67948

Микробиологическая диагностика дифтерии

Практическая работа

Медицина и ветеринария

Corynebacterium diphteriae (палочка Клебса Леффлера) - возбудитель дифтерии – острого инфекционного заболевания воздухоносных путей и кожных покровов, характеризующегося образованием фибринозных пленок и общей интоксикацией. Возбудитель дифтерии - Corynebacterium принадлежит к семейству Corynebacteriaceae.

Русский

2014-09-16

66.5 KB

8 чел.

6

Методическое указание для студентов к практическому занятию № 30

Тема: Микробиологическая диагностика дифтерии.

Цель: Изучение группы коринебактерий и лабораторной диагностики дифтерии.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема занятия 30. Микробиологическая диагностика дифтерии.

Актуальность темы. Corynebacterium diphteriae (палочка Клебса Леффлера) - возбудитель дифтерии – острого инфекционного заболевания воздухоносных путей и кожных покровов, характеризующегося образованием фибринозных пленок и общей интоксикацией.

Возбудитель дифтерии - Corynebacterium принадлежит к семейству Corynebacteriaceae.

Морфология: тонкие, слегка изогнутые или прямые палочки с закругленными концами, размером от 1 до 12 мкм, часто утолщены на концах и напоминают булаву (сoryne – булава). Спор и капсул не образуют, на поверхности имеют фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистой оболочки. Характерен выраженный полиморфизм (наряду с типичными формами можно обнаружить карликовые, кокковидные, толстые с колбовидными утолщениями на концах, нитевидные).

В мазках клетки располагаются  под углом друг к другу (римскими цифрами V и Х), что отличает их от ложнодифтерийных бактерий, которые в мазках располагаются параллельно друг к другу (в виде частокола).

У Corynebacterium diphteriae выделяют три биовара - gravis, mitis, intermedius, Различающиеся по морфологии, культуральным и биохимическим свойствам.

Gravis – короткие неправильной формы, с небольшим количеством гранул;

Mitisдлинные, изогнутые полиморфные палочки, содержащие много зерен волютина (тельца Бабеша-Эрнста).

Intermediusкрупные с бочковидными очертаниями, имеют поперечные перегородки, разделяющие клетку на несколько сегментов.

Волютиновые зерна выявляют окраской метиленовым синим или по Нейссеру

Культуральные и биохимические свойства. Факультативные анаэробы, хорошо растут при свободном доступе кислорода. Температурный оптимум 37°С.

На простых питательных средах растут плохо, на сывороточных (Леффлера) дают рост уже через 10-12 часов.

Выращивают на теллуритовой среде – Тинсдаля-Садыковой (елективно-дифференциально-диагностическая среда - коринебактерии высокорезистентны к теллуриту калия или натрия, который ингибирует рост контаминирующей микрофлоры). В настоящее время используют теллурит-шоколадный агар Маклеода и кровяно-теллуритовый агар.

Образуют серовато-черные колонии. S тип характерен для mitis; SR- для gravis

На свернувшейся сыворотке образуют крупные перламутрово-серые колонии (на этой среде нельзя дифференцировать типы, но очень хорошо видны зерна волютина, что отличает их от ложнодифтерийных бактерий).

На жидких средах – помутнение и осадок, характер которого варьирует у различных биоваров.

Биохимическая активность: ферментируют до кислоты глюкозу, мальтозу, галактозу. Не ферментируют сахарозу, лактозу, маннит, не образуют индол, не гидролизируют мочевину.

Продуцируют каталазу, гиалуронидазу, цистиназу, нейраминидазу

Токсинообразование: Corynebacterium diphteriae продуцирует мощный экзотоксин, нетоксигенные штаммы заболевание не вызывают. Токсин ингибирует белковый синтез, в том числе и в миокарде, приводя к структурным и функциональным нарушениям, способным вызывать смерть больного. Кроме того вызывает демиелинизацию нервных волокон, что часто приводит к параличам и парезам.

Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы C. diphteriae, инфицированные бактериофагом, несущим ген tox.

Антигенная структура. Определение антигенного состава проводят в РА. Выделяют О и К-антигены. К-антигены обеспечивают видовую специфичность.

