67936

Реакции иммунитета: реакция связывания комплемента, реакция лизиса

Практическая работа

Медицина и ветеринария

Цель: Овладение техникой постановки реакции связывания комплемента и реакции лизиса. Реакции иммунитета. Реакции иммунитета используются при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей.

Русский

2014-09-16

85 KB

6 чел.

Методическое указание для студентов к практическому занятию 17

Тема: Реакции иммунитета:

  реакция связывания комплемента, реакция лизиса.

Цель: Овладение техникой постановки реакции связывания

  комплемента и реакции лизиса.

Модуль1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция.

 Иммунитет.

Содержательный модуль 9. Реакции иммунитета.

Тема занятия 17. Реакция связывания комплемента. Реакция лизиса.

Актуальность темы.

Реакции иммунитета используются при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические исследования (от лат. serum – сыворотка + logos – учение) – методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген-антитело в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.

К основным серологическим реакциям относятся реакции агглютинации, преципитации, лизиса, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный). Перечисленные реакции отличаются по регистрируемому эффекту и технике постановки, однако все они основаны на реакции взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и антигенов.

Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к антителам, находящимся в комплексе с антигеном.

 Реакцию связывания комплемента (РСК) проводят в две фазы:

1-я фаза – инкубация смеси искомого антигена (или антитела) с диагностической сывороткой (или антигеном-диагностикумом) и комплементом;

2-я фаза – индикаторная – определение наличия в смеси свободного комплемента добавлением гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к эритроцитам барана. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание им комплемента, во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов отсутствует (реакция положительная). При отрицательной реакции, если антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во 2-й фазе реакции он присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело гемолитической сыворотки, вызывая гемолиз.

РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифилиса (реакция Вассермана).

 Реакцией лизиса называется растворение антигена, соединенного с антителами, в присутствии комплемента. Лизины (антитела, участвующие в реакции) проявляют действие только в присутствии комплемента.

Специфические антитела взаимодействуют с различными клетками, в том числе бактериями и простейшими, что приводит к активации системы комплемента по классическому пути и последующему лизису клеток. Среди них известны реакции вибриолиза и реакции гемолиза.

Большинство микроорганизмов, за исключением холерного вибриона и трепонем, устойчивы к литическому действию антител. Поэтому реакция лизиса не нашла широкого применения в лабораторной практике.

Реакцию лизиса используют в качестве индикаторной системы в реакции связывания комплемента.

Для постановки реакции лизиса и РСК используют комплемент, который содержится в сыворотке крови морских свинок.

Конкретные цели:

  •  Объяснить ценность реакции связывания комплемента (РСК) в диагностике инфекционных болезней.
  •  Объяснить ингредиенты, необходимые для постановки РСК.
  •  Объяснить механизм РСК.
  •  Объяснить учет РСК.
  •  Отметить особенности реакции Вассермана при сифилисе и РСК в модификации Физе при риккетсиозах).
  •  Объяснить реакцию бактериолиза (феномен Исаева-Пфайфера).

Уметь:

  1.  Поставить РСК.
  2.  Пояснить механизм РСК.
  3.  Провести учет реакции.
  4.  Пояснить феномен Исаева-Пфейфера.

Теоретические вопросы:

1. Сущность РСК. Необходимость использования индикаторной системы.

2. Характеристика и подготовка ингредиентов РСК.

3. Механизм РСК.

4. Практическое использование РСК, реакции бактериолиза.

 

Практические задачи, которые выполняются на занятии:

  1.  Титрация комплемента для РСК с помощью реакции гемолиза (титр комплемента, рабочая доза).
  2.  Постановка РСК.
  3.  Учет РСК.
  4.  Изучение реакции бактериолиза Исаева-Пфейфера (по таблице).
  5.  Оформление протокола.

Литература:

1. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и имму-нологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.

2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиоло-гия.- М.: Медицина, 1998.- 336с.

3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.

4. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммуноло-гия и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.

5. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.

6. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.

2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.

3. БМЭ, Т. 1,2,7.

Краткие методические указания для работы на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа заключается в:

а) постановке реакции связывания комплемента, оценке результатов реакции;

б) разборе реакции бактериолиза Исаева-пфайфера (по таблице).

После анализа результатов реакций, записывают в протокол.

В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.


Технологическая карта проведения практического занятия

№ п\п

Этапы

Время в мин.

Способы обучения

Оборудования

Место проведения

1.

