67943

Грамотрицательные кокки (менингококки и гонококки)

Практическая работа

Медицина и ветеринария

Отдел Gracilicutes, семейство Neisseriaceae, род нейссерий (Neisseria). Все виды семейства являются обитателями слизистых оболочек теплокровных. Общие признаки бактерий этой группы: способны расти в присутствии кислорода, представлены неподвижными диплококками и короткими палочками...

Русский

2014-09-16

115.5 KB

16 чел.

Методическое указание для студентов к практическому занятию № 25

Тема: Грамотрицательные кокки (менингококки и гонококки).

Цель: Освоение методов микробиологической диагностики заболеваний, вызванных менингококками и гонококками.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема занятия 25. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызванных менингококками и гонококками.

Актуальность темы. Отдел Gracilicutes, семейство Neisseriaceae, род нейссерий (Neisseria). Все виды семейства являются обитателями слизистых оболочек теплокровных. Общие признаки бактерий этой группы:

  •  способны расти в присутствии кислорода,
  •  представлены неподвижными диплококками и короткими палочками, отрицательно окрашивающимися по Грамму,
  •  спор не образуют.

 Нейссерии – грамотрицательные аэробные кокки, включающие 8 видов, наиболее патогенные для человека виды нейссерий – Neisseria meningitidis (менингококки) и Neisseria gonorrhoeae (гонококки). 7 видов встречается у человека, из них 55 видов являются представителями нормофлоры носоглотки и верхних дыхательных путей.

 Морфология. Грамотрицательные неспорообразующие кокки, неподвижны, образуют пары или тетрады. Некоторые виды имеют капсулу и микроворсинки.

 Культуральные свойства. Аэробы, хемоорганотрофы. патогенные виды прихотливы к условиям культивирования, не растут на обычных питательных средах. Виды, обитающие в носоглотке, образуют желтый пигмент на плотных средах с добавлением куриного желтка.

 Ферментативная активность низкая, особенно у патогенных видов.

 Антигенная структура – все виды имеют полисахаридный соматический О-антиген; штаммы, образующие капсулу, также имеют капсульный антиген.

 Факторы патогенности: капсула, пили, эндотоксин, поверхностные белки наружной мембраны.

 Устойчивость в окружающей среде низкая, чувствительны к действию обычно применяемых антисептиков и дезинфектантов.

Менингококк. Neisseria menigitidis

Менингококковая инфекция — инфекционная болезнь, вызываемая Neisseria meningitidis, проявления которой варьируют от бессимптомного носительства до тяжелейших менингеальных форм. Возбудитель впервые подробно изучен в 1887 г. А.Ваксельбаумом.

Таксономия. Возбудитель относится к отделу Gracilicutes, семейству Neisseriaceae, роду Neisseria.

Морфология и тинкториальные свойства. Менингококки — мелкие диплококки. Характерно расположение их в виде пары кофейных зерен, обращенных вогнутыми поверхностями друг к другу. Менингококки неподвижны, спор не образуют, грамотрицательны, капсула непостоянна, имеют пили.

 Культивирование. Аэробы культивируют на средах, содержащих нормальную сыворотку либо дефибринированную кровь барана или лошади, а также на селективной среде с ристомицином. Повышенная концентрация СО2 стимулирует рост менингококков.

 Антигенная структура. По капсульным антигенам менингококки делятся на основные серогруппы А, В, С, D и дополнительные. По антигенам клеточной стенки подразделяют менингококки на серовары (1, 2, 3 т.д.). Во время эпидемических вспышек обычно циркулируют менингококки группы А. Токсин менингококков представляет собой липополисахарид клеточной стенки. Его количество определяет тяжесть заболевания.

 Резистентность. Менингококки малоустойчивы в окружающей среде, чувствительны к высушиванию и охлаждению. Чувствительны к пенициллинам, тетрациклинам, эритромицину, устойчивы к ристомицину и сульфамидам.

 Патогенез и клиническая картина. Человек – единственный естественный хозяин менингококков. Носоглотка является входными воротами инфекции. Здесь бактерии могут длительно существовать, не вызывая воспаления (носительство), но иногла становятся причиной назофарингита. Из носоглотки они могут попадать в кровяное русло (менингококкемия) с развитием лихорадки и геморрагической сыпью. Наиболее частым осложнением менингококкемии является менингит или менингоэнцефалит (воспаление мозговых оболочек).

