67948

Микробиологическая диагностика дифтерии

Практическая работа

Медицина и ветеринария

Corynebacterium diphteriae (палочка Клебса Леффлера) - возбудитель дифтерии – острого инфекционного заболевания воздухоносных путей и кожных покровов, характеризующегося образованием фибринозных пленок и общей интоксикацией. Возбудитель дифтерии - Corynebacterium принадлежит к семейству Corynebacteriaceae.

Русский

2014-09-16

66.5 KB

7 чел.

6

Методическое указание для студентов к практическому занятию № 30

Тема: Микробиологическая диагностика дифтерии.

Цель: Изучение группы коринебактерий и лабораторной диагностики дифтерии.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема занятия 30. Микробиологическая диагностика дифтерии.

Актуальность темы. Corynebacterium diphteriae (палочка Клебса Леффлера) - возбудитель дифтерии – острого инфекционного заболевания воздухоносных путей и кожных покровов, характеризующегося образованием фибринозных пленок и общей интоксикацией.

Возбудитель дифтерии - Corynebacterium принадлежит к семейству Corynebacteriaceae.

Морфология: тонкие, слегка изогнутые или прямые палочки с закругленными концами, размером от 1 до 12 мкм, часто утолщены на концах и напоминают булаву (сoryne – булава). Спор и капсул не образуют, на поверхности имеют фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистой оболочки. Характерен выраженный полиморфизм (наряду с типичными формами можно обнаружить карликовые, кокковидные, толстые с колбовидными утолщениями на концах, нитевидные).

В мазках клетки располагаются  под углом друг к другу (римскими цифрами V и Х), что отличает их от ложнодифтерийных бактерий, которые в мазках располагаются параллельно друг к другу (в виде частокола).

У Corynebacterium diphteriae выделяют три биовара - gravis, mitis, intermedius, Различающиеся по морфологии, культуральным и биохимическим свойствам.

Gravis – короткие неправильной формы, с небольшим количеством гранул;

Mitisдлинные, изогнутые полиморфные палочки, содержащие много зерен волютина (тельца Бабеша-Эрнста).

Intermediusкрупные с бочковидными очертаниями, имеют поперечные перегородки, разделяющие клетку на несколько сегментов.

Волютиновые зерна выявляют окраской метиленовым синим или по Нейссеру

Культуральные и биохимические свойства. Факультативные анаэробы, хорошо растут при свободном доступе кислорода. Температурный оптимум 37°С.

На простых питательных средах растут плохо, на сывороточных (Леффлера) дают рост уже через 10-12 часов.

Выращивают на теллуритовой среде – Тинсдаля-Садыковой (елективно-дифференциально-диагностическая среда - коринебактерии высокорезистентны к теллуриту калия или натрия, который ингибирует рост контаминирующей микрофлоры). В настоящее время используют теллурит-шоколадный агар Маклеода и кровяно-теллуритовый агар.

Образуют серовато-черные колонии. S тип характерен для mitis; SR- для gravis

На свернувшейся сыворотке образуют крупные перламутрово-серые колонии (на этой среде нельзя дифференцировать типы, но очень хорошо видны зерна волютина, что отличает их от ложнодифтерийных бактерий).

На жидких средах – помутнение и осадок, характер которого варьирует у различных биоваров.

Биохимическая активность: ферментируют до кислоты глюкозу, мальтозу, галактозу. Не ферментируют сахарозу, лактозу, маннит, не образуют индол, не гидролизируют мочевину.

Продуцируют каталазу, гиалуронидазу, цистиназу, нейраминидазу

Токсинообразование: Corynebacterium diphteriae продуцирует мощный экзотоксин, нетоксигенные штаммы заболевание не вызывают. Токсин ингибирует белковый синтез, в том числе и в миокарде, приводя к структурным и функциональным нарушениям, способным вызывать смерть больного. Кроме того вызывает демиелинизацию нервных волокон, что часто приводит к параличам и парезам.

Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы C. diphteriae, инфицированные бактериофагом, несущим ген tox.

Антигенная структура. Определение антигенного состава проводят в РА. Выделяют О и К-антигены. К-антигены обеспечивают видовую специфичность.

С помощью анти-К-сывороток дифтерийные бактерии разделяют на серологические варианты.

