67947

Методы микробиологической диагностики холеры

Практическая работа

Медицина и ветеринария

Возбудителями холеры – острого инфекционного заболевания с тенденцией к широкому распространению характеризующегося симптомами тяжелого гастроэнтерита с резким обезвоживанием и тяжелой интоксикацией являются два биовара Vibrio cholere: биовар cholere и биовар eltor.

Русский

2014-09-16

92.5 KB

9 чел.

Методические указания для студентов к практическому занятию № 29

Тема: Методы микробиологической диагностики холеры

Цель: Изучить методы лабораторной диагностики холеры

Модуль 2: Специальная, клиническая и экологическая микробиология

Содержательный модуль 10. Патогеные прокариоты и эукариоты

Тема практического занятия 29: Методы микробиологической диагностики холеры.

Актуальнсть темы: Возбудителями холеры – острого инфекционного заболевания с тенденцией к широкому распространению, характеризующегося симптомами тяжелого гастроэнтерита с резким обезвоживанием и тяжелой интоксикацией, являются два биовара Vibrio cholerae: биовар cholerae и биовар eltor. В начале 1993 года вспышка холеры в юго-восточной Азии была вызвана вибрионами неизвестной серогруппы, обозначенных как серовар О139 (Бенгал).

Вид V.cholerae имеет 4 биовара: cholerae, eltor, proteus (в. Мечникова), albensis (светящийся вибрион). Холеру у человека вызывают биовары cholerae и eltor. Вибрион Мечникова вызывает гастроэнтерит. V.cholerae albensis обнаруживается в воде, испражнениях и желчи человека.

 Морфология: Холерные вибрионы имеют вид подвижных изогнутых или прямых палочек. Подвижность обусловлена полярным жгутиком. Грамотрицательны, спор и капсул не образуют.

 Культуральные свойства: Аероб, хорошо растет при tº-37ºС на простых питательных средах, но требователен к рН среды, растет на щелочных средах (8,5-9,0). На 1% пептонной воде образует легкое помутнение среды и пленку, на щелочном агаре - прозрачные колонии с ровным краем. Микроб не требователен к питательным средам, растет быстро: на 1% пептонной воде рост в виде пленки появляется через 4-6 часов.

 Биохимические свойства: Холерные вибрионы активны в биохимическом отношении. Ферментация маннозы, сахарозы и арабинозы  (триада Хейберга) имеет диагностическое значение; холерные вибрионы V.cholerae и V.eltor разлагают только маннозу и сахарозу и не расщепляют арабинозы. На основании биохимических и биологических различий холерные вибрионы разделяют на 2 биовара: классический (V.cholerae asiaticae) и Эль-Тор (V.cholerae eltor).

 Антигенная структура. У холерных вибрионов выделяют термостабильные О- и термолабильные Н-антигены. По О-антигену вибрионы разделяются на несколько групп. Возбудители классической холеры и холеры Эль-Тор объединяются в 01 серогруппу, и несмотря на существующие биохимические различия, при исследовании на холеру обязательно проводят типирование О1 антисывороткой. О-антиген О1 группы холерных вибрионов неоднороден , включает три компонента –А,В,С, разные сочетания которых образуют серовары: Огава, Инаба, Гикошима.

Дифференциальные признаки возбудителей холеры

 п/п

Признак

V.cholerae asiaticae

V.cholerae eltor

1.

Рост на среде с полимиксином В

-

+

2.

Гемолиз эритроцитов барана

-

+

3.

Агглютинация куриных эритроцитов

-

+

4.

Чувствительность к классическому монофагу С-4 по Мукерджи

+

-

5.

Чувствительность к монофагу Эль-Тор

-

+

 Токсигенность и патогенность. Холерный вибрион обладает двумя типами токсинов – эндотоксином и экзотоксином или энтеротоксином. Эндотоксин- термостабильный, ЛПС (липополисахарид) клеточной стенки, индуцирует синтез виброцидных АТ. Основная роль в развитии симптомов холеры (энтерит с обильным водянистым стулом и последующим развитием обезвоживания организма) принадлежит энтеротоксину или холерогену. Энтеротоксин – термостабильный белок, резистентен к действию протеолитических ферментов. Состоит из двух белковых компонентов – А и В, компонент В практически нетоксичен, обладает способностью соединяться со специфическим рецептором мембраны эпителиальных клеток тонкого кишечника. Рецептором, связывающим компонент В, является ганглиозид. Компонент А – токсичен, вызывает активацию аденилатциклазы, что ведет к увеличению цАМФ (циклический АМФ) и соответственно к гиперсекреции солей и выходу из клеток воды, т.е. к возникновению одного из характерных симптомов холеры.