 Иммунитет. Постинфекционный иммунитет при генерализованных формах болезни стойкий, напряженный.

 Микробиологическая диагностика. Для лабораторной диагностики исследую кровь, спинномозговую жидкость, слизь с носоглоточных тампонов. При микроскопическом исследовании осадка центрифугированной спинномозговой жидкости и мазков из зева видны типичные нейссерии внутри нейтрофилов или внеклеточно. Посев материала производят сразу после взятия на кровяной агар (шоколадный агар), агар с ристомицином (или линкомицином), среду Мартена – агар с антибиотиками (ВКН – ванкомицин, колистин, нистатин). Инкубацию проводят в атмосфере, содержащей 5% углекислого газа.

 Лечение. В качестве этиотропной терапии используют антибиотики: пенициллин, левомицетин, рифампицин.

 Профилактика. Разработана менингококковая химическая полисахаридная вакцина, которая проходит апробацию.

Гонококк. Neisseria gonorrhoeae

Гонорея – инфекционное венерическое заболевание, вызываемое Neisseria gonorrhoeae, характеризующееся гнойным воспалением слизистых оболочек органов мочеполовой системы.

 Возбудитель гонореи – гонококк, открытый А. Нейссером в 1879 г., относится к семейству Neisseriaceae, отделу Gracilicutes; вызывает также острое гнойное воспаление слизистой оболочки глаза – бленнорею.

 Морфология и культивирование. Гонококк – грамотрицательный диплококк бобовидной формы, неподвижен, спор не имеет, капсулы не образует. В гнойном отделяемом типичное расположение гонококков внутри лейкоцитов (незавершенный фагоцитоз).

Электронная микроскопия. 

Характерная, используемая как важный критерий диагностики форма гонококка - диплококк (парный кокк), реже - тетракокк. Связана с особенностями деления гонококка. Диплококк сравнивают с кофейными зёрнами или почками, обращёнными вогнутыми сторонами друг к другу.

Гонококк – аэроб, выращивается на питательных средах, содержащих сыворотку, кровь или асцитическую жидкость. Оптимальные условия для культивирования – t=370C и повышенная концентрация углекислого газа. Гонококк обладает слабой сахаролитической активностью.

 Антигенная структура и факторы патогенности. Антигенная структура изучена мало. Фактором патогенности является токсическая субстанция клеточной стенки – липополисахарид.

 Резистентность. Гонококк отличается высокой чувствительностью к высушиванию, дезинфицирующим средствам, температуре; чувствителен к бензилпенициллину, эритромицину, тетрациклину, доксициклину, цефалоспоринам, бесиптолу.

Патогенез. Чаще всего гонорейная инфекция проявляется воспалением слизистых оболочек, сопровождающееся гнойными или слизисто-гнойными выделениями из мочеиспускательного канала (уретры) у мужчин, из уретры и шейки матки у женщин. Вызванная нейссериями инфекция у женщин протекает более стёрто, несмотря на это, приводя к серьёзным осложнениям. Так, при обследовании бесплодных женщин не столь уж редко обнаруживается скрыто протекающая гонорейная инфекция.

Источником заражения чаще являются больные с хроническими, малосимптомными формами гонореи, которые не считают имеющиеся у них симптомы свидетельством венерического заболевания.

 Микробиологическая диагностика. Основной метод диагностики – бактериоскопия препаратов гнойного отделемого, окрашенных по Грамму и метиленовым синим. При отсутствии результатов бактериоскопии используют бактериологический метод.

Характерные признаки гонореи при бактериоскопии ("в мазке"): внутриклеточно расположенные, грамотрицательные, диплококки, причём каждый из кокков имеет бобовидную форму.

 Бактериоскопия весьма эффективна при острой гонорее, при качественной подготовке больного к исследованию, правильном взятии материала. В случае отрицательного результата показано повторное исследование в течение 3 последующих дней с использованием провокации. Из каждого очага для бактериоскопии берут мазки на два стекла: один для ориентировочного исследования после окраски метиленовым синим, другой - для окраски по Граму, что позволяет дифференцировать грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы.

 Культуральный метод ("посев") применяется при неоднократном получении отрицательного результата при бактериоскопическом исследовании при подозрении на гонорею, наличии в мазке подозрительных на гонококк микроорганизмов, установлении излеченности гонореи ("контроль излеченности"), подтверждение гонорейного процесса у детей и обследование больных трихомониазом после лечения.