С помощью анти-К-сывороток дифтерийные бактерии разделяют на серологические варианты.

В соответствии с антигенной структурой предложено несколько вариантов классификаций. Наибольшее распространение получила классификация Робинсона и Пини. У нас в стране применяется классификация Суслова, в соответствии с которой выпускают диагностические агглютинирующие, неадсорбированные сыворотки.

Большое распространение получила РПГА.

Конкретные цели:

  1.  Выучить морфологию, культуральные, биохимические и антигенные свойства коринебактерий - возбудителей дифтерии.
  2.  Выучить источники, пути передачи и некоторые клинические проявление дифтерии.
  3.  Ознакомиться с методами лабораторной диагностики дифтерии.
  4.  Определить значение токсина в развитии дифтерии.
  5.  Обусловить понятие “анатоксин” и “антитоксин”.
  6.  Особенности иммунитета при дифтерии.
  7.  Ознакомление с методами и средствами профилактики и лечение дифтерии.

Уметь:

  1.  Отличать дифтероиды от коринебактерий - возбудителей дифтерии в окрашенных микропрепаратах.
  2.  Осуществлять титрование антитоксической сыворотки методом Рамона.

Теоретические вопросы:

  1.  Характеристика группы коринебактерий (особенности морфологии).
  2.  Видовой состав группы коринебактерий и их роль в жизни человека.
  3.  Морфологические признаки истинных и ложных коринебактерий
  4.  Биологические типы коринебактерий.
  5.  Обоснование бактериологической диагностики дифтерии.
  6.  Микробиологическая диагностика дифтерии.
  7.  Особенности и характер иммунитета.
  8.  Свойства дифтерийного токсина.
  9.  Получение и титрование антитоксической сыворотки.

Практические задачи, которые выполняются на занятии:

  1.  Изучение морфологии возбудителей дифтерии в микропрепаратах.
  2.  Изучение культуральных и биохимических свойств разных биотипов коринебактерий.
  3.  Титрование антитоксической сыворотки.

Литература:

  1.  Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Э.П., Рыбакова А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.
  2.  Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.- Киев.: Высшая шк., 1992.- 431с.
  3.  Медицинская микробиология /Под ред. В.И. Покровского.- М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001.- 768с.
  4.  Дифтерийная инфекция. М.Д. Крылова, 1987.
  5.  Конспект лекции.

Короткие методические указания к работе на практическом занятии:

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа состоит из окрашивания мазков чистой культуры коринебактерий и изучении морфологии возбудителя в микропрепаратах Зарисовка демонстрационных препаратов и схемы лабораторной диагностики дифтерии.

В конце занятие проводится тестовый контроль и анализ итогов результатов самостоятельной работы каждого студента.


Технологическая карта проведения практического занятия

г/п

Этапы

Время, мин.

Средства обучения

Оборудование

Место проведения

1.

Проверка и коррекция исходного уровня подготовки к занятию

20

Тестовые задачи исходного уровня

Таблицы, коллекция вакцин, чашки с посевами.

Учебная комната

2.

Самостоятельная работа

35

Графы логической структуры

3

Самопроверка и коррекция усвоения материала

15

Целевые учебные задачи

4

Тестовый контроль

15

Тесты

5

Анализ результатов работы

5

Алгоритм лабораторной работы:

  1.  Этиология и эпидемиология дифтерии.
  2.  Изучение морфологии, культуральных и токсигенных свойств возбудителей дифтерии.
  3.  Понятие о токсигенных и нетоксигенных штаммах.
  4.  Методы диагностики дифтерии.
  5.  Ознакомление с препаратами, которые предназначены для профилактики и лечения дифтерии.
  6.  Понятие об анатоксине и антитоксине
  7.  Титрование антитоксической сыворотки и определение ее дозы. Методы введения антитоксической сыворотки.
  8.  Просмотр демонстрационных препаратов.
  9.  Оформление протокола.


Целевые учебные задачи:

1. В детском саду проводили вакцинацию детей против дифтерии. Какой препарат использовали для этого?