В соответствии с антигенной структурой предложено несколько вариантов классификаций. Наибольшее распространение получила классификация Робинсона и Пини. У нас в стране применяется классификация Суслова, в соответствии с которой выпускают диагностические агглютинирующие, неадсорбированные сыворотки.

Большое распространение получила РПГА.

Конкретные цели:

  1.  Выучить морфологию, культуральные, биохимические и антигенные свойства коринебактерий - возбудителей дифтерии.
  2.  Выучить источники, пути передачи и некоторые клинические проявление дифтерии.
  3.  Ознакомиться с методами лабораторной диагностики дифтерии.
  4.  Определить значение токсина в развитии дифтерии.
  5.  Обусловить понятие “анатоксин” и “антитоксин”.
  6.  Особенности иммунитета при дифтерии.
  7.  Ознакомление с методами и средствами профилактики и лечение дифтерии.

Уметь:

  1.  Отличать дифтероиды от коринебактерий - возбудителей дифтерии в окрашенных микропрепаратах.
  2.  Осуществлять титрование антитоксической сыворотки методом Рамона.

Теоретические вопросы:

  1.  Характеристика группы коринебактерий (особенности морфологии).
  2.  Видовой состав группы коринебактерий и их роль в жизни человека.
  3.  Морфологические признаки истинных и ложных коринебактерий
  4.  Биологические типы коринебактерий.
  5.  Обоснование бактериологической диагностики дифтерии.
  6.  Микробиологическая диагностика дифтерии.
  7.  Особенности и характер иммунитета.
  8.  Свойства дифтерийного токсина.
  9.  Получение и титрование антитоксической сыворотки.

Практические задачи, которые выполняются на занятии:

  1.  Изучение морфологии возбудителей дифтерии в микропрепаратах.
  2.  Изучение культуральных и биохимических свойств разных биотипов коринебактерий.
  3.  Титрование антитоксической сыворотки.

Литература:

  1.  Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Э.П., Рыбакова А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.
  2.  Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.- Киев.: Высшая шк., 1992.- 431с.
  3.  Медицинская микробиология /Под ред. В.И. Покровского.- М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001.- 768с.
  4.  Дифтерийная инфекция. М.Д. Крылова, 1987.
  5.  Конспект лекции.

Короткие методические указания к работе на практическом занятии:

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа состоит из окрашивания мазков чистой культуры коринебактерий и изучении морфологии возбудителя в микропрепаратах Зарисовка демонстрационных препаратов и схемы лабораторной диагностики дифтерии.

В конце занятие проводится тестовый контроль и анализ итогов результатов самостоятельной работы каждого студента.


Технологическая карта проведения практического занятия

г/п

Этапы

Время, мин.

Средства обучения

Оборудование

Место проведения

1.

Проверка и коррекция исходного уровня подготовки к занятию

20

Тестовые задачи исходного уровня

Таблицы, коллекция вакцин, чашки с посевами.

Учебная комната

2.

Самостоятельная работа

35

Графы логической структуры

3

Самопроверка и коррекция усвоения материала

15

Целевые учебные задачи

4

Тестовый контроль

15

Тесты

5

Анализ результатов работы

5

Алгоритм лабораторной работы:

  1.  Этиология и эпидемиология дифтерии.
  2.  Изучение морфологии, культуральных и токсигенных свойств возбудителей дифтерии.
  3.  Понятие о токсигенных и нетоксигенных штаммах.
  4.  Методы диагностики дифтерии.
  5.  Ознакомление с препаратами, которые предназначены для профилактики и лечения дифтерии.
  6.  Понятие об анатоксине и антитоксине
  7.  Титрование антитоксической сыворотки и определение ее дозы. Методы введения антитоксической сыворотки.
  8.  Просмотр демонстрационных препаратов.
  9.  Оформление протокола.


Целевые учебные задачи:

1. В детском саду проводили вакцинацию детей против дифтерии. Какой препарат использовали для этого?

A. АКДС;

B. БЦЖ;

C. Вакцина Себина;

D. Вакцина Смородинцева;

E. противодифтерийную сыворотку.

2. В лабораторию направлено отделяемое зева и носа от больного с подозрением на дифтерию. На какую из перечисленных питательных сред следует сделать посев для выделения чистой культуры палочки дифтерии?

А. Китта-Тароцци

B. Эндо;

C. Тинсдаля-Садыковой;

D. Мак-Коя;

E. Гисса

3. Больному инфекционного отделения поставили диагноз «дифтерия». В мазке с миндалин этого больного были найдены палочки синего цвета с волютиновыми зернами на полюсах. Какой метод окраски мазков был применен?