В последнее время возрастает значение молекулярно-биологических методов для диагностики гонореи. Особенно ценен метод ПЦР для выявления хронической, стёртой, вялотекущей, лечёной гонореи, когда меняются свойства гонококка и, вызывая патологические процессы в организме, он тем не менее "отказывается" расти на питательных средах, и тем самым, "выдавать" себя. В последнее время ПЦР-диагностику стали использовать для идентификации штаммов микроорганизмов с генетической устойчивостью к антибиотикам (тетрациклину, эритромицину), что представляет серьёзную эпидемиологическую проблему. Официально разрешено применение метода ПЦР в выявлении гонококков, хламидий, микоплазм, уреаплазм  и т.д.

 Лечение – сочетают назначение антибактериальных препаратов (желательно, с учётом чувствительности гонококков к ним, что определяется по результатам "посева") и средств, стимулирующих иммунитет. Лечение беременных проводят в стационаре с учётом влияния антибиотиков на плод. При хронической гонорее вводят убитую гонококковую вакцину с целью иммунотерапии.

 Профилактика. Специфическая профилактика отсутствует.

Конкретные цели:

Ознакомиться с биологическими свойствами и классификацией вида Neisseria menigitidis.

Изучит методы микробиологической диагностики менингококковых заболеваний и бактерионосительства.

Ознайомиться с биологическими свойствами вида Neisseria gonorrhoeae и их патогенностью для человека.

Описывать патогенез острой и хронической гонореи.

Выучить методы микробиологической диагностикик гонореи.

Ознакомиться с методами профилактики и специальной терапии гонореи и бленнореи.

Трактовать результаты микроскопического исследования нативных препаратов.

Уметь:

Проводить дифференциацию менингококков и грамотрицательных диплококков носоглотки.

Забирать материал для исследования от больных с заболеваниями, вызванными менингококками и гонококками.

Выделять чистые культуры нейссерий.

Трактовать результаты микроскопического исследования нативных препаратов.

Трактовать результаты серологического исследования сыворотки больных на гонорею (РСК).

Теоретические вопросы:

Семейство Neisseriaceae. Род нессерий (Neisseria).

  •  Биологические свойства.
  •  Классификация.
  •  Эволюция патогенности.

Менингококки (Neisseria menigitidis).

  •  Биологические свойства, классификация.
  •  Патогенез и микробиологическая диагностика менингококковых заболеваний и бактерионосительства. 
  •  Дифференциация менингококков и грамотрицательных диплококков носоглотки.

Гонококки (Neisseria gonorrhoeae).

  •  Биологические свойства.
  •  Патогенность для человека, изменчивость.
  •  острая и хроническая гонорея.
  •  Иммунитет. Микробиологическая диагностика гонореи.
  •  Профилактика и специальная терапия гонореи и бленнореи.

 Практические задания, используемые на занятии:

Микроскопия микропрепаратов из чистых культур нейссерий, их анализ и зарисовывание в протокол.

Микроскопия демонстрационных микропрепаратов: мазок из уретры больного гонореей (окраска метиленовым синим), мазок из уретры больного гонореей (окраска по грамму), менингококк в спинно-мозговой жидкости (окраска по Грамму).

Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.

Оформление протокола.

Литература:

1. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и имму-нологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.

2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиоло-гия.- М.: Медицина, 1998.- 336с.

3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.

4. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммуноло-гия и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.

5. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.

6. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.

2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.

3. БМЭ, Т. 1,2,7.

Краткие методические указания для работы на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения методов микробиологической диагностики менингококковой инфекции. Студенты изучают схему выделения чистой культуры менингококка и микроскопируют готовые зафиксированные мазки из чистой культуры менингококка.

Дальше студенты изучают схему выделения чистой культуры гонококка, знакомятся с правилами забора материала от больных гонореей для проведения прямой микроскопии исследуемого материала и микроскопируют готовые зафиксированные мазки гноя из уретры больных.

Потом студенты зарисовывают микропрепараты и дают необходимые пояснения.

В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных препаратов и их зарисовывание.

В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

№ п\п

Этапы

Время в мин.

Способы обучения

Оборудования

Место проведения

1.

Проверка и кор-рекция выходно-го уровня подго-товки к занятию

20

Тестовые задания выходного уровня

Таблицы, атлас

Учебная комната

2.

Самостоятель-ная работа

35’

Граф

логичной структуры

Иммерсионный мик-роскоп, краски, предметное стекло, бактериологические петли, посевы чистых культур бактерий.

