67955

Микробиологическая диагностика бордетеллиозов и клебсиеллезов

Практическая работа

Медицина и ветеринария

Коклюш - инфекционная болезнь, вызываемая Bordetella pertussis, характеризующаяся приступами спазматического кашля. Наблюдается преимущественно у детей дошкольного возраста. Возбудитель коклюша был открыт в 1906 г. Ж. Борде и О. Жангу. Таксономия. Возбудитель коклюша относится к отделу Gracilicutes, роду Bordetella.

Русский

2014-09-16

97 KB

6 чел.

Методические указания для студентов к практическому занятию № 35.

Тема занятия: Микробиологическая диагностика бордетеллиозов и клебсиеллезов.

Цель: Изучение методов микробиологической диагностики, терапии и профилактики коклюша и заболеваний, вызванных клебсиеллами.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема 5: Микробиологическая диагностика бордотеллиозов и клебсиеллезов.

Актуальность темы:

Возбудитель коклюша

Коклюш - инфекционная болезнь, вызываемая Bordetella pertussis, характеризующаяся приступами спазматического кашля. Наблюдается преимущественно у детей дошкольного возраста. Возбудитель коклюша был открыт в 1906 г. Ж. Борде и О. Жангу.

Таксономия. Возбудитель коклюша относится к отделу Gracilicutes, роду Bordetella.

Морфология и тинкториальные свойства. В. pertussis . мелкая овоидная грамотрицательная палочка с закругленными концами длиной 0,5-1,2 мкм. Спор и жгутиков не имеет, образует микрокапсулу.

Культивирование. В. pertussis - строгий аэроб, оптимальная температура для роста 370С, рН среды 7,2; очень требовательна к питательным средам, растет на средах Борде-Жангу (картофельно-глицериновом агаре с добавлением крови), на которой образуются колонии, похожие на капельки ртути, и казеиново-угольном агаре (КУА), образуя серовато-кремовые колонии.

Ферментативная активность. В. pertussis биохимически инертна.

Антигенная структура. Бордетеллы имеют О-антиген, состоящий из 14 компонентов (факторов). В. pertussis обладает обязательными факторами 1, 7, а также 2, 3, 4, 5, 6 в различных комбинациях. В зависимости от их сочетания различают серова-ры В. pertussis.

Факторы патогенности. В. pertussis - эндотоксин, вызывающий лихорадку, белковый токсин, обладающий антифагоцитарной активностью и стимулирующий лимфоцитоз, ферменты агрессии, повышающие сосудистую проницаемость, обладающие гистамин-сенсибилизирующим действием, вызывающие гибель эпителиальных клеток. В адгезии бактерий принимают участие гемагглютинин, пили и белки наружной мембраны.

Резистентность. Возбудитель коклюша очень неустойчив в окружающей среде.

Восприимчивость животных. При интраназальном введении культуры В. pertussis белым мышам развивается пневмония.

Эпидемиология. Коклюш - антропонозное заболевание; источником инфекции являются больные люди (особенно опасные в начальной стадии болезни) и носители. Передача инфекции осуществляется воздушно-капельным путем. Заболевание встречается повсеместно. Болеют чаще дети дошкольного возраста. Особенно восприимчивы к коклюшу грудные дети, для которых он наиболее опасен. Осенью и зимой наблюдается повышение заболеваемости.

Патогенез. Входными воротами инфекции являются верхние дыхательные пути, где развивается катаральное воспаление. В результате постоянного раздражения токсином рецепторов дыхательных путей появляется кашель, в дальнейшем в дыхательном центре образуется очаг возбуждения и приступы кашля могут быть вызваны и неспецифическими раздражителями. В возникновении приступов кашля имеет также значение сенсибилизация организма к токсинам В. pertussis.