A. АКДС;

B. БЦЖ;

C. Вакцина Себина;

D. Вакцина Смородинцева;

E. противодифтерийную сыворотку.

2. В лабораторию направлено отделяемое зева и носа от больного с подозрением на дифтерию. На какую из перечисленных питательных сред следует сделать посев для выделения чистой культуры палочки дифтерии?

А. Китта-Тароцци

B. Эндо;

C. Тинсдаля-Садыковой;

D. Мак-Коя;

E. Гисса

3. Больному инфекционного отделения поставили диагноз «дифтерия». В мазке с миндалин этого больного были найдены палочки синего цвета с волютиновыми зернами на полюсах. Какой метод окраски мазков был применен?

А. Бурри

B. Романовского-Гимзе;

C. Грама;

D. Нейссера;

E. Леффлера

4. Из носоглотки ребенка 5 лет был выделен микроорганизм, который за своими морфологическими и биохимическими свойствами идентичный Corynebacterium diphteriae, но не вырабатывает екзотоксин. В результате какого процесса этот микроорганизм может стать токсигенним?

А. культивирование на телуритовой среде;

B. фагова конверсия;

C. пассаж через организм чувствительных животных;

D. хромосомные мутации;

E. выращивание в присутствии антитоксической сыворотки.

5. В детском отделении инфекционной клиники мальчик заболел дифтерией. Какой препарат необходимо ввести больному в первую очередь?

А. Дифтерийный анатоксин

B. АКДС;

C. АДС;

D. Поливалентную сыворотку;

E. Дифтерийную антитоксическую сыворотку.

6. Обследуя ребенка, врач стоматолог обнаружен налет на миндалинах и заподозрил атипичную форму дифтерии. Был подготовлен мазок, сделан посев на питательные среды и определена токсичность выделенной чистой культуры. Какая реакция была использована для определения токсигенности выделенного штамма дифтерийной палочки?

А. реакция связывания комплемента

B. реакция кольцепреципитации;

C. реакция агглютинации на стекле;

D. реакция гемолиза на кровяном агаре;

E. реакция преципитация в геле.

7. Выписку больного на дифтерию из стационара осуществляют после:

А. полного клинического выздоровления

B. получения двукратного отрицательного результата бактериологического исследования;

C. получения отрицательного результата серологического исследования;

D. при наличии антитоксических антител в сыворотке крови в титре не менее 1:400;

E. -

8. После определения родовой и видовой принадлежности возбудителя, выделенного у больного с подозрением на дифтерию зева, врачу необходимо установить его антигенную структуру. Какую реакцию при этом необходимо применить?

А. РСК

B. РН;

C. РП в геле;

D. реакцию преципитация в геле.

E. РА на стекле.

9. В одной из групп детского сада возникла вспышки дифтерийной инфекции. Какой метод исследования необходимо провести для идентификации выделенной культуры и установления источника инфекции?

А. бактериоскопический;

B. бактериологический;

C. бактериологический и серологический;

D. бактериологический, включая РП в геле.

E. бактериологический и фаготипирование.

10. При плановом обследовании работников терапевтического отделения на носительство дифтерийной палочки у ряда сотрудников были выделены нетоксигенные штаммы возбудителя. Какие меры необходимо применить в данном случае?

А. провести вакцинацию вакциной ДС;