3.

Самоконтроль и коррекция усвоенного материала

15’

Целевые обучающие программы

4.

Тестовый контроль

15’

Тесты

5.

Анализ резуль-татов работы

5


Целевые учебные задания:

  1.  При бактериоскопическом исследовании слизи с задней стенки носоглотки выделены грамотрицательные кокки, напоминающие кофейные зерна и расположенные парами или тетрадами. Назовите возбудитель, который был изолирован бактериологом?

A. Acinetobacter calcoaceticum.

В. Staphylococcus aureus.

С. Neisseria gonorrhoeae.

D. Moraxella lacunata.

Е. Neisseria meningitidis.

  1.  При исследовании гнойных выделений с шейки матки выявлено в них грамнегативные диплококки, расположенные как в лейкоцитах, так и вне них. Назовите возбудителя гнойного воспаления шейки матки в этом случае.

А. Chlamidia trachomatis.

В. Neisseria gonorroeae.

С. Trichomonas vaginalis.

D. Haemophilus vaginalis.

Е. Toxoplasma gondii.

  1.  При бактериологическом исследовании материала от больного с подозрением на хроническую гонорею, роста микроорганизмов на специальных питательных средах не обнаружено. Какие методы диагностики следует применить, чтобы подтвердить или опровергнуть диагноз хронической гонореи?

Поставить РСК, аллергическую пробу с гонококковым аллергеном.

Определить титр антител в сыворотке крови больного, используя РПГА

Биологический метод

Иммунную электронную микроскопию

Повторить посев исследуемого материала на дифференциально-диагностические среды

  1.  Из гноя, взятого из уретры больного с подозрением на острую гонорею, приготовлен мазок и окрашен по Граму. При микроскопии его обнаружено большое количество кокков. Какие тинкториальные свойства увиденных микроорганизмов и характер их расположения в препарате будут свидетельствовать в пользу предполагаемого диагноза?

А. Грамположительные кокки, расположенные внутри и вне лейкоцитов

В. Грамотрицательные диплококки, расположенные внутри и вне лейкоцитов

С. Грамположительные тетракокки, расположенные вне лейкоцитов

D. Грамотрицательные тетракокки

Е. Грамположительные кокки, расположенные в виде цепочек

  1.  На специальной питательной среде после посева гнойного выделения из уретры появились нежные голубые колонии. При микроскопии препаратов в них выявлены грамотрицательные бобовидные диплококки. Возбудителем какой болезни они являются?

А. Уреаплазмоза

В. Сифилиса

С. Хламидиоза

D. Гарднерелеза

Е. Гонореи

  1.  При посеве осадка спинномозговой жидкости, полученной у ребенка с диагнозом «эпидемический цереброспинальный менингит» на специальной среде выросли нежные колонии с голубоватым оттенком. Микроорганизмы, которые их образовали, были идентифицированы как нейссерии. Какой тест необходимо использовать для определения патогенности выделенных у этого больного нейссерий?

А. Реакция гемолиза

В. Лецитовителазная активность

С. Реакция плазмокоагуляции

D. Оксидазная реакция

Е. Реакция ферментации манита в анаэробных условиях

  1.  От больного ребенка цереброспинальным менингитом получили спинномозговую жидкость мутного характера, содержащую большое количество лейкоцитов. Какую из серологических реакций следует провести для экспресс-диагностики заболевания?

A. Реакцию преципитации

B. Реакцию агглютинации

C. Реакцию связывания комплемента

D. Реакцию гемагглютинации

E. Реакцию нейтрализации

  1.  У больного ребенка с явлениями гнойного кератоконъюнктивита врач-офтальмолог заподозрил бленнорею (гонорейный конъюнктивит). Какими методами лабораторной диагностики следует воспользоваться для подтверждения диагноза?

A. Микроскопическим и бактериологическим

B. Серологическим и аллергическим

C. Биологическим и методом фагодиагностики

D. Биологическим и аллергическим

E. Микроскопическим и серологическим

  1.  Больному ребенку врач поставил диагноз «менингококковый назофарингит». Какой метод лабораторной диагностики наиболее рациональный для подтверждения диагноза?

A. Бактериологический

B. Биологический

C. Серологический

D. Микроскопический

E. Аллергический

  1.  У больного С., который лечится в кожно-венерологическом диспансере по поводу хронической гонореи, диагностировали острую гонорею. Какой вид инфекции развился у больного в этом случае?

