66205

Выделение чистых культур аэробов. Элективные питательные среды

Практическая работа

Биология и генетика

В клинической бактериологической лаборатории необходимо: Выделить бактерии в чистой культуре; Изучит их свойства; Получить достаточно бактерий для приготовления антигенов и для других исследований; Идентифицировать выделенные микроорганизмы изучая их биохимические...

Русский

2014-08-15

108 KB

12 чел.

Методическое указание для студентов к практическому занятию 10

Тема: Выделение чистых культур аэробов. Элективные питатель-ные среды.

Цель: Изучение принципов и методов выделения чистых культур аэробов, определение типов роста на МПА и МПБ и свойства элективных и селективных питательных сред.

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов.

Содержательный модуль 2. Физиология микроорганизмов.

Тема 10: Выделение чистых культур аэробов. Элективные питательные среды.

Актуальность темы. Не всегда возможно поставить диагноз или идентифицировать микроорганизм - возбудитель инфекционной болезни, используя изучение только морфологических свойств. Весьма важно выделить возбудитель инфекционной болезни в чистой культуре и идентифицировать его.

В клинической бактериологической лаборатории необходимо:

  1.  Выделить бактерии в чистой культуре;
  2.  Изучит их свойства;
  3.  Получить достаточно бактерий для приготовления антигенов и для других исследований;
  4.  Идентифицировать выделенные микроорганизмы, изучая их биохимические, антигенные свойства и определяя чувствительность их к бактериофагам (фаготипирование) и бактериоцинам;
  5.  Определить чувствительность выделенных культур бактерий к антибиотикам;
  6.  Оценить количество возбудителей инфекции в инфицированном материале;
  7.  Сохранить выделенный штамм бактерий.

Чистой культурой называют сосредоточение микробов одного вида на питательной среде.

Существует несколько методов выделения чистой культуры аэробов:

  1.  Физический (использование высокой температуры ~ 800С – для выделения спорообразующих бактерий).
  2.  Химический (использование щелочей или кислот - для кислоторезистентных бактерий).
  3.  Биологический (использование экспериментальных животные - для выделения бактерий - возбудителей зоонозных инфекций).
  4.  Механический (используется для выделения практически всех видов бактерий):

а) согласно Дригальского или

б) Коха

  1.  Использование выборочных (элективных или селективных) питательных сред, на которые хорошо развиваются только определенные виды бактерий и плохо или совсем не растут другие виды.

Так, например, щелочная пептонная вода и щелочной МПБ являются элективными средами для холерного вибриона. Питательные среды, содержащие определенные концентрации пенициллина или других антибиотиков, элективны для устойчивых к ним штаммов и вместе с тем селективны к антибиотикочувствительным культурам.

Как правило, особенно если бактерии не имеют свойств, позволяющих применить один из способов первичной обработки исследуемого материала, применяют механический метод разъединения особей смеси микроорганизмов, делая посев на плотную питательную среду для получения изолированных колоний каждого вида. Согласно методу Дригальского используют 3 чашки Петри с плотной питательной средой, на которые засевают шпателем или пастеровской петлей смесь постепенно, не стерилизуя, используя всю поверхность чашки, для того чтобы получить изолированные колонии. Соответственно методу Коха смесь на первых этапах разводят в расплавленной и охлажденной плотной среде до нужной концентрации, а потом заливают чашки Петри, чтобы также получить изолированные колонии. Колонии тщательно изучают, отбирают нужные и пересевают на МПА для получения достаточного материала.

Конкретные цели:

  •  Знать принципы и методы выделения чистой культуры аэробов.
  •  Знать состав и свойства элективных и селективных питательных сред.
  •  Уметь идентифицировать и описать типы роста чистых культур аэробов S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides:

а) на МПБ

б) на МПА

  •  Уметь посеять смесь бактерий на чашку Петри с МПА для получения изолированных колоний, используя метод Дригальского.

Уметь:

  1.  Приготовить мазки из посевов чистых культур S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides на МПБ и МПА и окрасит их по Граму.
    1.  Описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в мазках из чистых культур.
    2.  Приготовить мазок из смеси бактерий, которая содержит S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides и окрасить по Граму.
    3.  Описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides в мазках из их смеси.
    4.  Посеять смесь бактерий на плотную питательную среду (МПА), используя метод Дригальского для получения изолированных колоний каждого вида.

