67936

Реакции иммунитета: реакция связывания комплемента, реакция лизиса

Практическая работа

Медицина и ветеринария

Цель: Овладение техникой постановки реакции связывания комплемента и реакции лизиса. Реакции иммунитета. Реакции иммунитета используются при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей.

Русский

2014-09-16

85 KB

6 чел.

Методическое указание для студентов к практическому занятию 17

Тема: Реакции иммунитета:

  реакция связывания комплемента, реакция лизиса.

Цель: Овладение техникой постановки реакции связывания

  комплемента и реакции лизиса.

Модуль1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция.

 Иммунитет.

Содержательный модуль 9. Реакции иммунитета.

Тема занятия 17. Реакция связывания комплемента. Реакция лизиса.

Актуальность темы.

Реакции иммунитета используются при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические исследования (от лат. serum – сыворотка + logos – учение) – методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген-антитело в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.

К основным серологическим реакциям относятся реакции агглютинации, преципитации, лизиса, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный). Перечисленные реакции отличаются по регистрируемому эффекту и технике постановки, однако все они основаны на реакции взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и антигенов.

Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к антителам, находящимся в комплексе с антигеном.

 Реакцию связывания комплемента (РСК) проводят в две фазы:

1-я фаза – инкубация смеси искомого антигена (или антитела) с диагностической сывороткой (или антигеном-диагностикумом) и комплементом;

2-я фаза – индикаторная – определение наличия в смеси свободного комплемента добавлением гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к эритроцитам барана. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание им комплемента, во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов отсутствует (реакция положительная). При отрицательной реакции, если антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во 2-й фазе реакции он присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело гемолитической сыворотки, вызывая гемолиз.

РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифилиса (реакция Вассермана).

 Реакцией лизиса называется растворение антигена, соединенного с антителами, в присутствии комплемента. Лизины (антитела, участвующие в реакции) проявляют действие только в присутствии комплемента.

Специфические антитела взаимодействуют с различными клетками, в том числе бактериями и простейшими, что приводит к активации системы комплемента по классическому пути и последующему лизису клеток. Среди них известны реакции вибриолиза и реакции гемолиза.

Большинство микроорганизмов, за исключением холерного вибриона и трепонем, устойчивы к литическому действию антител. Поэтому реакция лизиса не нашла широкого применения в лабораторной практике.

Реакцию лизиса используют в качестве индикаторной системы в реакции связывания комплемента.

Для постановки реакции лизиса и РСК используют комплемент, который содержится в сыворотке крови морских свинок.

Конкретные цели:

  •  Объяснить ценность реакции связывания комплемента (РСК) в диагностике инфекционных болезней.
  •  Объяснить ингредиенты, необходимые для постановки РСК.
  •  Объяснить механизм РСК.
  •  Объяснить учет РСК.
  •  Отметить особенности реакции Вассермана при сифилисе и РСК в модификации Физе при риккетсиозах).
  •  Объяснить реакцию бактериолиза (феномен Исаева-Пфайфера).

Уметь:

  1.  Поставить РСК.
  2.  Пояснить механизм РСК.
  3.  Провести учет реакции.
  4.  Пояснить феномен Исаева-Пфейфера.

Теоретические вопросы:

1. Сущность РСК. Необходимость использования индикаторной системы.

2. Характеристика и подготовка ингредиентов РСК.

3. Механизм РСК.

4. Практическое использование РСК, реакции бактериолиза.

 

Практические задачи, которые выполняются на занятии:

  1.  Титрация комплемента для РСК с помощью реакции гемолиза (титр комплемента, рабочая доза).
  2.  Постановка РСК.
  3.  Учет РСК.
  4.  Изучение реакции бактериолиза Исаева-Пфейфера (по таблице).
  5.  Оформление протокола.

Литература:

1. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и имму-нологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.

2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиоло-гия.- М.: Медицина, 1998.- 336с.

3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.

4. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммуноло-гия и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.

5. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.

6. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.

2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.

3. БМЭ, Т. 1,2,7.

Краткие методические указания для работы на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа заключается в:

а) постановке реакции связывания комплемента, оценке результатов реакции;

б) разборе реакции бактериолиза Исаева-пфайфера (по таблице).

После анализа результатов реакций, записывают в протокол.

В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.


Технологическая карта проведения практического занятия

№ п\п

Этапы

Время в мин.

Способы обучения

Оборудования

Место проведения

1.