A. Реинфекция

B. Суперинфекция

C. Вторичная инфекция

D. Персистирующая инфекция

E. Инапарантная инфекция

  1.  В детском саду провели обследование детей и персонала в целях выявления менингококкового носительства. Подберите метод микробиологического исследования.

A. Бактериологический

B. Аллергический

C. Бактериоскопический

D. Биологический

E. Серологический

  1.  При бактериоскопии осадка спинномозговой жидкости больного с подозрением на менингит были выявлены грамотрицательные диплококки. Для подтверждения диагноза осадок спинномозговой жидкости посеяли на питательную среду. Какая среда из перечисленных была использована?

A. Сывороточный агар

B. МПА с линкомицином

C. Кровяной агар с пенициллином

D. Кровяной агар с линкомицином

E. МПА с ристомицином


Алгоритм лабораторной работы:

1. Проверка уровня подготовки студентов к занятию: решение исходных тестов.

2. Изучение методов микробиологической диагностики менингококковой инфекции – схемы выделения чистой культуры менингококка.

3. Микроскопия готовых зафиксированных мазков из чистой культуры менингококка.

4. Изучение схемы выделения чистой культуры гонококка.

5. Ознакомление с правилами забора материала от больных гонореей для проведения прямой микроскопии исследуемого материала.

6. Микроскопия готовых зафиксированных мазков гноя из уретры больного.

7. Зарисовывание микропрепаратов в протокол.

8. Анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.

9. Оформление протокола.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

59466. Європейські держави: минуле і сучасне 45.5 KB
  А точніше модель європейської цивілізації. Згадайте: Які риси і цінності притаманні цьому типу цивілізації Але Європа зовсім не зразу виробила цю модель. Вони вважали що це були темні страшні віки після загибелі античної цивілізації. Епоха зародження індустріальної цивілізації ХVІ кінець ХVІІІ ст.
59467. Захист прав людини у Європі та світі 70.5 KB
  Всі люди створені рівними і наділені Творцем певними невід’ємними правами до яких належать життя свобода і прагнення до щастя€. Документ 2 З Декларації прав людини і громадянина. забуття прав людини і неповага до них є єдиними причинами суспільних негараздів і вад уряду.
59468. Європейський союз 149.5 KB
  Будівництво Європи без кордонів почалося тоді коли у 1951 році шість держав підписали в Парижі угоду про заснування Європейського обєднання вугілля і сталі Бельгія Італія Люксембург Нідерланди Німеччина та Франція продовжується сьогодні і триватиме ще не одне десятиліття.
59469. Європейська культурна спадщина 51 KB
  Якими міжнародними документами в Європі регулюються проблеми культурної спадщини – Чому потрібно зберігати культурноісторичну спадщину ІІ. У 1991 році Рада Європи офіційно запровадила щорічні вересневі Дні європейської спадщини...
59470. Релігія в житті сучасного європейця 102.5 KB
  Релігія явище дуже складне і має соціальний характер тобто воно виникло в суспільстві цілком закономірно й існує разом з ним. Слово релігія походить від латинського €œreligio що означає €œзв’язок.
59471. Релігійні, етнічні, мовні конфлікти та їх вирішення у європейському домі 83.5 KB
  На цьому уроці Ви дізнаєтесь: Про причинно-наслідкові зв’язки конфліктів у Європі. Які заходи для врегулювання та попередження конфліктів провадяться в європейських державах. Чи існує загроза виникненню етнічних конфліктів в Україні В яких саме регіонах.
59472. Освіта. Європейський вимір 88.5 KB
  Які особливості освіти європейського виміру. Основи європейської освіти було закладено в часи Античності вони збереглися в епоху Середньовіччя були розвинуті в новий час. Освіта в Європі освіта для Європи Формування індустріального та інформаційного суспільства...
59473. Українці – співтворці європейської культури 411 KB
  До списку Світової культурної спадщини було включено собор Софії Київської Києво-Печерську Лавру та історичний центр міста Львова. Собор Святої Софії у Києві Красуня-церква біла наречена Що загубилась на стежках небесних...
59474. Проблеми війни і миру та їхній прояв в історії Європи 41 KB
  Свого часу Леонардо да Вінчі зробив досить невтішний прогноз щодо розвитку людства: €œНа землі завжди будуть відбуватися руйнівні війни Ні на землі ні під нею ні під водою не залишиться нічого не ушкодженого. Та серед цієї безлічі воєн гігантськими вершинами височать дві...