А. Бурри

B. Романовского-Гимзе;

C. Грама;

D. Нейссера;

E. Леффлера

4. Из носоглотки ребенка 5 лет был выделен микроорганизм, который за своими морфологическими и биохимическими свойствами идентичный Corynebacterium diphteriae, но не вырабатывает екзотоксин. В результате какого процесса этот микроорганизм может стать токсигенним?

А. культивирование на телуритовой среде;

B. фагова конверсия;

C. пассаж через организм чувствительных животных;

D. хромосомные мутации;

E. выращивание в присутствии антитоксической сыворотки.

5. В детском отделении инфекционной клиники мальчик заболел дифтерией. Какой препарат необходимо ввести больному в первую очередь?

А. Дифтерийный анатоксин

B. АКДС;

C. АДС;

D. Поливалентную сыворотку;

E. Дифтерийную антитоксическую сыворотку.

6. Обследуя ребенка, врач стоматолог обнаружен налет на миндалинах и заподозрил атипичную форму дифтерии. Был подготовлен мазок, сделан посев на питательные среды и определена токсичность выделенной чистой культуры. Какая реакция была использована для определения токсигенности выделенного штамма дифтерийной палочки?

А. реакция связывания комплемента

B. реакция кольцепреципитации;

C. реакция агглютинации на стекле;

D. реакция гемолиза на кровяном агаре;

E. реакция преципитация в геле.

7. Выписку больного на дифтерию из стационара осуществляют после:

А. полного клинического выздоровления

B. получения двукратного отрицательного результата бактериологического исследования;

C. получения отрицательного результата серологического исследования;

D. при наличии антитоксических антител в сыворотке крови в титре не менее 1:400;

E. -

8. После определения родовой и видовой принадлежности возбудителя, выделенного у больного с подозрением на дифтерию зева, врачу необходимо установить его антигенную структуру. Какую реакцию при этом необходимо применить?

А. РСК

B. РН;

C. РП в геле;

D. реакцию преципитация в геле.

E. РА на стекле.

9. В одной из групп детского сада возникла вспышки дифтерийной инфекции. Какой метод исследования необходимо провести для идентификации выделенной культуры и установления источника инфекции?

А. бактериоскопический;

B. бактериологический;

C. бактериологический и серологический;

D. бактериологический, включая РП в геле.

E. бактериологический и фаготипирование.

10. При плановом обследовании работников терапевтического отделения на носительство дифтерийной палочки у ряда сотрудников были выделены нетоксигенные штаммы возбудителя. Какие меры необходимо применить в данном случае?

А. провести вакцинацию вакциной ДС;

B. провести вакцинацию вакциной АКДС;

C. ввести дифтерийную антитоксическую сыворотку в малых дозах;

D. ввести дифтерийный анатоксин.

E. провести антибиотикотерапию.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

23283. Новелістика Ірвінга 16.42 KB
  Ірвінґ здобув визнання як один із найвидатніших американських гумористів Характерні риси новелістики Ірвінґа цікавість і гострота сюжету поєднання серйозного та смішного романтичної іронії з раціоналістичним первнем. Ірвінґ висміює те що було містичним іронізує над недосяжним незбагненним реалії побуту поєднує з вигадкою політ фантазії з умінням відтворити особливості місцевого колориту та національного характеру. Поєднавши ілюзію з реальністю Ірвінґ значною мірою визначив шляхи розвитку американського романтизму виступивши...
23284. Іспанська літ-ра 19 ст. 20.17 KB
  приверженный к эстетике предыдущего этапа осознавал необходимость перемен в художественном мышлении вплотную подводит к вопросу о генезисе романтизма в Испании романтизм в испанской литературе утверждается в начале 30х годов; в первые же десятилетия века налицо лишь теоретические предпосылки романтизма: первые статьи пропагандирующие европейские романтические доктрины не происходило решительного разрыва с идеологией Просвещения. Взлет испанского романтизма пришелся на те годы когда гребень романтической волны в Англии Франции...
23285. Естетичний ідеал Кітса 15.48 KB
  Поезій в дусі народної балади чи пісні у Кітса небагато. Романтичне протиставлення мрії і дійсності взагалі властиве поезії Кітса.