66339

Polymerase Chain Reaction (PCR)

Конспект урока

Педагогика и дидактика

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

Английский

2014-08-17

40 KB

0 чел.

Polymerase Chain Reaction (PCR)

 

PCR is a cell-free method of DNA cloning.  It is much faster and more sensitive than cell-based cloning.

Figure 9-E-1.  Polymerase Chain Reaction (PCR).  Primers are in green color.

Materials required:

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

  •  DNA polymerase (e.g., Tag polymerase) which can sustain high temperature (> 60o C)
  •  A large number of free deoxynucleotides (dNTPs)
  •  The target DNA fragment.

Procedure:

  1.  Heat denaturation at about 95oC. 
  2.  Primers bind to the denatured DNA by base pairing as the temperature is gradually cooled to about 60o C.
  3.  Extend primers with Tag polymerase. 
  4.  Repeat the above process.  The number of copies doubles in each cycle.  Typically 20 to 30 cycles are sufficient for effective DNA amplification. 

Advantages:

  •  Much faster than using vectors.
  •  Only very small amount of target DNA is needed.

Disadvantages:

  •  To synthesize primers, we need to know the sequence flanking the DNA segment of interest.
  •  Applies only to short DNA fragments, typically less than 5 kb.

 Site of Interest:

Animation of PCR - From Cold Spring Harbor Lab.

 Book Sections: 

Basic Features and Applications of PCR - From Human Molecular Genetics, 1999.

Review article: 

Real-Time PCR Technology for Cancer Diagnostics - Clinical Chemistry, 2002.

 


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

29251. КУЛЬТУРА ЗАПАДНОЕВРОПЕЙСКОГО СРЕДНЕВЕКОВЬЯ 53.5 KB
  В этом исторически длительном социокультурном процессе развития феодального общества вырабатывался своеобразный тип отношений человека к миру качественно отличающий его как от культуры античного общества так и от последующей культуры Нового времени эпохи буржуазного производства. Именно христианство стало основной осью складывающегося с V века в Западной Европе мира которая влияла на все стороны жизни человека его духовные приоритеты устои общества. Следование этому образцу становилось смыслом жизни каждого человека так как...
29252. Строение культуры 38 KB
  Кагану Человек общество культура являются системными объектами. Культура понимается как система высшего уровня сложности. Изоморфность филогенеза и онтогенеза свидетельствуют о том что культура есть целостновсесторонний способ очеловечивания человека и человеческого рода и отдельного его представителя в процессе обретения им таких качеств которые природе неизвестны и порождаются преобразованием биологической формы бытия в социокультурную. Таким образом первичная форма существования культуры физическая культура.
29253. Мейнстрим, субкультура и контркультура 34 KB
  Малые культурные миры называют субкультурами. Субкультура это подкультура или культура в культуре. а субкультура отличается лишь однойдвумя чертами.
29254. СУБЪЕКТ и ОБЪЕКТ КУЛЬТУРЫ 27 KB
  Субъект культуры в культурологическом понимании какаялибо социальная общность или конкретный индивид реализующий в практической деятельности культуросозидающее начало потребление и духовное освоение объектов культуры воспроизводство себя как человека определенной исторической эпохи. В культурологическом понимании объект культуры элемент фрагмент бытия культуры являющийся сферой реализации активности и историческим результатом практической деятельности субъекта культуры.
29255. ипология культуры (типы культур) 36 KB
  Типология культур строится на основании нескольких критериев: связь с религией культуры религиозные и светские; региональная принадлежность культуры культуры Востока и Запада средиземноморская латиноамериканская; региональноэтническая особенность русская французская; принадлежность к историческому типу общества культура традиционного индустриального постиндустриального общества; хозяйственный уклад культура охотников и собирателей огородников земледельцев скотоводов индустриальная культура; сфера общества или вид...
29256. Зигмунд Фрейд (1856—1939) 43.5 KB
  Перенося психоанализ на область этнографии истории религии биографий великих деятелей культуры Фрейд и его последователи рассматривают культуру как проекцию индивидуальной психики на общественный экран. Фрейд создал Венское психоаналитическое общество 1908 известность и влияние которого постепенно распространились по Европе и Америке куда Фрейд выезжал для чтения лекций. Важным вкладом Фрейда в культурологию стали его исследования так называемого подсознательного той иррациональной и темной части человеческой психики где...
29257. ФУНКЦИИ КУЛЬТУРЫ 33.5 KB
  совокупность ролей которые выполняет культура по отношению к сообществу людей. Четвертый и последующие уровни функций культуры связаны с дифференциацией культуры на специализированные функциональные сегменты: экономическая культура военная культура культура торговли религиозная культура педагогическая культура и т. системы критериев качества осуществления тех или иных социальных функций культура труда и потребления культура быта культура языка культура научного мышления культура худож.
29258. Йохан Хейзинга (1872-1945) 46 KB
  Игра старше культуры игра предшествует культуре игра творит культуру таков лейтмотив концепции Хейзинги. Свой интерес к человеку играющему Хейзинга обосновывает следующим образом: люди оказались не столь разумными как наивно внушал светлый 18 век в своем почитании Разума. Человек играющий выражает такую же существенную функцию жизнедеятельности как и человек созидающий и должен занять свое место рядом с Homo faber.
29259. Христианский тип культуры 31 KB
  Православие как культурноисторический феномен. В целом несмотря на большое влияние Византии русская культура уже с первых шагов своего развития обнаруживает заметные черты своеобразия это проявилось и двоеверии причудливом сплаве который образовало греческое православие и славянское язычество и в многоглавии первых русских соборов и в эпосе и в самом строе повседневной жизни оставшемся неизменным у подавляющего большинства населения. Православие хочет быть полным откровением христианства. По своему внутреннему упованию православие...