Проверка и кор-рекция выходно-го уровня подго-товки к занятию

20

Тестовые задания выходного уровня

Тесты по теме

Учебная комната

2.

Самостоятель-ная работа

35’

Граф

логичной структуры

Таблицы. Штативы, пробирки. Ингредиенты для постановки РСК и реакции лизиса, термостат.

3.

Самоконтроль и коррекция усвоенного материала

15’

Целевые обучающие программы

4.

Тестовый контроль

15’

Тесты

5.

Анализ резуль-татов работы

5

Алгоритм лабораторной работы:

1. Титрация комплемента для РСК с помощью реакции гемолиза (титр комп-лемента, рабочая доза).

2. Постановка РСК.

3. Оценка результатов РСК.

4. Изучение бактериолиза на примере реакции Исаева-Пфейфера (по таб-лице).

5. Запись схем реакций и выводов в протокол.

6. Оформление протокола.

7. Тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.


Целевые учебные задания:

1. Гемолитическая сыворотка против эритроцитов барана необходима для работы в лаборатории, где проводится серологическая диагностика инфекционных болезней. Для чего ее используют?

А. Для определения видовой принадлежности эритроцитов в судебно-медицинской экспертизе

В. Для реакции непрямой гемагглютинации

С. Для диагностики гемолитической болезни новорожденных при резус-конфликте

D. Для реакции торможения гемагглютинации

Е. Как компонент гемолитической системы в реакции связывания комплемента

2. Для серологической диагностики сифилиса с использованием реакции Вассермана врач-лаборант подготовил следующие реактивы: кардиолипиновый антиген; спиртовой экстракт липидов с сердечной мышцы быка с холестерином; антиген из трепонем, разрушенных ультразвуком; гемолитическую систему; изотонический раствор натрия хлорида; исследуемые сыворотки. Какой еще компонент необходим для постановки этой реакции?

А. Эритроциты барана.

В. Антиглобулиновая сыворотка.

С. Комплемент.

D. Живые трепонемы.

Е. Диагностическая преципитирующая сыворотка.

3. В женскую консультацию пришла женщина на 8 неделе беременности. При обследовании у нее взяли кровь для проверки на наличие специфических антител к трепонемам. Какие из перечисленных ниже серологических реакций могут быть использованы для выявления антител к трепонемам?

А. Кожная проба Манту.

В. Реакция Райта.

С. Реакция Видаля.

D. Кожная проба Бюрне.

Е. Реакция Вассермана.

4. В дермато-венерологическом диспансере в целях диагностики сифилиса применяется реакция Вассермана. К какому из приведенных типов реакций она принадлежит?

А. РА.

В. РП.

С. РСК.

D. РН.

Е. РГА.

5. При добавлении гемолитической (индикаторной) системы к пробиркам с бактериальной системой в последних произошел гемолиз. О какой реакции идет речь в данном случае?

А. РГА.

В. РА.

С. РСК.

D. РН.

Е. РП.

6. При постановке РСК в пробирке с исследуемой сывороткой больного в системе образовался комплекс антиген-антитело-комплемент, не определяемый визуально. Каким образом можно выявить этот комплекс антиген-антитело-комплемент?

А. Используя индикаторную тест-систему.

В. Заразив кролика.

С. Добавив 3%-ую взвесь эритроцитов.

D. Добавив гемолитическую сыворотку.

Е. Добавив физраствор.

7. При постановке РСК с сывороткой больного с подозрением на хроническую гонорею, она оказалась положительной на 4 креста во всех разведениях сыворотки (от 1:5 до 1: 160). Как можно определить визуально феномен положительной РСК на 4 креста?

А. Наличие осадка и бесцветной надосадочной жидкости.

В. Образование пленки.

С. Образование «зонтика».

D. Образование «пуговки».

Е. Образование хлопьев.

8. Известно, что на каждый возбудитель болезни в организме человека образуются антитела: агглютинины, преципитины, опсонины, лизины, комплементсвязывающие и другие. В какой серологической реакции можно выявить комплементсвязывающие?

А. РА на стекле.

В. РП в агаре.

С. РСК.

D. РГА.

Е. РНГА.

9. После проникновения в организм бактерии фагоцитируются макро-фагами. Какую роль играют макрофаги в кооперации иммунокомпетентных клеток на первом этапе формирования иммунного ответа?