Клиническая картина. Инкубационный период составляет 2-14 дней. Появляются недомогание, невысокая температура тела, небольшой кашель, насморк. Позднее начинаются приступы спазматического кашля, заканчивающиеся выделением мокроты. Таких приступов может быть от 5 до 50 в сутки. Заболевание продолжается до 2 мес. Различают легкую, среднетяжелую и тяжелую формы коклюша.

Иммунитет. После перенесенного заболевания вырабатывается стойкий иммунитет, который сохраняется на протяжении всей жизни.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования является слизь из верхних дыхательных путей. Основной метод диагностики бактериологический. Для ретроспективной диагностики применяют серологический метод (РА, РСК, РИГА).

Лечение. При тяжелых формах коклюша назначают антибиотики, нормальный гомологичный иммуноглобулин. Рекомендуются антигистаминные препараты, холодный свежий воздух.

Профилактика. Для специфической профилактики коклюша применяют адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину (АКДС). Вводят ее детям начиная с 4 мес. Детям до 1 года и непривитым при контакте с больным вводят нормальный человеческий иммуноглобулин.

Возбудитель паракоклюша - Bordetella parapertussis - вызывает сходное с коклюшем заболевание воздухоносных путей у человека, но легче протекающее. По морфологическим признакам и условиям культивирования напоминает возбудитель коклюша.

Микробиологическое исследование при коклюше и паракоклюше

Мокрота, слизь из носоглотки

Сыворотка крови

Бактериоскопическое исследование

Бактериологическое исследование

Серодиагностика

1 этап

Люминесцентная микроскопия мазков, обработанных флюо-ресцирующей иммун-ной сывороткой

Посев материала методом «кашлевых пластинок» или но-соглоточными там-понами на КУА или среду Борде-Жангу

Реакция агглютинации РСК

Ответ

Ответ

Характер колоний

Мазок, окраска по Граму

2 этап

Пересев на пробирки или чашки с КУА либо со средой Борде-Жангу (чистая культура)

3 этап

Рост на питательном агаре (пигмент)

Реакция агглютинации

Проба на уреазу

Окончательный ответ


Клебсиеллы

Бактерии получили название в честь Э. Клебса, который впервые описал микроб в 1875 г. Род Klebsiella относится к семейству Enterobacteriaceae, включает в себя 4 вида: K. pneumoniae, K. oxytoca, K. planticola, K. terrigena, которые отличаются по биохимическим свойствам.

Морфология и тинкториальные свойства. Клебсиеллы – не образующие спор неподвижные палочки, располагающиеся единично, парами или короткой цепочкой. Обычно они локализованы в капсуле, которая является характерным морфологическим признаком.

Культивирование. Клебсиеллы хорошо растут на простых питательных средах. На поверхности плотных питательных сред образуют куполообразные слизистые колонии. В жидких средах вызывают интенсивное помутнение.

Антигенная структура. Клебсиеллы имеют соматические О-антигены (более 10 серогрупп) и более 80 вариантов капсульных К-антигенов.

К факторам патогенности относятся: капсула полисахаридной природы, обладающая антифагоцитарной активностью; термостабильный и термолябильный энтеротоксины.

Экология и распространение. K. pneumoniae входит в состав факультативной микрофлоры кишечника, верхних дыхательных путей, влагалища; также обнаруживается на коже и слизистых оболочках. Клебсиеллы устойчивы к факторам окружающей среды благодаря наличию капсулы и могут в течение длительного времени сохраняться в почве, воде, помещениях. Клебсиеллы погибают при температуре 650С через 60 мин, в растворах обычных дезинфицирующих веществ.

Патогенез и заболевание у человека. K. pneumoniae или палочка Фридлендера является возбудителем неспецифических инфекций дыхательных путей (бронхитов, пневмоний), органов мочевыводящей системы, пищевой токсикоинфекции. Этот микроб может также вызывать гнойные послеродовые осложнения, неонатальную инфекцию, которая проявляется в виде пневмоний у новорожденных, кишечной инфекции и токсико-септических состояний, заканчивающихся летальным исходом. Кроме того, клебсиеллы пневмонии могут вызывать менингит, сепсис, цистит и другие заболевания. Нередко штаммы клебсиелл являются возбудителями внутрибольничных инфекций.

