66339

Polymerase Chain Reaction (PCR)

Конспект урока

Педагогика и дидактика

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

Английский

2014-08-17

40 KB

0 чел.

Polymerase Chain Reaction (PCR)

 

PCR is a cell-free method of DNA cloning.  It is much faster and more sensitive than cell-based cloning.

Figure 9-E-1.  Polymerase Chain Reaction (PCR).  Primers are in green color.

Materials required:

Two primers, each about 20 bases long with sequence complementary to the sequence immediately adjacent to the DNA segment of interest.

  •  DNA polymerase (e.g., Tag polymerase) which can sustain high temperature (> 60o C)
  •  A large number of free deoxynucleotides (dNTPs)
  •  The target DNA fragment.

Procedure:

  1.  Heat denaturation at about 95oC. 
  2.  Primers bind to the denatured DNA by base pairing as the temperature is gradually cooled to about 60o C.
  3.  Extend primers with Tag polymerase. 
  4.  Repeat the above process.  The number of copies doubles in each cycle.  Typically 20 to 30 cycles are sufficient for effective DNA amplification. 

Advantages:

  •  Much faster than using vectors.
  •  Only very small amount of target DNA is needed.

Disadvantages:

  •  To synthesize primers, we need to know the sequence flanking the DNA segment of interest.
  •  Applies only to short DNA fragments, typically less than 5 kb.

 Site of Interest:

Animation of PCR - From Cold Spring Harbor Lab.

 Book Sections: 

Basic Features and Applications of PCR - From Human Molecular Genetics, 1999.

Review article: 

Real-Time PCR Technology for Cancer Diagnostics - Clinical Chemistry, 2002.

 


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

14506. База знаний экспертных систем 83.5 KB
  База знаний экспертных систем Обязательной составляющей любой экспертной системы является база знаний. Как уже говорилось ранее под знанием можно понимать обобщенную и формализованную информацию о свойствах и законах предметной области с помощью которой реализую
14507. МЕТОДЫ ПРИБРЕТЕНИЯ ЗНАНИЙ 84.5 KB
  МЕТОДЫ ПРИБРЕТЕНИЯ ЗНАНИЙ Приобретение знаний это процесс передачи знаний и опыта по решению определенного класса задач от источника информации в базу знаний ЭС. В настоящее время существует абсолютное большинство баз знаний БЗн основывается на опыте экспертов. ...
14508. Системы автоматизации принятия решений. САПР 866 KB
  Случайные события. Определение вероятности. Определить вероятность достоверного и невозможного события Случайное событие это любой факт который может появиться или не появиться при проведении данного опыта. При многократном повтор
14509. Базы данных. Основы современных баз данных 463.5 KB
  Основы современных баз данных Предметом курса являются системы управления базами данных СУБД. Основное назначение данного курса систематическое введение в идеи и методы используемые в современных реляционных системах управления базами данных. С начала развития вы
14510. Системы представления знаний 230.64 KB
  Лекция 2: Системы представления знаний Традиционно системы представления знаний СПЗ для ИС используют следующие основные виды моделей: фреймы сценарии исчисления предикатов системы продукций семантические сети нечеткие множества. Рассмотрим эти модели подробно. ...
14511. Экспертные системы. Классификация экспертных систем 81.89 KB
  Экспертные системы. В нашей стране современное состояние разработок в области экспертных систем можно охарактеризовать как стадию всевозрастающего интереса среди широких слоев экономистов финансистов преподавателей инженеров медиков психологов програм
14512. ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЕ И ЭЛЕКТРООБОРУДОВАНИЕ ЦЕХА 487 KB
  МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К КУРСОВОМУ ПРОЕКТУ ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЕ И ЭЛЕКТРООБОРУДОВАНИЕ ЦЕХА ВВЕДЕНИЕ Настоящие методические указания являются руководящими материалами для студентов приступающих к выполнению курсового проекта и знакомят их с объемом проектных ра
14513. ПРАВОСУБ’ЄКТНІСТЬ ЄВРОПЕЙСЬКОГО СОЮЗУ 18.7 KB
  Правосубєктність Європейського Союзу. Договір про ЄС раніше не містив спеціального положення що надавало Союзу правосубєктність в тому числі право мати права та обовязки згідно з міжнародним публічним правом. Відповідно для реалізації завдань і повноважень Союзу...
14514. ТЕОРИЯ УПРАВЛЕНИЯ 1.2 MB
  ТЕОРИЯ УПРАВЛЕНИЯ В учебном пособии рассматрены сущность и содержание теории управления и включает курс лекций задания на контрольные работы методические рекомендации рекомендации по выполнению курсового проекта краткий глоссарий основных терминов. Учебное