Теоретические вопросы:

  1.  Бактериологический метод в лабораторной диагностике инфекционных болезней.
  2.  Понятие: штамм, колония, чистая культура, элективная (селективная) питательная среда.
  3.  Принципы и методы выделения чистой культуры аэробов.
  4.  Состав и свойства элективных, селективных питательных сред.
  5.  Техника посева бактерий на редкие и плотные питательные среды.
  6.  Характер роста бактерий на редких и плотных питательных средах.

Практические задачи, которые выполняют на занятии:

  1.  Промикроскопировать, описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в демонстрационных препаратах чистых культур и смеси.
  2.  Приготовить мазки из посевов S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides на МПБ и МПА.
  3.  Окрасит мазки по Граму.
  4.  Промикроскопировать, описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в мазках чистых культур.
  5.  Приготовить мазок из смеси бактерий, которая содержит S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides.
  6.  Окрасить мазок из смеси бактерий по Граму.
  7.  Промикроскопировать, описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в мазках из их смеси.
  8.  Посеять смесь бактерий на чашку Петри с МПА, используя метод Дригальского.
  9.  Оформить протокол в альбоме, зарисовывая демонстрационные микрослайды и препараты, которые были приготовлены студентами.

Литература:

  1.  Коротяев А.И., Бабичев С.О. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология.- С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 579с.
  2.  Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.
  3.  Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.: ГЕОТАФ-МЕД, 2001.- 768с.
  4.  Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія.- К.: "Вища школа", 1992.– 431с.
  5.  Конспект лекций.

Короткие методические указания к работе на практическом занятии:

В начале практического занятия преподаватель должен проверить уровень подготовки студентов к практическому занятию.

Самостоятельная работа студентов состоит из приготовления мазков из посевов чистых культур S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides на МПБ и МПА и окраски их по Граму. Студенты также готовят мазки из смеси бактерий, которая содержит S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides.

В дальнейшем студенты микроскопируют демонстрационные препараты чистых культур указанных видов микроорганизмов и их смеси, а также препаратов, которые были приготовлены самыми студентами. Описывают морфологические и тинкториальные свойства каждого вида, сравнивают препараты, которые они приготовили, с демонстрационными и на этом основании идентифицируют виды микробов.

Практическая работа студентов заканчивается выполнением посевов смеси 3-х видов микроорганизмов на чашку Петри с МПА, используя метод Дригальского.

Каждый студент должен зарисовать все микропрепараты в альбом и оформить протокол практического занятия.

В конце практического занятия преподаватель проводит исходный тестовый контроль и анализирует итоговые результаты самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

№ п/п

Этапы

Время в мин.

Средства обучения

Оснащение

Место проведения

1

Проверка и коррекция ис-ходного уров-ня подготовки к занятию

10'

Тестовые зада-ния исходного уровня

Таблицы, атлас

У

Ч

Е

Б

Н

А

Я

К

О

М

Н

А

Т

А

2

Самостоятельная работа

35'

Графологические структуры, экс-курсия в цех при-готовления пита-тельных сред, де-монстрация авто-клава и другой аппаратур для стерилизации. Коллекция прос-тых питательных сред с посевами и без посевов, ингредиенты для приготовления МПБ и МПА

Иммерсионный микроскоп, краски для ок-рашивания ма-зков по Граму, чистые культу-ры E.coli, ста-филококка, антракоида. Аппаратуры для стерилиза-ции.

3

Самоконтроль и коррекция усвоения материала

20'

Целевые учебные задания

4

Тестовый контроль

15'

Тесты

5

Анализ результатов работы

10'

Целевые учебные задачи:

1. Микроорганизмы, не способные синтезировать какие-либо соединения из глюкозы и солей аммония, как единственных источников соответственно углерода и азота, называются:

  1.  

  1.  Автотрофами
  2.  Прототрофами
  3.  Ауксотрофами
  4.  Литотрофами
  5.  Фототрофами

2. Транспорт питательных веществ в клетку, который осуществляется с участием пермеаз и требует затраты энергии, относится к:

  1.  