Единственный природный резервуар – больные и бактерионосители; основной путь передачи – фекально-оральный, реже - контактный. Факторы передачи – пищевые продукты, вода. Определенную роль играют мухи, способные переносить возбудитель с испражнений на пищевые продукты.

 Патогенез. Попав в организм человека, большая часть вибрионов погибает под действием кислой среды желудка. Лишь небольшая часть их достигает тонкой кишки. В ответ на проникновение бактерий эпителиальные клетки выделяют щелочной секрет, насыщенный желчью – идеальная среда для размножения возбудителя.

 Клинические проявления холеры обуславливает токсинообразование. Основная роль принадлежит энтеротоксину который активизирует аденилатциклазу слизистой кишечника, что способствует увеличению количества цАМФ и выходу солей и воды в просвет кишечника. В зависимости от степени интоксикации, симптоматика может иметь характер гастроэнтерита. В тяжелых случаях, у больных развивается холерный алгид на фоне нарушения электролитного баланса .

 Материал для исследования. Испражнения, рвотные массы, желчь, секционный материал (фрагменты тонкой кишки), сточные воды, вода, пищевые продукты, мухи.

 Лабораторная диагностика. Основу составляют выделения и идентификация возбудителя. Но так как холера особо-опасная инфекция, то первоначально из испражнений готовят мазки. Одни мазки красят по Грамму, другие обрабатывают специфической люминисцентной сывороткой для РИФ. На этом этапе исследования получают первичный ориентировочный ответ. РИФ применяют для ускоренной (экспресс) диагностики. Для проведения бактериологического исследования материал рекомендуется засевать одновременно на 1% пептонную воду и на щелочной агар. Через 12-24 часа отбирают круглые прозрачные с ровными краями, голубоватые в проходящем свете колонии, пересевают на лактозо-сахарную среду, ставят РА с О1 холерной сывороткой. Одновременно проводят дифференциацию от других вибрионов по биохимическим свойствам. Для эпидемиологического

исследования у культур определяют ее фаговар с набором специфических фагов.

 Профилактика. Для специфической иммунопрофилактики были предложены различные вакцины, в том числе из убитых штаммов Инаба и Огава, холероген-анатоксин для подкожного применения и энтеральная химическая бивалентная вакцина, состоящая из анатоксина и соматических антигенов серотипов Инаба и Огава. Продолжительность поствакцинального иммунитета составляет не более 6-8 мес., поэтому прививки проводят только по эпидемиологическим показаниям. В очагах холеры проводится антибиотикопрофилактика тетрациклином.

 Конкретные цели:

  1.  Изучить морфологию, культуральные и биохимические свойства холерного вибриона.
  2.  Знать холерные вибрионы патогенные для человека.
  3.  Изучить патогенез, клинику холеры.
  4.  Знать какой материал необходимо забирать от больного холерой для исследования.
  5.  Изучить методы лабораторной диагностики холеры.
  6.  Знать биологические препараты для диагностики профилактики и лечения холеры.

Уметь:

  1.  Готовить мазки из культуры холерного вибриона, красить по Граму, описывать его морфологию.
  2.  Дифференцировать патогенные вибрионы от непатогенних по антигенной структуре и биохимическим свойствам.
  3.  Дифференцировать биовары классического вибриона и вибриона Эль-Тор.
  4.  Делать забор материала от больного холерой.
  5.  Проводить экспресс-диагностику и выделять чистую культуру вибриона.
  6.  Трактовать результаты лабораторных исследований.

Теоретические вопросы:

  1.  Характеристика рода Vibrio: морфология, патогенные представители.
  2.  Культуральные особенности вибрионов.
  3.  Биохимические особенности вибрионов. Дифференциация патогенных и непатогенных вибрионов.
  4.  Антигенная структура. Классификация вибрионов по антигенной структуре.
  5.  Токсинообразование. Патогенность. Механизм действия экзотоксина.
  6.  Источник инфекции. Пути заражения холерой. Патогенез. Материал для исследования.
  7.  Лабораторная диагностика холеры. Экспресс-диагностика, выделение чистой культуры.
  8.  Специфическая профилактика холеры.
  9.  Лечение холеры.