K. ozaenae вызывает поражение слизистой оболочки носа и придаточных пазух, сопровождающееся выделением зловонного секрета.

K. oxytoca вызывает ВБИ в урологической клинике.

Клебсиеллы риносклеромы (K. rhinoscleromatis) – поражают слизистую оболочку носоглотки, гортани, трахеи, бронхов. В тканях образуются гранулемы с последующим рубцеванием. Болезнь протекает хронически. Возможны летальные исходы.

Иммунитет. Гуморальный иммунный ответ защитной активностью не обладает. В защите от инфекции главная роль принадлежит фагоцитозу, опсонизированному специфическими антителами клебсиелл.

Микробиологическая диагностика. Применяется бактериологический метод исследования, который предусматривает выделение чистой культуры возбудителя из мокроты, мочи, испражнений, крови, гноя, в зависимости от локализации процесса, путем посева исследуемого материала на лактозосодержащие дифференциальные питательные среды с последующим выделением чистой культуры возбудителя и его идентификации до вида и подвида. Идентификацию клебсиелл проводят по морфологическим, культуральным, биохимическим и серологическим признакам в РСК с сыворотками больных.

Профилактика и лечение. Средств специфической профилактики не существует. Профилактика осуществляется путем раннего выявления больных, изоляции их от здоровых людей. Для лечения используют клебсиеллезный бактериофаг и антибиотики широкого спектра действия, чему предшествует определение антибиотикограммы.

 Конкретные цели:

Выучить дифференциацию возбудителя коклюша и паракоклюша по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам.

Выучить морфологию, культуральные, биохимические свойства клебсиелл.

Выучить источники, пути передачи и некоторые клинические проявление бордотеллиозов и клебсиеллезов.

Изучить методы микробиологической диагностики.

Трактовать результаты микроскопического исследования.

Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии.

Уметь:

Забирать материал для исследования от больных

методом кашлевых пластинок

тампоном

Выделить чистую культуру

Трактовать результаты микроскопического исследования

 Теоретические вопросы:

1. Возбудитель.

  •  Свойства. Резистентность.
  •  Патогенность для человека и животных. Факторы патогенности, токсины.
  •  Патогенез заболевания у людей, иммунитет.
  •  Микробиологическая диагностика.
  •  Специфическая профилактика и лечение

Практические задания, которые выполняются на занятии:

Микроскопия демонстрационных препаратов.

Изучение коллекции питательных сред.

Изучение биопрепаратов дл лабораторной диагностики и специфической профилактики коклюша.

Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.

Разбор схемы лабораторной диагностики коклюша и клебсиеллезной инфекции.

Оформление протокола.

Литература:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, Санкт-Петербург «Специальная литература», 1998. - 592с.

2. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология / Учебник.-2-е изд., перераб. и доп.- М.:Медицина, 1983,-512с.

3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией. - Киев: Вища школа, 1992. - 431с.

4. Медицинская микробиология / Под редакцией В.И. Покровского. -М.:ГЕОТАР-МЕД, 2001.-768с.

5. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. Под ред. М.П. Зыкова. М. «Медицина». – 1977. – 288 с.

6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес. – М.: Медицина, 1986. – 512 с.

7. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Макияров К.А. Микробиология, вирусология и иммунология. Алма-Ата, «Казахстан», 1974. – 372 с.

2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби. - К., 1995. – 321с.

3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни. - М.: Медицина, 1990. - 559 с.

4. БМЭ, Т. 1, 2, 7.

5. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов. – Мн.: Выш. шк., 1986. – 255 с.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из приготовления мазка из капсульных бактерий (окраска по методу Бурри-Гинса) и изучения морфологии возбудителя в микропрепаратах. Разбор и запись схем лабораторной диагностики в протокол.

