66339

Polymerase Chain Reaction (PCR)

Конспект урока

Педагогика и дидактика

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

Английский

2014-08-17

40 KB

0 чел.

Polymerase Chain Reaction (PCR)

 

PCR is a cell-free method of DNA cloning.  It is much faster and more sensitive than cell-based cloning.

Figure 9-E-1.  Polymerase Chain Reaction (PCR).  Primers are in green color.

Materials required:

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

  •  DNA polymerase (e.g., Tag polymerase) which can sustain high temperature (> 60o C)
  •  A large number of free deoxynucleotides (dNTPs)
  •  The target DNA fragment.

Procedure:

  1.  Heat denaturation at about 95oC. 
  2.  Primers bind to the denatured DNA by base pairing as the temperature is gradually cooled to about 60o C.
  3.  Extend primers with Tag polymerase. 
  4.  Repeat the above process.  The number of copies doubles in each cycle.  Typically 20 to 30 cycles are sufficient for effective DNA amplification. 

Advantages:

  •  Much faster than using vectors.
  •  Only very small amount of target DNA is needed.

Disadvantages:

  •  To synthesize primers, we need to know the sequence flanking the DNA segment of interest.
  •  Applies only to short DNA fragments, typically less than 5 kb.

 Site of Interest:

Animation of PCR - From Cold Spring Harbor Lab.

 Book Sections: 

Basic Features and Applications of PCR - From Human Molecular Genetics, 1999.

Review article: 

Real-Time PCR Technology for Cancer Diagnostics - Clinical Chemistry, 2002.

 


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

9457. Правовое регулирование занятости населения в РФ 89 KB
  ТЕМА №6: Правовое регулирование занятости населения в РФ. Основные акты и понятия в сфере занятости. Государственные органы содействия занятости. Стратегическая цель государственной политики занятости населения в РФ - это содействие полно...
9458. Трудовые договоры. Заключение ТД и оформление приема на работу. Аннулирование ТД 226 KB
  Трудовые договоры. Заключение ТД. Понятие и значение ТД. Содержание ТД. Сроки ТД. Срочные ТД. Заключение ТД и оформление приема на работу. Аннулирование ТД. Гарантии при заключении ТД. Отказ в приеме на работу. Испытани...
9459. Рабочее время и время отдыха. Понятие и виды рабочего времени. Сокращенное и неполное рабочее время (РВ) 75.5 KB
  Рабочее время и время отдыха. Понятие и виды рабочего времени. Сокращенное и неполное рабочее время (РВ). Понятие вида режима РВ. Сверхурочные работы. Понятие и виды времени отдыха. Ежегодные оплачиваемые отпуска. Понят...
9460. Оплата труда. Понятие и структура оплаты труда работникам. Методы правового регулирования заработной платы. 122.5 KB
  Оплата труда. Понятие и структура оплаты труда работникам. Методы правового регулирования заработной платы. Минимальный размер оплаты труда. Тарифная система оплаты труда. Формы и системы оплаты труда. Оплата труда рабо...
9461. Гарантийные и компенсационные выплаты 43.5 KB
  Гарантийные и компенсационные выплаты. Понятие и виды гарантийных выплат и доплат работникам. Гарантии - это средства, способы и условия, с помощью которых обеспечивается осуществление предоставленных работникам прав в области социально-т...
9462. Дисциплина труда. Внутренний трудовой распорядок. Понятия и способы установления 39.5 KB
  Дисциплина труда. Внутренний трудовой распорядок. Понятия и способы установления. Эффективность труда может быть обеспечена только при наличии четкого трудового распорядка у каждого работодателя. Внутренний трудовой распорядок или трудовой распорядо...
9463. Понятие особенной части и научные основы квалификации преступлений 55.5 KB
  ТЕМА №1: Понятие особенной части и научные основы квалификации преступлений. понятие особенной части. Единство общей и особенной частей. система особенной части уголовного законодательства и принципы ее построения. пон...
9464. Преступление против жизни 83 KB
  Тема №2: Преступление против жизни. Постановление пленума Верховного Суда о судебной практике по делам об убийстве от 27 января 1999 года понятие, система и виды преступлений против личности понятие и виды преступлений против жизни...
9465. Преступления против здоровья 81 KB
  Тема № 3: Преступления против здоровья. общая характеристика и виды. преступления против здоровья, сопряженные с причинением вреда определенной тяжести (ст. 111, 112, 113, 114, 115, 118 УК РФ) иные преступления против з...