Проверка и кор-рекция выходно-го уровня подго-товки к занятию

20

Тестовые задания выходного уровня

Тесты по теме

Учебная комната

2.

Самостоятель-ная работа

35’

Граф

логичной структуры

Таблицы. Штативы, пробирки. Ингредиенты для постановки РСК и реакции лизиса, термостат.

3.

Самоконтроль и коррекция усвоенного материала

15’

Целевые обучающие программы

4.

Тестовый контроль

15’

Тесты

5.

Анализ резуль-татов работы

5

Алгоритм лабораторной работы:

1. Титрация комплемента для РСК с помощью реакции гемолиза (титр комп-лемента, рабочая доза).

2. Постановка РСК.

3. Оценка результатов РСК.

4. Изучение бактериолиза на примере реакции Исаева-Пфейфера (по таб-лице).

5. Запись схем реакций и выводов в протокол.

6. Оформление протокола.

7. Тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.


Целевые учебные задания:

1. Гемолитическая сыворотка против эритроцитов барана необходима для работы в лаборатории, где проводится серологическая диагностика инфекционных болезней. Для чего ее используют?

А. Для определения видовой принадлежности эритроцитов в судебно-медицинской экспертизе

В. Для реакции непрямой гемагглютинации

С. Для диагностики гемолитической болезни новорожденных при резус-конфликте

D. Для реакции торможения гемагглютинации

Е. Как компонент гемолитической системы в реакции связывания комплемента

2. Для серологической диагностики сифилиса с использованием реакции Вассермана врач-лаборант подготовил следующие реактивы: кардиолипиновый антиген; спиртовой экстракт липидов с сердечной мышцы быка с холестерином; антиген из трепонем, разрушенных ультразвуком; гемолитическую систему; изотонический раствор натрия хлорида; исследуемые сыворотки. Какой еще компонент необходим для постановки этой реакции?

А. Эритроциты барана.

В. Антиглобулиновая сыворотка.

С. Комплемент.

D. Живые трепонемы.

Е. Диагностическая преципитирующая сыворотка.

3. В женскую консультацию пришла женщина на 8 неделе беременности. При обследовании у нее взяли кровь для проверки на наличие специфических антител к трепонемам. Какие из перечисленных ниже серологических реакций могут быть использованы для выявления антител к трепонемам?

А. Кожная проба Манту.

В. Реакция Райта.

С. Реакция Видаля.

D. Кожная проба Бюрне.

Е. Реакция Вассермана.

4. В дермато-венерологическом диспансере в целях диагностики сифилиса применяется реакция Вассермана. К какому из приведенных типов реакций она принадлежит?

А. РА.

В. РП.

С. РСК.

D. РН.

Е. РГА.

5. При добавлении гемолитической (индикаторной) системы к пробиркам с бактериальной системой в последних произошел гемолиз. О какой реакции идет речь в данном случае?

А. РГА.

В. РА.

С. РСК.

D. РН.

Е. РП.

6. При постановке РСК в пробирке с исследуемой сывороткой больного в системе образовался комплекс антиген-антитело-комплемент, не определяемый визуально. Каким образом можно выявить этот комплекс антиген-антитело-комплемент?

А. Используя индикаторную тест-систему.

В. Заразив кролика.

С. Добавив 3%-ую взвесь эритроцитов.

D. Добавив гемолитическую сыворотку.

Е. Добавив физраствор.

7. При постановке РСК с сывороткой больного с подозрением на хроническую гонорею, она оказалась положительной на 4 креста во всех разведениях сыворотки (от 1:5 до 1: 160). Как можно определить визуально феномен положительной РСК на 4 креста?

А. Наличие осадка и бесцветной надосадочной жидкости.

В. Образование пленки.

С. Образование «зонтика».

D. Образование «пуговки».

Е. Образование хлопьев.

8. Известно, что на каждый возбудитель болезни в организме человека образуются антитела: агглютинины, преципитины, опсонины, лизины, комплементсвязывающие и другие. В какой серологической реакции можно выявить комплементсвязывающие?

А. РА на стекле.

В. РП в агаре.

С. РСК.

D. РГА.

Е. РНГА.

9. После проникновения в организм бактерии фагоцитируются макро-фагами. Какую роль играют макрофаги в кооперации иммунокомпетентных клеток на первом этапе формирования иммунного ответа?

