66339

Polymerase Chain Reaction (PCR)

Конспект урока

Педагогика и дидактика

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

Английский

2014-08-17

40 KB

0 чел.

Polymerase Chain Reaction (PCR)

 

PCR is a cell-free method of DNA cloning.  It is much faster and more sensitive than cell-based cloning.

Figure 9-E-1.  Polymerase Chain Reaction (PCR).  Primers are in green color.

Materials required:

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

  •  DNA polymerase (e.g., Tag polymerase) which can sustain high temperature (> 60o C)
  •  A large number of free deoxynucleotides (dNTPs)
  •  The target DNA fragment.

Procedure:

  1.  Heat denaturation at about 95oC. 
  2.  Primers bind to the denatured DNA by base pairing as the temperature is gradually cooled to about 60o C.
  3.  Extend primers with Tag polymerase. 
  4.  Repeat the above process.  The number of copies doubles in each cycle.  Typically 20 to 30 cycles are sufficient for effective DNA amplification. 

Advantages:

  •  Much faster than using vectors.
  •  Only very small amount of target DNA is needed.

Disadvantages:

  •  To synthesize primers, we need to know the sequence flanking the DNA segment of interest.
  •  Applies only to short DNA fragments, typically less than 5 kb.

 Site of Interest:

Animation of PCR - From Cold Spring Harbor Lab.

 Book Sections: 

Basic Features and Applications of PCR - From Human Molecular Genetics, 1999.

Review article: 

Real-Time PCR Technology for Cancer Diagnostics - Clinical Chemistry, 2002.

 


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

17068. MS Word. Створення документа 187.18 KB
  Практична робота № 4 Тема: MS Word. Створення документа. Мета: Уміти підготувати програмуредактор до роботи і створити нескладний текстовий документ. Хід роботи 1. Запустіть текстовий редактор і розгляньте його меню. Запуск рекомендується виконати за допомогою я...
17069. MS Excel. Структура таблиці. Типи даних. Консолідація даних. Задача «Товарний чек». Задача «Рахунок у банку» 100.5 KB
  Практична робота № 5 Тема: MS Excel. Структура таблиці. Типи даних. Консолідація даних. Задача Товарний чек. Задача Рахунок у банку. Мета:Уміти налаштовувати параметри робочого аркуша вводити текстові числові дані і формули в таблицю редагувати дані форматувати д
17070. MS Access. Створення бази даних у вигляді декількох таблиць 282 KB
  Практична робота № 7 Тема: MS Access. Створення бази даних у вигляді декількох таблиць. Мета: Уміти створювати структуру таблиці модифікувати її вводити дані в таблицю. План Основні поняття про бази даних. Типи і властивості полів. Створення таблиц...
17071. Стиснення інформації 290.5 KB
  Практична робота №3 Тема: Стиснення інформації Мета: набути навички роботи з архівними файлами. Обладнання: персональний компютер з встановленою операційною системою Windows а також програмою архіватором WinRar. Призначення: ознайомитися з засобами архівації файлі
17072. Робота з контролюючими і діагностичними програмами 558 KB
  Практична робота №2 Тема: Робота з контролюючими і діагностичними програмами. Мета:Навчитися використовувати службову програму Индикатор ресурсов для контролю за станом системних ресурсів навчитися настроювати і виконувати часткову і повну перевірку HDD. Облад...
17073. Каскады предварительного усиления. Особенности работы и методика анализа каскадов предварительного усиления 1005 KB
  Каскады предварительного усиления предназначены для усиления напряжения или тока источника сигнала (источник сигнала может быть генератором напряжения или тока). В результате такого усиления значение напряжения или тока источника сигнала получается достаточным для нормальной работы оконечного (выходного) каскада
17074. Неорганическая и органическая химия 36.82 MB
  Неорганическая химия изучает химические элементы и образуемые ими простые и сложные вещества (кроме органических соединений углерода, которые изучаются органической химией)
17075. Побудова багаточлена Лагранжа. Складання програми 177 KB
  Лабороторна робота №4 Тема. Побудова багаточлена Лагранжа. Складання програми. Мета. Навчитися будувати багаточлен Лагранжа скласти програму. Обладнання. Лист формату А4 ручка ПК програмне забезпечення С. Хід роботи Правила ТБ Теоретичні відомос
17076. Знаходження значення інтеграла по формулам Ньютона-Котеса 29.5 KB
  Лабораторна робота №78 Тема. Знаходження значення інтеграла по формулам НьютонаКотеса. Мета. Навчитися знаходити значення інтеграла по формулам НьютонаКотеса. Скласти програму. Устаткування: папір формату А4 ПК С. Хід роботи Правила техніки безпеки Т