В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных препаратов и их зарисовка в протокол занятия.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итоговых результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

№ п\п

Этапы

Время в мин.

Способы обучения

Оборудования

Место проведения

1.

Проверка и кор-рекция выходно-го уровня подго-товки к занятию

20

Тестовые задания выходного уровня

Тестовые задания выходного уровня

Учебная комната

2.

Самостоятельная работа

35’

Граф

логичной структуры

Иммерсионный микрос-коп, краски, предметное стекло, бактериологичес-кие петли, посевы чис-тых культур бактерий.

Коллекция пит. сред, де-монстрационных препа-ратов, биопрепаратов.

3.

Самоконтроль и коррекция усво-енного материала

15’

Целевые обучающие программы

4.

Тестовый контроль

15’

Тесты

5.

Анализ результа-тов работы

5

Алгоритм лабораторной работы:

Изучение схемы выделения чистой культуры.

Микроскопия готовых мазков из чистой культуры.

Ознакомление с правилами забора материала от больных для микроскопии исследуемого материала.

Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов.

Зарисовывание препаратов в протокол.

Разбор и запись схем лабораторной диагностики  в протокол.

Оформление протокола.

Тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.


Целевые обучающие задания:

1. Во время микроскопии мокроты больного крупозной пневмонией выявлено значительное количество грамотрицательных палочек, окруженных капсулой. Выявление какого возбудителя следует ожидать?

A. Chlamidia pneumoniae

B. Klebsiella pneumoniae

C. Streptococcus pneumoniae

D. Staphylococcus aureus

E. Escherichia coli

2. В доме ребенка планируется вакцинация грудных детей против коклюша. Какой из приведенных препаратов используется для этого?

A. типоспецифическая сыворотка

B. вакцина БЦЖ

C. вакцина АКДС

D. нормальный -глобулин

E. АДП анатоксин

3. У больного хроническим простатитом получили секрет простаты. В связи с тем, что возбудителем заболевания может быть Klebsiella pneumoniae, какую из перечисленных элективных питательных сред необходимо использовать для выделения этого микроорганизма?

А. Борде-Жангу

В. КУА

С. висмут-сульфитный агар

D. глицериновый агар

Е. Китта-Тароцци

4. У больного хроническим стоматитом смыв со слизистой оболочки ротовой полости направили в баклабораторию. В связи с тем, что возбудителем заболевания может быть Klebsiella pneumoniae, какой из перечисленных методов необходимо использовать для выявления капсулы при проведении бактериоскопического исследования мазков?

А. По Бурри.

В. По Циля-Нильсену.

С. По Бурри-Гинса.

D. По Ожешко.

Е. По Ганзену.

5. С целью серологической диагностики коклюша поставлена развернутая реакция с коклюшным и паракоклюшным диагностикумами. На дне пробирок, в которые был внесен диагностикум с Воrdеtе11а раrареrtusis, образовался зернистый осадок. Какие антитела обнаружила эта реакция?

А. Антитоксины.

В. Опсонины.

D. Преципитины.

С. Бактериолизины.

Е. Агглютинины.

6. При проведении бактериологического исследования мокроты больного с подозрением на коклюш на чашке Петри выросли серовато-кремовые колонии. Известно, что коклюшная палочка очень требовательна к питательным средам. На какой питательной среде выросли данные колонии?

A. агар Эндо

B. щелочной агар

C. висмут-сульфитный агар

D. кровяной агар

E. козеиново-угольный агар

7. При микроскопии мазков выделений из уретры, окрашенных методом Бурри-Гинса, были выявлены капсулообразующие палочки. Какие из приведенных ниже микробов постоянно образую капсулы?