A. Активируют NK-клетки

B. Активируют Т-киллеры

C. Обеспечивают процессинг и презентацию антигена Т-хелперам

D. Продуцируют иммуноглобулины

E. Обеспечивают процессинг и презентацию антигена Т-киллерам

10. У больной, 37 лет, на протяжении года периодически возникали инфекционные заболевания бактериального генеза. Их течение было длительным, ремиссии – кратковременными. При обследовании обнаружена гипогаммаглобулинемия. Нарушение функций каких клеток может быть прямой ее причиной?

A. Нейтрофилов

B. В-лимфоцитов

C. Фагоцитов

D. Макрофагов

E. Т-лимфоцитов

11. Наиболее важным центральным органом иммунной системы человека есть тимус, к которому относиться часть стволовых клеток крови для их дальнейшего дозревания. Какие клетки иммунной системы человека дифференцируются в этом органе?

A. Т-лимфоциты

B. Плазматические

C. Макрофаги

D. В-лимфоциты

E. Микрофаги


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

72579. ИНСТИТУТ ГОСУДАРСТВЕННОЙ РЕГИСТРАЦИИ ПРАВА СОБСТВЕННОСТИ В ФЕДЕРАЛЬНОМ И РЕГИОНАЛЬНОМ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВЕ 203.5 KB
  В России институт государственной регистрации появился только в постсоветский период (дореволюционный проект Вотчинного Устава, аналога государственной регистрации, так и не был принят). Для сравнения: в европейских странах государственная регистрация как действующая система применялась уже в 1860-х гг.
72580. ПОНЯТИЕ И ПРАВОВЫЕ ОСНОВАНИЯ РЕАЛИЗАЦИИ ПРАВА АПЕЛЛЯЦИОННОГО ОБЖАЛОВАНИЯ РЕШЕНИЯ АРБИТРАЖНОГО СУДА 171 KB
  В суде первой инстанции арбитражного процесса право на судебную защиту реализуется в форме подачи иска либо заявления. Достаточно продолжительное время в науке гражданского и арбитражного процесса в качестве оснований возникновения права на предъявление иска рассматривалась система предпосылок.
72581. ОСНОВАНИЯ ПРЕКРАЩЕНИЯ ГРАЖДАНСТВА РОССИИ И ЗАРУБЕЖНЫХ ГОСУДАРСТВ 165 KB
  Обстоятельства служащие основаниями прекращения гражданства определяются внутренним законодательством каждого государства а в некоторой части и международными договорами. Однако в законодательстве иных государств вопросы прекращения гражданства регулируются довольно типично что позволяет...
72582. ПРОЦЕССУАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ВЫСШЕГО АРБИТРАЖНОГО СУДА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 173.5 KB
  Согласно части 1 статьи 11 Федерального конституционного закона от 28 апреля 1995 г. № 1ФКЗ Об арбитражных судах в Российской Федерации Высший Арбитражный Суд действует в составе1: Пленума Высшего Арбитражного Суда; Президиума Высшего Арбитражного Суда; судебной коллегии по рассмотрению...
72583. ОБЕСПЕЧЕНИЕ ПРАВА ЧЕЛОВЕКА НА ЖИЗНЬ В РОССИЙСКОМ ТЕКУЩЕМ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВЕ 160.5 KB
  Сущность права на социальное обеспечение по возрасту в случае болезни инвалидности потери кормильца для воспитания детей и в иных случаях установленных законом состоит в том что государство гарантирует предоставление достаточных средств гражданам в силу объективных обстоятельств лишенным...
72584. Педагогико-правовые аспекты совершенствования повышения квалификации сотрудников Федеральной миграционной службы 271 KB
  Разрешение проблем образования и повышения квалификации и переподготовки кадров, в частности, безусловно, относится к области первоочередных задач, стоящих перед государством и обществом. Модернизация образования — это одна из составляющих развития человеческого капитала.
72586. Государственный контроль за ограничивающими конкуренцию соглашениями хозяйствующих субъектов 15.99 KB
  Механизм государственного контроля за ограничивающими конкуренцию соглашениями хозяйствующих субъектов предусматривает две процедуры: рассмотрение антимонопольным органом представляемых хозяйствующими субъектами имеющими намерение достичь соглашения заявлений о проверке соответствия проекта...
72587. Виды юридической ответственности за нарушение антимонопольного законодательства 13.28 KB
  Виды юридической ответственности за нарушение антимонопольного законодательства За виновные противоправные деяния нарушающие антимонопольное законодательство субъекты антимонопольного воздействия несут юридическую ответственность.