  1.  Пассивной диффузии
  2.  Облегченной диффузии
  3.  Активному транспорту
  4.  Транслокации химических

  группировок

  1.  Ни к одному из них

3. После экспозиции с мутагеном штамм оказался лишенным межклеточной перегородки. Такое явление наиболее вероятно обусловлено с токсическим действием на одну из следующих органелл:

  1.  

  1.  Фагосому
  2.  Лизосому
  3.  Рибосому
  4.  Мезосому
  5.  Соматосому

4. В какой фазе роста бактерий отмечается максимальная скорость размножения клеток и увеличения бактериальной популяции?

  1.  

  1.  Исходная стационарная фаза
  2.  Лаг-фаза
  3.  Лог-фаза
  4.  Фаза отрицательного ускорения
  5.  Стационарная фаза максимума

 5. В бактериологическую лабораторию был доставлен материал от больного менингококковой инфекцией. Для выделения чистой культуры менингококка был использован сывороточный агар, к которому с целью подавления роста сопутствующей микрофлоры был добавлен антибиотик ристамицин. К какому типу питательных сред относится сывороточный агар с ристамицином?

  1.  

  1.  Простая
  2.  Элективная
  3.  Основная
  4.  Дифференциально-диагностическая
  5.  Транспортная

6. Во время профилактического осмотра школьников врач-стоматолог обнаружил у ученика С на слизистой оболочке ротовой полости белые кремоподобные бляшки, которые легко снимались, оставляя кровянистые эрозии. Врач заподозрил кандидоз и назначил больному микологические исследования. Какую из перечисленных питательных сред надо использовать для выявления возбудителя кандидоза?

  1.  

  1.  Среда Сабуро
  2.  Среда Ру
  3.  Среда Эндо
  4.  Среда Китт-Тароцци
  5.  Среда Гисса

7. Из испражнений больного острым гастроэнтеритом выделена чистая культура подвижных, мелких, слегка изогнутых грамотрицательных палочек, которые в течение 6ч дают рост на щелочной 1% пептонной воде в виде нежной голубоватой плёнки. Каким микро-организмам присущи такие свойства?

  1.  Спирохетам
  2.  Вибрионам
  3.  Клостридиям
  4.  Бациллам
  5.  Спириллам

Алгоритм лабораторной работы:

  1.  Промикроскопировать, описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в демонстрационных препаратах чистых культур и смеси, окрашенных по Граму - 4 минуты.
  2.  Приготовить мазки из посевов S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides на МПБ и МПА - 4 минуты.
  3.  Окрасить мазки по Граму - 5 минут.
  4.  Промикроскопировать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в мазках из чистых культур, которые приготовили студенты - 4 минуты.
  5.  Приготовить мазок из смеси бактерий S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides - 3 минуты.
  6.  Окрасить мазок из смеси бактерий по Граму - 5 минут.
  7.  Промикроскопировать, описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в мазке из их смеси - 3 минуты.
    •  в смеси студент должен найти мелкие грамотрицательные палочки (E. coli), грамположительные кокки, расположенные в виде скоплений (S. еpidermidis) и грамположительные длинные палочки, расположенные в виде цепочек (B. аnthracoides).
  8.  Посеять смесь бактерий на чашку Петри с МПА, используя метод Дригальского, для получения изолированных колоний каждого вида - 3 минуты.
  9.  Оформить протокол, в котором зарисовывают демонстрационные препараты бактерий и препараты, приготовленные студентом - 4 минуты.


Граф логической структуры темы: «ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБОВ. ЭЛЕКТИВНЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ»


Методы выделения

изические

Химические

Биологичес-кие

Механические

Избирательныесреды

высокая

температура

(80ºС)

- кислоты

- щелочи

экспериментальные животные

метод Дригальского

метод Коха

электив-ные

селектив-ные

спорообра-зующие бактерии

кислото-резистентные бактерии

зоонозные бактерии

большинст-во видов

некото-рые виды

Clostridium tetani

C. botulinum

C. perfringens

Mycobacterium

tuberculosis

-Yersinia

-B. anthracis

-Francisella

-Staphylococcus

-Enterobacteria

-Salmonella

-Vibrio

-Mycobacteria

I

факторы

группы бактерий

II

виды

III

І

ІІ

ІІІ