B. провести вакцинацию вакциной АКДС;

C. ввести дифтерийную антитоксическую сыворотку в малых дозах;

D. ввести дифтерийный анатоксин.

E. провести антибиотикотерапию.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

38989. Численные методы 2.17 MB
  Из полученных данных видно, что метод подобластей имеет наилучший результат вычислений из всех остальных методов. Во-первых, даже при небольшом количестве разбиений он дал точность на 2 порядка лучше, чем второй по полученной точности метод Галеркина. Во-вторых, точность при количестве дискрет n=12 уже не укладывалась в разрядную сетку персонального компьютера.
38990. Икона Рождества Христова 33 KB
  Зубок с указкой в руке стоит у доски показывая на иллюстрации Рождественских событий Зубок: Ребята сегодня я буду учителем. Отвечайте на мои вопросы: Кто изображен на этом рисунке Родившийся МладенецХристос Зубок: Кто явился пастухам на поле Ангел Зубок: Какую весть принес ангел Что родился Бог в пещере Зубок: Кто едет на верблюдах по пустыне Звездочеты с дарами Зубок: Что привезли волхвы в подарок Иисусу Христу Золото ладан и смирну Зубок: Здорово мне нравиться быть учителем Матильда Леонардовна: Здравствуйте ребята...
38991. Совинформ. Праздник Крещения Господня – Богоявление 33 KB
  Беседа жителей Шишкиного леса Шуня раскладывает сувенирчики Енот Енотович приносит баночки с водой. Шуня: Какая я счастливая сколько мне подарков на святках подарили Енот Енотович: А ты Шунечка дарила другим радость в эти святые дни Шуня: Да конечно только не могу вам рассказать что и кому а то Матильда Леонардовна говорит что я все свои добрые дела растеряю. Шуня: Здорово что есть Господь которому можно доверить все свои тайны А что это у вас в руках за тайна такая Енот Енотович: Никакая это ни тайна а просто вода. Шуня: А...
38992. Притча о неразумном богаче. Советы Енота Енотовича. Думай о других 35.5 KB
  Советы Енота Енотовича. Оборудование: иллюстрации к притчам о добром самарянине неразумном богаче куклы котенка Коксика Енота Енотовича. Чему же хотел научить нас Господь Был ли жадным богач Какое решение он принял когда собрал большой урожай Смог ли он насладиться своим богатством что случилось с ним Советы Енота Енотовича: Думай о других. Коксик: Енот Енотыч Енот Енотыч – закричал котенок вбегая в комнату.
38993. Сретение Господне 35 KB
  Шуня: Тетушка Матильда что еще сделать Матильда Леонардовна: Вещи все сложила на место Шуня: Да. Матильда Леонардовна: Игрушки все убрала Шуня: Конечно. Матильда Леонардовна: Пыль везде вытерла Шуня: Вездевезде Матильда Леонардовна: Тогда принеси мне пожалуйста связку свечей из тумбочки. Зубок: Ухты как у нас чисто и красиво А что у нас завтра праздник какойто Может день рождения у когото Шуня: А вот и нет а вот и не угадал Совсем не день рождения Зубок: А к чему это вы так готовитесь Матильда Леонардовна: Открываем...
38994. Масленица. Прощеное воскресенье 41 KB
  Оборудование: иллюстрации к рассказу о насыщении Господом 5 тысяч человек куклы котенка Коксика Енота Енотовича мышки Шуни волчонка Зубка. Беседа обитателей Шишкиного леса Коксик и зубок рисуют чернобелые рисунки Коксик: Какая скука настроение серое. Зубок: Да все надоело в игры играть не хочется чем бы заняться Коксик: Может в хоккей сыграем Зубок: Да ну холод какой на улице Коксик: Может снеговика слепим Зубок: Лапы морозить не хочется Коксик: Да зима уже надоела Шуня: Что это вы ребята делаете Зубок: Грустим....
38995. О помощи Христа людям. Чудесные исцеления 33.5 KB
  Кто подал нам пример поста в пустыне Иисус Христос После какого события Господь постился После Крещения О каком чуде сотворенном Иисусом Христом мы говорили ранее Как Господь накормил 5 тысяч человек 2 рыбками и 5 хлебами Рассказ о чудесах Господних. Сразу же после чуда с хлебом и рыбой Иисус сказал Своим ученикам войти в лодку и отправиться раньше Него на другой берег пока Он отпустит людей. На рассвете пошел к ним Иисус идя по морю. Но Иисус заговорил с ними и сказал: Ободритесь; это Я не бойтесь.
38996. Доброе дело – бесценное богатство. Лукошко сказок: «Свободный город» 32 KB
  Лукошко сказок: Свободный город. Оборудование: телепередача Свободный город диск Цикл телевизионных передач для детей Доброе слово. Для этого мы побываем в Свободном городе. Почему город называется Свободным О чем мечтал Яков Как горожане спасали город Просмотр телепередачи 12 минут.