Практические задания, которые выполняются на занятии.

  1.  Приготовление мазков из чистой культуры вибриона. Окраска по Граму, микроскопия, зарисовка в протокол.
  2.  Посев испражнений и рвотных масс „больного” на 1% пептонную щелочную воду и щелочной агар.
  3.  Изучение посевов 1% пептонной щелочной воде и щелочном агаре:

а) описание признаков роста;

б) приготовление мазков, окраска по Граму, микроскопия

в) постановка РА на стекле с О1 холерной сывороткой для изучения патогенности вибриона

  1.  Изучение биологических препаратов для диагностики, профилактики и лечения холеры.
  2.  Оформление протокола.

 Литература:

  1.  Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.
  2.  Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.
  3.  Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.
  4.  Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.
  5.  Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.
  6.  Конспект лекции.

 Дополнительная литература:

  1.  Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.
  2.  Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.
  3.  БМЭ, Т. 1,2,7.

Короткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов по данной теме.

Самостоятельная работа начинается с изучения схемы лабораторной диагностики холеры.

Далее студенты выполняют практическую работу, которая состоит из изучения морфологи вибриона в готовом зафиксированном мазке, наблюдают подвижность вибриона в фазово-контрасном микроскопе.

Затем студенты изучают посевы „фекалий” больного холерой на 1% пептонной воде и щелочном агаре. Описывают признаки роста на питательных середах, готовят мазки, красят их по Граму, микроскопируют, ставят РА а стекле с О1 холерной сывороткой, делают выводы о патогенности вибриона; изучают биологические препараты.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

№ п\п

Этапы

Время в мин.

Способы обучения

Оборудования

Место проведения

1.

Проверка и кор-рекция выходно-го уровня подго-товки к занятию

20

Тестовые задания выходного уровня

Схемы лабораторной диагностики, таблицы, атлас

Учебная комната

2.

Самостоятель-ная работа

35’

Граф

логичной структуры

Иммерсионный мик-роскоп, краски, предметное стекло, бактериологические петли, микропрепа-раты из вибриона окрашеные по Гра-му; питательные сре-ды: 1% пептонная щелочная вода и ще-лочной агар, диагно-стические сыворот-ки, вакцины, коллек-ция антибиотиков, диагностикумов.

3.

Самоконтроль и коррекция усвоенного материала

15’

Целевые обучающие программы

4.

Тестовый контроль

15’

Тесты

5.

Анализ резуль-татов работы

5

Целевые учебные задания:

1. В инфекционное отделение поступил больной С. с рвотой и развитием выраженного диарейного синдрома. Предварительный диагноз “холера”. Укажите факторы, обуславливающие развитие диареи при холере.

А. Инвазия эпителия кишечника

В. Циркуляция вибриона в крови

С. Образование дефектов кишечной стенки

D. Действие эндотоксина

Е. Действие экзотоксина

2. В лаборатории особо-опасных инфекций из фекалий больного холерой выделен классический холерный вибрион. По какому основному свойству типируют возбудителей классической холеры.

А. Чувствительность к бактериофагам Эль-Тор

В. Потребность в высоких концентрациях NaCl

С. Гемолитическая активность

D. Чувствительность к бактериофагу IV группы по Мукерджи

Е. Ни один из них

3. В лабораторию особо-опасных инфекций поступили испражнения от больного с диагнозом "острый гастроэнтерит", что дает основание подозревать холеру. Какой из перечисленных методов исследования на холеру относится к экспресс-методам?

А. Проба с бактериофагом

В. Изучение биохимических свойств

С. РИФ

D. РСК

Е. Выделение чистой культуры вибриона

4. В лабораторию особо-опасных инфекций доставлены рвотные массы и испражнения больного с подозрением на холеру. На какие питательные среды следует сделать посев для выделения чистой культуры вибриона?

А. Сахарный МПБ

В. 1% пептонную щелочную воду и щелочной агар

С. Среду Эндо

D. Желчный бульон

Е. Полужидкий МПА

5. В районах эпидемической опасности рекомендуется назначать антибиотики с целью профилактики холеры среди населения. Какой из перечисленных препаратов используют в подобной ситуации?

