67936

Реакции иммунитета: реакция связывания комплемента, реакция лизиса

Практическая работа

Медицина и ветеринария

Цель: Овладение техникой постановки реакции связывания комплемента и реакции лизиса. Реакции иммунитета. Реакции иммунитета используются при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей.

Русский

2014-09-16

85 KB

3 чел.

Методическое указание для студентов к практическому занятию 17

Тема: Реакции иммунитета:

  реакция связывания комплемента, реакция лизиса.

Цель: Овладение техникой постановки реакции связывания

  комплемента и реакции лизиса.

Модуль1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция.

 Иммунитет.

Содержательный модуль 9. Реакции иммунитета.

Тема занятия 17. Реакция связывания комплемента. Реакция лизиса.

Актуальность темы.

Реакции иммунитета используются при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические исследования (от лат. serum – сыворотка + logos – учение) – методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген-антитело в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.

К основным серологическим реакциям относятся реакции агглютинации, преципитации, лизиса, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный). Перечисленные реакции отличаются по регистрируемому эффекту и технике постановки, однако все они основаны на реакции взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и антигенов.

Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к антителам, находящимся в комплексе с антигеном.

 Реакцию связывания комплемента (РСК) проводят в две фазы:

1-я фаза – инкубация смеси искомого антигена (или антитела) с диагностической сывороткой (или антигеном-диагностикумом) и комплементом;

2-я фаза – индикаторная – определение наличия в смеси свободного комплемента добавлением гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к эритроцитам барана. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание им комплемента, во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов отсутствует (реакция положительная). При отрицательной реакции, если антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во 2-й фазе реакции он присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело гемолитической сыворотки, вызывая гемолиз.

РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифилиса (реакция Вассермана).

 Реакцией лизиса называется растворение антигена, соединенного с антителами, в присутствии комплемента. Лизины (антитела, участвующие в реакции) проявляют действие только в присутствии комплемента.

Специфические антитела взаимодействуют с различными клетками, в том числе бактериями и простейшими, что приводит к активации системы комплемента по классическому пути и последующему лизису клеток. Среди них известны реакции вибриолиза и реакции гемолиза.

Большинство микроорганизмов, за исключением холерного вибриона и трепонем, устойчивы к литическому действию антител. Поэтому реакция лизиса не нашла широкого применения в лабораторной практике.

Реакцию лизиса используют в качестве индикаторной системы в реакции связывания комплемента.

Для постановки реакции лизиса и РСК используют комплемент, который содержится в сыворотке крови морских свинок.

Конкретные цели:

  •  Объяснить ценность реакции связывания комплемента (РСК) в диагностике инфекционных болезней.
  •  Объяснить ингредиенты, необходимые для постановки РСК.
  •  Объяснить механизм РСК.
  •  Объяснить учет РСК.
  •  Отметить особенности реакции Вассермана при сифилисе и РСК в модификации Физе при риккетсиозах).
  •  Объяснить реакцию бактериолиза (феномен Исаева-Пфайфера).

Уметь:

  1.  Поставить РСК.
  2.  Пояснить механизм РСК.
  3.  Провести учет реакции.
  4.  Пояснить феномен Исаева-Пфейфера.

Теоретические вопросы:

1. Сущность РСК. Необходимость использования индикаторной системы.

2. Характеристика и подготовка ингредиентов РСК.

3. Механизм РСК.

4. Практическое использование РСК, реакции бактериолиза.

 

Практические задачи, которые выполняются на занятии:

  1.  Титрация комплемента для РСК с помощью реакции гемолиза (титр комплемента, рабочая доза).
  2.  Постановка РСК.
  3.  Учет РСК.
  4.  Изучение реакции бактериолиза Исаева-Пфейфера (по таблице).
  5.  Оформление протокола.

Литература:

1. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и имму-нологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.

2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиоло-гия.- М.: Медицина, 1998.- 336с.

3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.

4. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммуноло-гия и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.

5. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.

6. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.

2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.

3. БМЭ, Т. 1,2,7.

Краткие методические указания для работы на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа заключается в:

а) постановке реакции связывания комплемента, оценке результатов реакции;

б) разборе реакции бактериолиза Исаева-пфайфера (по таблице).

После анализа результатов реакций, записывают в протокол.

В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.


Технологическая карта проведения практического занятия

№ п\п

Этапы

Время в мин.

Способы обучения

Оборудования

Место проведения

1.

Проверка и кор-рекция выходно-го уровня подго-товки к занятию

20

Тестовые задания выходного уровня

Тесты по теме

Учебная комната

2.

Самостоятель-ная работа

35’

Граф

логичной структуры

Таблицы. Штативы, пробирки. Ингредиенты для постановки РСК и реакции лизиса, термостат.

3.

Самоконтроль и коррекция усвоенного материала

15’

Целевые обучающие программы

4.

