрашенные по Граму, пользуясь иммерсионным микроскопом.
3.  Сеять чистые культуры E.coli, S.epidermidis, B.anthracoides на питательные среды МПБ и МПА.

 Теоретические вопросы:

1.  Метаболизм микроорганизмов: анаболизм, катаболизм.
2.  Химическое строение бактериальной клетки: органические и неорганические составляющие.
3.  Нужды бактерий в питательных веществах: водовод, кислород, углерод, азот, органические факторы роста.
4.  Классификация бактерий на основании источников для конструктивного и энергетического метаболизма.
5.  Классификация питательных сред.
6.  Состав универсальных питательных сред.
7.  Методы стерилизации и дезинфекции.

 Практические задачи, которые выполняют на занятии:

1.  Микроскопировать демонстрационные препараты E.coli, S.epidermidis, B.anthracoides
2.  Приготовить мазки из чистых культур E.coli, S.epidermidis, B.anthracoides
3.  Покрасить и промикроскопировать приготовленные мазки.
4.  Сравнить приготовленные препараты с демонстрационными, описать их и идентифицировать.
5.  Пересеять чистые культуры E.coli, S.epidermidis, B.anthracoides на МПБ или МПА.
6.  Зарисовать все препараты.
7.  Оформить протокол практического занятия.

 Литература:

1.  Коротяев А.И., Бабичев С.О. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология.- С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 579с.
2.  Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.
3.  Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.: ГЕОТАФ-МЕД, 2001.- 768с.
4.  Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія.- Київ.: "Вища школа", 1992.– 431с.
5.  Конспект лекцій

Краткие методические указания к работе на практическом занятии:

В начале практического занятия преподаватель проверяет уровень подготовки студентов, используя тесты входного контроля.

Самостоятельная работа студентов состоит из приготовления мазков из чистых культур Э.coli, S.epidermidis, B.anthracoides и окраска их по Граму. Студенты микроскопируют демонстрационные и собственноручно приготовленные препараты, зарисовывают их в протокол.

Лабораторная работа завершается посевом чистых культур Е.coli, S.epidermidis, B.anthracoides на МПБ и МПА.

Каждый студент оформляет протокол работы.

В конце практического занятия преподаватель проводит исходный контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

№ п/п	Этапы	Время в мин.	Средства обучения	Оснащение	Место проведения
1	Проверка и кор-рекция исходно-го уровня подго-товки к занятию	20'	Тестовые задачи исходного уровня	Таблицы, атласы, рисунки	У Ч Е Б Н А Я К О М Н А Т А
2	Самостоятель-ная работа	25'	Графологические структуры. Коллек-ция селективных питательных сред, чашки с МПА с изо-лированными коло-ниями 3-х типов	Смесь бактерий: кишечная палоч-ка, стафилококк, антракоид. Имме-рсионный микро-скоп, краски для окраски мазков по Граму.
3	Самоконтроль и коррекция усво-ения материала	20'	Целевые учебные задания
4	Тестовый контроль	15'	Тесты
5	Анализ резуль-татов работы	10'

Целевые учебные задания:

1. Микроорганизмы, способные синтезировать все соединения из глюкозы как единственного источника углерода и из солей аммония как единственного источника азота, являются:

1.  

1.  Автотрофами
2.  Прототрофами
3.  Литотрофами
4.  Фототрофами
5.  Хемотрофами

2. Агар-агар является комплексным полисахаридом из морских водорослей, который используется для придания питательной среде плотности. В какой концентрации агар-агар добавляется к питательной среде, чтобы она стала полужидкой:

1.  

1.  0,1% - 0,5%
2.  0,5% - 1,0%
3.  1,0% - 2,0%
4.  2,0% - 3,0%
5.  3,0% - 4,0%

3. Одним из важных требований к питательным средам является создание оптимальных значений рН. При каких оптимальных рН наблюдается наибольший рост подавляющего большинства бактерий.