A. Активируют NK-клетки

B. Активируют Т-киллеры

C. Обеспечивают процессинг и презентацию антигена Т-хелперам

D. Продуцируют иммуноглобулины

E. Обеспечивают процессинг и презентацию антигена Т-киллерам

10. У больной, 37 лет, на протяжении года периодически возникали инфекционные заболевания бактериального генеза. Их течение было длительным, ремиссии – кратковременными. При обследовании обнаружена гипогаммаглобулинемия. Нарушение функций каких клеток может быть прямой ее причиной?

A. Нейтрофилов

B. В-лимфоцитов

C. Фагоцитов

D. Макрофагов

E. Т-лимфоцитов

11. Наиболее важным центральным органом иммунной системы человека есть тимус, к которому относиться часть стволовых клеток крови для их дальнейшего дозревания. Какие клетки иммунной системы человека дифференцируются в этом органе?

A. Т-лимфоциты

B. Плазматические

C. Макрофаги

D. В-лимфоциты

E. Микрофаги


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

19080. Оптические методы исследования наноструктур. Основы фотолюминесценции Фотолюминесценция квантово-размерных структур 141.5 KB
  Лекция 9 Оптические методы исследования наноструктур. Основы фотолюминесценции Фотолюминесценция квантоворазмерных структур 1. Понятия. При взаимодействии электромагнитного излучения с веществом возникает излучение отличающееся по направлению распростране
19081. Проектирование БД «Школа». Создание таблиц. Проектирование модели реальной БД на примере создания БД «Школа» 94.55 MB
  Мы будем создавать работающую БД со всеми основными объектами: таблицами, формами, запросами и отчетами, используя всем нам хорошо знакомую предметную область – школу. Школа – это сложная структура со множеством объектов. Перечислим эти объекты: ученики, учителя, классы, администрация, изучаемые предметы, оценки по этим предметам, библиотека, столовая, кружки, родительский комитет, зарплата учителей, школьная мебель и оборудование, ремонт помещений
19082. Теория автоэлектронной эмиссии 221 KB
  ЛЕКЦИЯ 1011 Теория автоэлектронной эмиссии. АВТОЭЛЕКТРОННАЯ ЭМИССИЯ Под электронной эмиссией понимается испускание электронов как правило в вакуум из твердого тела или какойлибо другой среды. Тело из которого испускаются электроны называется катод. Электроны
19083. Принципы сканирующей зондовой микроскопии. Сканирующий туннельный микроскоп. Атомно-силовой микроскоп 440 KB
  ТЕМА 1213 Принципы сканирующей зондовой микроскопии. Сканирующий туннельный микроскоп Атомносиловой микроскоп Сравнительная характеристика различных методов микроскопического исследования поверхности твердых тел Мет...
19084. Электронная микроскопия 465 KB
  Лекция 14. Электронная микроскопия ЭЛЕКТРОННЫЙ МИКРОСКОП прибор который позволяет получать сильно увеличенное изображение объектов используя для их освещения электроны. Электронный микроскоп ЭМ дает возможность видеть детали слишком мелкие чтобы их мог разреш...
19085. Нанотрубки и родственные структуры 309.5 KB
  Лекция 15. Нанотрубки и родственные структуры. Историческая справка Первооткрыватели Углеродные наноструктуры: фуллерены нанотрубки графен 1985 г. Открытие фуллеренов С60 Авторы: H.W.Kroto J.R.Heath S.C.O'Brien R.F.Curl R.E.Smalley Организации: Rice Quantum Inst. and Departments of Chemistry and Electrical...
19086. Применения наноструктур 2.59 MB
  Лекция 16. Применения наноструктур. Настоящая лекция посвящена рассмотрению конкретных примеров применении различных наноструктур. СВЕТОИЗЛУЧАЮЩИЕ НАНОТРУБКИ В ТЕЛИВИЗОРАХ И ДИСПЛЕЯХ. Углеродным нанотрубкам уже найдено немало применений в том числе в качестве эл...
19087. Общая постановка задачи дискретизации 155 KB
  Лекция № 1. Введение. Общая постановка задачи дискретизации. Цели и задачи курса: данный курс предназначен для освоения базовых понятий теории дискретных сигналов и основных принципов построения систем цифровой обработки сигналов. Курс знакомит с теоретическими о
19088. Выбор частоты дискретизации с помощью функций отсчетов 187.5 KB
  Лекция № 2. Выбор частоты дискретизации с помощью функций отсчетов. Теорема Котельникова: произвольный сигнал непрерывный спектр которого не содержит частот выше может быть полностью восстановлен если известны отсчетные значения этого сигнала взятые через равн