A. Proteus vulgaris

B. Klebsiella pneumoniae

C. Escherichia coli

D. Enterobacter clocae

E. Proteus mirabilis

8. В бактериологическую лабораторию поступил материал для исследования больного с челюстно-лицевой травмой с гнойно-воспалительным осложнением, вызванным Klebsiella pneumoniae. Какой из приведенных ниже методов необходимо использовать для лабораторной диагностики заболевания?

A. реакция Асколи

B. кожно-аллергическая проба

C. реакция гемагглютинации

D. биологический метод

E. бактериологическое исследование

9. В детскую инфекционную больницу поступил мальчик 6 лет с клиническим диагнозом «Коклюш?». При проведении бактериологического исследования, на какую из приведенных ниже питательных сред необходимо посеять мокроту больного?

A. Борде-Жангу

B. Тинсдаля-Садиковой

C. Китта-Тароцци

D. Эндо

E. Левенштейна-Йенсена

10. В бактериологическую лабораторию доставили мокроту больного с подозрением на «Коклюш?». При посеве материала на козеиново-угольный агар через 24 часа произошло диффузное окрашивание питательной среды в буровато-коричневый цвет и появились коричневые колонии. Какой микроорганизм рода Bordetella был выделен в этом случае?

A. B. pertussis

B. B. parapertussis

C. B. bronchiseptica

D. все перечисленное

Е. -


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

9464. Преступление против жизни 83 KB
  Тема №2: Преступление против жизни. Постановление пленума Верховного Суда о судебной практике по делам об убийстве от 27 января 1999 года понятие, система и виды преступлений против личности понятие и виды преступлений против жизни...
9465. Преступления против здоровья 81 KB
  Тема № 3: Преступления против здоровья. общая характеристика и виды. преступления против здоровья, сопряженные с причинением вреда определенной тяжести (ст. 111, 112, 113, 114, 115, 118 УК РФ) иные преступления против з...
9466. Преступления, ставящие в опасность жизнь и здоровье человека 52.5 KB
  Тема №4: Преступления, ставящие в опасность жизнь и здоровье человека. Общая характеристика. Видовой объект Безопасность жизни и здоровья граждан Объективная сторона Значительная часть преступлений совершаются путем бездействия (ст.125), возможн...
9467. Преступления против свободы, чести и достоинства личности 74 KB
  Тема №5: Преступления против свободы, чести и достоинства личности. Общая характеристика. Ст. 3 всеобщей декларации прав человека - каждый человек имеет право на свободу и личную неприкосновенность. Ст.21 и 23...
9468. Преступления против половой свободы и половой неприкосновенности 50.5 KB
  Преступления против половой свободы и половой неприкосновенности. Общая характеристика половых преступлений. Половые преступления - предусмотренные уголовным законом общественно-опасные деяния, грубо нарушающие сложившийся в обществе уклад секс...
9469. Преступления против политических прав и свобод человека и гражданина 45 KB
  Преступления против политических прав и свобод человека и гражданина. Общая характеристика преступлений. Преступления против конституционных прав и свобод - это те общественно опасные посягательства, которые существенно нарушают закрепленные КР...
9470. Преступления против политических прав граждан 48 KB
  Преступления против политических прав граждан. Посягательства на избирательные права граждан Базовый НПА: ФЗ от 12.06.2002г. №67-ФЗ Об основных гарантиях избирательных прав и права на участие в референдуме граждан РФ Объектом преступного пос...
9471. Преступления против семьи и несовершеннолетних 42 KB
  Тема №9. Преступления против семьи и несовершеннолетних. Постановление Пленума ВС РФ от 14.02.2000г. О судебной практике по делам о преступлениях несовершеннолетних. Общая характеристика. Гл.20 представляет собой комплекс норм, направлен...
9472. Преступления против собственности 55 KB
  Преступления против собственности. НПА: Постановление пленума ВС СССР № 4 от 11 июля 1927 о судебной практике по делам о хищении государственного и общественного имущества Постановление пленума ВС РФ...