1.  

1.  6,2-6,6
2.  6,7-7,1
3.  7,2-7,6
4.  7,7-8,1
5.  8,1-8,5

4. В лаборатории с целью ускорения процесса стерилизации провели стерилизацию сахаросодержащих сред текучим паром в один день: утром, днём и вечером по 30 мин. как правильно надо провести стерилизацию питательных сред?

1.  

1.  Стерилизовать 1ч
2.  Стерилизовать 15 мин
3.  Стерилизовать 45мин
4.  Стерилизовать трижды с интервалом 24 часа
5.  Стерилизовать дважды на пару

5. Для культивирования кишечной палочки в бактериологической лаборатории приготовили простые питательные среды МПБ и МПА. Какой режим стерилизации необходимо использовать для этих сред?

1.  Сухожаровой метод при температуре 160˚С
2.  Фильтрацию
3.  Кипячение
4.  Паром под давлением в автоклаве
5.  УФ-облучение

6. После окончания работы в лаборатории студент должен убрать свое рабочее место, продезинфицировать стол, инструменты. Какие химические вещества он должен для этого использовать?

1.  

1.  Хлоруксусную кислоту
2.  Хлорамин
3.  Формалин
4.  Хлороформ
5.  Эфир

Алгоритм практического занятия

1. Микроскопия демонстрационных препаратов E.coli, S.epidermidis, B.anthra-coides - 4мин

1.  E.coli - грамотрицательная мелкая палочка (2-4µм×0,4-0,7µм);
2.  S.epidermidis - овоидные или шарообразные грамположительные бак-терии (0,8-0,9µм);
3.  B.anthracoides - грамположительная большая палочка (1×3-4µм), может быть расположенная в виде коротких цепей.

2. Приготавливание мазков из чистых культур:

1.  Е.coli - 2мин.
2.  S.epidermidis - 2мин.
3.  B.anthracoides - 2мин.

3. Окраска мазков по Граму - 5мин.

4. Микроскопия мазков в иммерсионном микроскопе - 4мин.

5. Сравнение приготовленных препаратов с демонстрационными, их описа-ние и идентификация - 6мин.

6. Высев чистых культур Е.coli, S.epidermidis, B.anthracoides на МПБ или МПА - 3мин.

7. Зарисовка препаратов к альбому - 3мин.

8. Оформление протокола - 4мин.

Граф логической структуры темы: «ПИТАНИЕ БАКТЕРИЙ. ПРОСТЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ. ПОСЕВ НА МПА И МПБ. МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ»

химические факторы

-спирты

-фенолы

-галогены

-альдегиды

-поверхностно-активные вещества

изические факторы

-сухой жар

-пар

-радиация

-фильтрация

ПЛОТНЫЕ

-МПА

СТЕРИЛИЗАЦИЯ (дезинфекция)

ЭЛЕКТИВНЫЕ

-щелочная пептонная вода

-щелочной МПА

ДИФФЕРЕНЦИ-АЛЬНО-ДИАГ-НОСТИЧЕСКИЕ

-Гисса

-Эндо

-Плоскирева

СПЕЦИАЛЬНЫЕ

-кровяной агар

-сывороточный агар

ЖИДКИЕ

-МПБ

УНИВЕРСАЛЬ-НЫЕ

-МПБ

-МПА

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

-аэробные                           -анаэробные

органотрофы

литотрофы

фототрофы

хемотрофы

гетеротроф

автотрофы

Потребность в питательных веществах

- для анаболизма   для катаболизма

СОСТАВ БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ

органическая часть     неорганическая часть

-белки, нуклеиновые кислоты    водород, азот, углерод,

-углеводы, липиды; - полисахариды  кислород, натрий, калий и др..

АНАБОЛИЗМ

(конструктивный метаболизм)

КАТАБОЛИЗМ

(энергетический метаболизм)

МЕТАБОЛИЗМ