А. Пенициллин

В. Стрептомицин

С. Тетрациклин

D. Бисептол

Е. Левомицетин


Алгоритм лабораторной работы:

Проверка уровня подготовки студентов к занятию: решение исходных тестов.

Изучение методов микробиологической диагностики холеры.

Изучение схемы выделения чистой культуры холерного вибриона.

Знакомство с правилами забора материала от больных холерой.

Приготовление мазков из чистой культуры вибриона. Окраска по Граму, микроскопия, зарисовка в протокол.

Посев испражнений и рвотных масс „больного” на 1% пептонную щелочную воду и щелочной агар.

Изучение посевов 1% пептонной щелочной воде и щелочном агаре:

а) описание признаков роста;

б) приготовление мазков, окраска по Граму, микроскопия

в) постановка РА на стекле с О1 холерной сывороткой для изучения патогенности вибриона

Изучение биологических препаратов для диагностики, профилактики и лечения холеры.

Тестовый контроль и анализ итогов результатов самостоятельной работы каждого студента.

Оформление протокола.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

79829. МИРОВОЙ ОПЫТ И СХЕМЫ ФИНАНСИРОВАНИЯ ИННОВАЦИЙ 45.5 KB
  Однако общепризнанно что кредитным ресурсам принадлежит ведущая роль в мировой практике финансирования инновационной сферы. в Кредитный союз Кредитный союз объединение нескольких нуждающихся в финансировании фирм создающих общий фонд финансирования и пользующихся им в качестве залога или резерва совместно по очереди. чиновников и часто используется для финансирования в небольших масштабах.
79830. МАЛЫЕ ФОРМЫ ОРГАНИЗАЦИИ ИННОВАЦИОННОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ 84.5 KB
  Обычно создание венчурной фирмы предполагает наличие трех условий: идеи нововведения предпринимателя готового на основе этой идеи образовать новую фирму и капитала. Поэтому в инновационной деятельности здесь принимают участие не только инновационные фирмы но и компании рискового капитала. В отличие от промышленного и банковского капитала рисковый капитал отличается рядом особенностей. Вкладчики капитала заранее соглашаются на возможность потери средств при неудаче финансовой фирмы в обмен на высокую норму прибыли в случае ее успеха.
79831. Анализ эффективности инвестиционных проектов 224.5 KB
  В условиях рыночных отношений в основе определения эффективности инвестиционного проекта должны лежать другие критерии и методы. С позиций финансового анализа реализация инвестиционного проекта может быть представлена как два взаимосвязанных процесса: процесс инвестиций в создание производственного объекта или накопление капитала и процесс получения доходов от вложенных средств. В случае производственных инвестиций интенсивность результирующего потока платежей формируется как разность между интенсивностью расходами в единицу времени...
79833. ПОНЯТИЕ И СУЩНОСТЬ ИННОВАЦИИ КАК СРЕДСТВА ЭКОНОМИЧЕСКОГО РАЗВИТИЯ 86 KB
  В ней речь шла о новых комбинациях изменений в развитии выходящих за рамки процесса обновления производства в замкнутом кругу обновления выше уровня простого воспроизводства. Ученый выделил пять типичных факторов обуславливающих новые комбинации в развитии производства и рынка. Использование новой техники новых технологических процессов или нового рыночного обеспечения производства. Изменения в организации производства и его материально-техническом обеспечении.
79835. КЛАССИФИКАЦИОННЫЕ ПОДХОДЫ К ГРУППИРОВКЕ И ОРГАНИЗАЦИИ ИННОВАЦИЙ 64 KB
  ИН структуры предприятия Целевые качественные или количественные изменения в выборе и использовании материалов сырья информации оборудования информации работников и других ресурсов Целевые изменения в производственных обслуживающих и вспомогательных процессах как по качеству так и по количеству а так же по организации и способу ее обеспечения. То есть изменения отдельных элементов и их взаимных связей в структуре предприятия как системе Целевые качественны или количественные изменения в результатах производственно хозяйственной...
79836. Анализ использования основных производственных фондов и производственных мощностей 218.5 KB
  Цели и задачи анализа использования основных производственных фондов При анализе использования основных производственных фондов решаются следующие задачи: изучение структуры состава и движения основных производственных фондов; их распределение по местам использования и назначения; оценка технического состояния фондов степени их обновления и технического совершенства; изучение эффективности использования основных производственных фондов; определение технического состояния машин и оборудования; оценка уровня использования производственной...