Тестовый контроль

15’

Тесты

5.

Анализ резуль-татов работы

5

Алгоритм лабораторной работы:

1. Титрация комплемента для РСК с помощью реакции гемолиза (титр комп-лемента, рабочая доза).

2. Постановка РСК.

3. Оценка результатов РСК.

4. Изучение бактериолиза на примере реакции Исаева-Пфейфера (по таб-лице).

5. Запись схем реакций и выводов в протокол.

6. Оформление протокола.

7. Тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.


Целевые учебные задания:

1. Гемолитическая сыворотка против эритроцитов барана необходима для работы в лаборатории, где проводится серологическая диагностика инфекционных болезней. Для чего ее используют?

А. Для определения видовой принадлежности эритроцитов в судебно-медицинской экспертизе

В. Для реакции непрямой гемагглютинации

С. Для диагностики гемолитической болезни новорожденных при резус-конфликте

D. Для реакции торможения гемагглютинации

Е. Как компонент гемолитической системы в реакции связывания комплемента

2. Для серологической диагностики сифилиса с использованием реакции Вассермана врач-лаборант подготовил следующие реактивы: кардиолипиновый антиген; спиртовой экстракт липидов с сердечной мышцы быка с холестерином; антиген из трепонем, разрушенных ультразвуком; гемолитическую систему; изотонический раствор натрия хлорида; исследуемые сыворотки. Какой еще компонент необходим для постановки этой реакции?

А. Эритроциты барана.

В. Антиглобулиновая сыворотка.

С. Комплемент.

D. Живые трепонемы.

Е. Диагностическая преципитирующая сыворотка.

3. В женскую консультацию пришла женщина на 8 неделе беременности. При обследовании у нее взяли кровь для проверки на наличие специфических антител к трепонемам. Какие из перечисленных ниже серологических реакций могут быть использованы для выявления антител к трепонемам?

А. Кожная проба Манту.

В. Реакция Райта.

С. Реакция Видаля.

D. Кожная проба Бюрне.

Е. Реакция Вассермана.

4. В дермато-венерологическом диспансере в целях диагностики сифилиса применяется реакция Вассермана. К какому из приведенных типов реакций она принадлежит?

А. РА.

В. РП.

С. РСК.

D. РН.

Е. РГА.

5. При добавлении гемолитической (индикаторной) системы к пробиркам с бактериальной системой в последних произошел гемолиз. О какой реакции идет речь в данном случае?

А. РГА.

В. РА.

С. РСК.

D. РН.

Е. РП.

6. При постановке РСК в пробирке с исследуемой сывороткой больного в системе образовался комплекс антиген-антитело-комплемент, не определяемый визуально. Каким образом можно выявить этот комплекс антиген-антитело-комплемент?

А. Используя индикаторную тест-систему.

В. Заразив кролика.

С. Добавив 3%-ую взвесь эритроцитов.

D. Добавив гемолитическую сыворотку.

Е. Добавив физраствор.

7. При постановке РСК с сывороткой больного с подозрением на хроническую гонорею, она оказалась положительной на 4 креста во всех разведениях сыворотки (от 1:5 до 1: 160). Как можно определить визуально феномен положительной РСК на 4 креста?

А. Наличие осадка и бесцветной надосадочной жидкости.

В. Образование пленки.

С. Образование «зонтика».

D. Образование «пуговки».

Е. Образование хлопьев.

8. Известно, что на каждый возбудитель болезни в организме человека образуются антитела: агглютинины, преципитины, опсонины, лизины, комплементсвязывающие и другие. В какой серологической реакции можно выявить комплементсвязывающие?

А. РА на стекле.

В. РП в агаре.

С. РСК.

D. РГА.

Е. РНГА.

9. После проникновения в организм бактерии фагоцитируются макро-фагами. Какую роль играют макрофаги в кооперации иммунокомпетентных клеток на первом этапе формирования иммунного ответа?

A. Активируют NK-клетки

B. Активируют Т-киллеры

C. Обеспечивают процессинг и презентацию антигена Т-хелперам

D. Продуцируют иммуноглобулины

E. Обеспечивают процессинг и презентацию антигена Т-киллерам

10. У больной, 37 лет, на протяжении года периодически возникали инфекционные заболевания бактериального генеза. Их течение было длительным, ремиссии – кратковременными. При обследовании обнаружена гипогаммаглобулинемия. Нарушение функций каких клеток может быть прямой ее причиной?

A. Нейтрофилов

B. В-лимфоцитов

C. Фагоцитов

D. Макрофагов

E. Т-лимфоцитов

11. Наиболее важным центральным органом иммунной системы человека есть тимус, к которому относиться часть стволовых клеток крови для их дальнейшего дозревания. Какие клетки иммунной системы человека дифференцируются в этом органе?

A. Т-лимфоциты

B. Плазматические

C. Макрофаги

D. В-лимфоциты

E. Микрофаги