66339

Polymerase Chain Reaction (PCR)

Конспект урока

Педагогика и дидактика

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

Английский

2014-08-17

40 KB

0 чел.

Polymerase Chain Reaction (PCR)

 

PCR is a cell-free method of DNA cloning.  It is much faster and more sensitive than cell-based cloning.

Figure 9-E-1.  Polymerase Chain Reaction (PCR).  Primers are in green color.

Materials required:

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

  •  DNA polymerase (e.g., Tag polymerase) which can sustain high temperature (> 60o C)
  •  A large number of free deoxynucleotides (dNTPs)
  •  The target DNA fragment.

Procedure:

  1.  Heat denaturation at about 95oC. 
  2.  Primers bind to the denatured DNA by base pairing as the temperature is gradually cooled to about 60o C.
  3.  Extend primers with Tag polymerase. 
  4.  Repeat the above process.  The number of copies doubles in each cycle.  Typically 20 to 30 cycles are sufficient for effective DNA amplification. 

Advantages:

  •  Much faster than using vectors.
  •  Only very small amount of target DNA is needed.

Disadvantages:

  •  To synthesize primers, we need to know the sequence flanking the DNA segment of interest.
  •  Applies only to short DNA fragments, typically less than 5 kb.

 Site of Interest:

Animation of PCR - From Cold Spring Harbor Lab.

 Book Sections: 

Basic Features and Applications of PCR - From Human Molecular Genetics, 1999.

Review article: 

Real-Time PCR Technology for Cancer Diagnostics - Clinical Chemistry, 2002.

 


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

12836. Все профессии нужны, все профессии важны 23 KB
  Все профессии нужны все профессии важны. Задачи: развитие фантазии умения находить интересное в обыденных занятиях. Период смены: после орг. периода. Возраст детей: 812 лет. Продолжительность:3040 минут. Количество детей: весь отряд. Место проведения: свободное...
12837. Пойми меня мероприятие для отряда 28 KB
  ПОЙМИ МЕНЯ Задачи: развитие ассоциативного мышления развитие речи сообразительности. Период смены: основной период. Возраст детей: все отряды. Продолжительность:1 час. Количество детей: 2 команды по12 отряда. Место провидения: площадка перед корпусом чтобы...
12838. Пара ласковых мероприятие для отрядной группы 22.5 KB
  Задачи: снять агрессию избежать конфликтных ситуаций дать возможность детям разрядиться. Период смены: 911 дней. Возраст детей: 13 и старше Продолжительность: 30 минут. Количество детей: 5 и более. Место проведения: помещение или место на природе...
12839. Сюжетно-ролевая игра «НОЧЬ ТРИФФИДОВ» 67 KB
  Сюжетноролевая игра НОЧЬ ТРИФФИДОВ Сюжетноролевая игра Ночь Триффидов создана по мотивам произведения Джона Уиндема День триффидов.Возраст участников игры колебался от 13 до 45 лет. ПОДГОТОВКА К ИГРЕ: Особенно интересна ситуация когда играть будет большое к
12840. Найди свою мероприятие для отряда 20.5 KB
  НАЙДИ СВОЮ. Задачи: сдружить и сплотить мальчиков и девочек. Период смены: вторая половина основного или заключительный период. Возраст детей: от 14 лет. Продолжительность: Количество детей: 1020 человек. Место проведения: отрядное место. Оборудование...
12841. КОРАБЛЕКРУШЕНИЕ 31 KB
  КОРАБЛЕКРУШЕНИЕ. Задачи: снять агрессию избежать конфликтных ситуаций дать возможность детям разрядиться. Период смены: 35 дней. Возраст детей: 12 и старше Продолжительность: около 1 часа. Количество детей: 1030 человек. Место проведения: помещение или место на п...
12842. Отрядное дело на знакомство 27 KB
  ОД на ЗНАКОМСТВО. Задачи: познакомить детей друг с другом выявить лидера. Период смены: первый день орг. периода. Возраст детей: все отряды. Продолжительность: 1-15 часа. Количество детей: весь отряд. Место проведения: лужайка или помещение. Оборудование: повязки...
12843. Домик для сосны отрядное дело 21 KB
  ДОМИК ДЛЯ СОСНЫ. Задача: творческое развитие детей сплотить коллектив. Период смены: 56день. Возраст детей: младший отряд. Продолжительность: 30-40 минут. Количество детей: несколько групп по любому количеству человек. Место проведения: площадка перед корпусом р
12844. День рыцарства 32 KB
  День рыцарства Период смены: основной. Возраст детей: все отряды за исключением возможно самого младшего Колво детей: участвует равное колво мальчиков и девочек. Продолжительность: 6080 мин. Оборудование: цветная бумага ножницы стулья кегли или кубики20 фломастеров