66339

Polymerase Chain Reaction (PCR)

Конспект урока

Педагогика и дидактика

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

Английский

2014-08-17

40 KB

0 чел.

Polymerase Chain Reaction (PCR)

 

PCR is a cell-free method of DNA cloning.  It is much faster and more sensitive than cell-based cloning.

Figure 9-E-1.  Polymerase Chain Reaction (PCR).  Primers are in green color.

Materials required:

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

  •  DNA polymerase (e.g., Tag polymerase) which can sustain high temperature (> 60o C)
  •  A large number of free deoxynucleotides (dNTPs)
  •  The target DNA fragment.

Procedure:

  1.  Heat denaturation at about 95oC. 
  2.  Primers bind to the denatured DNA by base pairing as the temperature is gradually cooled to about 60o C.
  3.  Extend primers with Tag polymerase. 
  4.  Repeat the above process.  The number of copies doubles in each cycle.  Typically 20 to 30 cycles are sufficient for effective DNA amplification. 

Advantages:

  •  Much faster than using vectors.
  •  Only very small amount of target DNA is needed.

Disadvantages:

  •  To synthesize primers, we need to know the sequence flanking the DNA segment of interest.
  •  Applies only to short DNA fragments, typically less than 5 kb.

 Site of Interest:

Animation of PCR - From Cold Spring Harbor Lab.

 Book Sections: 

Basic Features and Applications of PCR - From Human Molecular Genetics, 1999.

Review article: 

Real-Time PCR Technology for Cancer Diagnostics - Clinical Chemistry, 2002.

 


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

76317. Коллатерали — боковые или обходные пути кровотока 13.64 KB
  Для понимания коллатерального кровообращения необходимо знать те анастомозы которые соединяют между собой системы различных сосудов по которым устанавливается коллатеральный ток крови в случае их непроходимости. Анастомозы между ветвями крупных артериальных магистралей снабжаюших основные части тела аорта сонные артерии подключичные подвздошные артерии и др. Анастомозы между ветвями одной крупной артериальной магистрали ограничивающиеся пределами ее разветвления называются внутрисистемными. Не менее важны анастомозы между системами...
76318. Круги кровообращения. Особенности строения венозного русла печени 68.57 KB
  Большой круг кровообращения: Начало: левый желудочек сердца Аорта; оттуда кровь распространяется по всему телу. Верхняя и нижняя полая вены Правое предсердие Из правого предсердия кровь поступает в правый желудочек через трикуспидальный клапан откуда начинается малый круг кровообращения. Кровь поступает в желудочки; створки клапанов закрываются. Кровь проталкивается в аорту и лёгочный ствол.
76319. Особенности кровообращения у плода. Изменение кровообращения после рождения 51.86 KB
  Артериальная кровь к зародышу поступает из плаценты по пупочной вене в теле зародыша расположенной в серповидной связке печени. Плацентарная кровь поступает в нижнюю полую вену и смешивается с венозной кровью нижней половины тела плода. Эта смешанная кровь поступает в правое предсердие. По верхней полой вене к сердцу поступает венозная кровь от головы шеи и верхних конечностей.
76320. Микроциркуляторное русло, его звонья и особенности строения. Сосудистая сеть почки 6.22 KB
  Сосудистая сеть почки звенья микроциркуляторного русла: артериальное капиллярное 3венозное Артериальное звено представлено артериолами и прекапиллярами артериолы имеют 3 стенки: интимамедиа и адвентиция у прекапилляров в месте отхождения от артериол есть прекапиллярный сфинктер Капиллярное звено капилляры с непрерывной эндотелиальной выстилкой капилляры фенестрированныев почечном тельцеэндокринных органах слмзистой жктсосудистом сплетении мозга капилляры синусоидныев печениселезенкекостном мозе и коре надпочечников Венозное...
76321. Верхняя полая вена, ее корни, притоки, анастомозы с нижней полой и воротной венами 76.63 KB
  zygos Кавакавальные анастомозы 1на переднейстенке груднойи брюшной полостей анастомозируют v.cv inferior 2на боковой стенке грудной и брюшной полостей анастомозируют vv.lumbles 4венозные сплетения позвоночного столба plexus venosi vertebrlis interni в эпидуральной пространстве и plexus venosi vertebrlis externi расположенного на передней и задней поверхности позвоночного столба Портокавальные анастомозы 1на передней брюшной стенке анастомозируют v.prumbilicles 2в стенке прямой кишки анастомозируют v.