67959

Микробиологическая диагностика лептоспирозов и боррелиозов

Практическая работа

Медицина и ветеринария

Лептоспироз - инфекционное заболевание, вызываемое Leptospira interrogans, характеризующаяся поражением кровеносных капилляров, печени, почек, мышц, ЦНС, нередко сопровождающаяся желтухой. Возбудитель лептоспироза был выделен в 1914 г. Р. Инадо и И. Идо. Таксономия. Возбудитель лептоспироза...

Русский

2014-09-16

87.5 KB

6 чел.

Методические указания для студентов к практическому занятию № 37.

Тема занятия: Микробиологическая диагностика лептоспирозов и боррелиозов.

Цель: Изучение методов микробиологической диагностики, терапии и профилактики заболеваний, вызванных лептоспирами и боррелиями.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема 37: Микробиологическая диагностика лептоспирозов и боррелиозов.

Актуальность темы:

Возбудитель лептоспироза

Лептоспироз - инфекционное заболевание, вызываемое Leptospira interrogans, характеризующаяся поражением кровеносных капилляров, печени, почек, мышц, ЦНС, нередко сопровождающаяся желтухой. Возбудитель лептоспироза был выделен в 1914 г. Р. Инадо и И. Идо.

 Таксономия. Возбудитель лептоспироза относится к отделу Gracilicutes, семейству Leptospiraceae, роду Leptospira.

 Морфология и тинкториальные свойства. Лептоспиры - бактерии, имеющие извитую форму, длиной 7-14мкм, толщиной 0,1мкм; характеризуются наличием многочисленных мелких завитков, концы лептоспир загнуты в виде крючков (вторичные завитки). Не образуют спор и капсул; подвижны - совершают поступательное, вращательное, сгибательное движения. Лептоспиры анилиновыми красителями красятся плохо, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в розовый цвет, грамотрицательны. Оптимальный способ изучения их морфологии - темнопольная микроскопия.

 Культивирование. Лептоспиры культивируют в аэробных условиях на специальных питательных средах с нативной кроличьей сывороткой при 25-350С и рН 7,2-7,4. Растут медленно.

 Ферментативная активность. Биохимическая активность лептоспир невысокая.

 Антигенная структура. Среди представителей рода Leptospira выделяют около 200 сероваров, объединенных в 19 серологических групп. Родоспецифическим является полисахаридный фибриллярный антиген, принадлежность к группе и варианту определяется соответственно оболочечными белковыми и липопротеиновым антигенами.

 Факторы патогенности. Патогенные свойства лептоспир обусловлены образованием малоизученных экзотоксиноподобных веществ и эндотоксинов. Лептоспиры, кроме того, продуцируют фибринолизин и плазмокоагулазу.

 Резистентность. Лептоспиры очень быстро погибают при действии высоких температур, дезинфицирующих средств, но достаточно устойчивы к низким температурам. В воде естественных водоемов сохраняют жизнеспособность в течение 5-10 дней, в сырой почве - до 270 дней.

 Восприимчивость животных. Многие животные чувствительны к лептоспирам.

 Эпидемиология. Лептоспироз - широко распространенный зооноз, встречается во всех частях света. Существуют природные очаги лептоспироза - преимущественно в лесах, заболоченных местностях, реках. Источником инфекции в них являются дикие животные - грызуны, лисы, песцы и др. Моча животных попадает в воду, загрязняет почву, растительность. Заболеваемость характеризуется строгой сезонностью (июнь - сентябрь) и связана с сельскохозяйственными работами (покос лугов, уборка сена), а также сбором грибов, ягод, охотой, рыбалкой. В сельской местности источником инфекции могут быть домашние животные: свиньи, крупный рогатый скот, собаки. Заражение может происходить пищевым путем, например при употреблении молока. Возможен также контактно-бытовой путь передачи - при уходе за больными животными. Однако основной путь передачи инфекции - водный. Нередко в сельской местности при купании людей в загрязненных мочой больных животных водоемах возникают «купальные» вспышки. Возможны случаи лептоспироза также в портовых городах, где много крыс.

 Патогенез. Входные ворота инфекции - слизистые оболочки ротовой полости, глаз, носа, кожа. Лептоспиры распространяются по лимфатическим путям, проникают в кровь и током крови разносятся по организму, попадая в различные органы - печень, почки, легкие и т.д. В органах микроорганизмы интенсивно размножаются, затем вновь поступают в кровь. В результате действия возбудителей и их токсинов повреждается стенка кровеносных капилляров и наблюдаются кровоизлияния в различные органы и ткани. Больше всего страдают печень, почки, надпочечники, сердце, мышцы.

 Клиническая картина. Инкубационный период обычно продолжается 7-10 дней, заболевание – 5-6 нед. Болезнь, как правило, начинается остро, температура тела повышается до 39-400С, появляются головная боль, резкие боли в мышцах, особенно в икроножных. В зависимости от поражения тех или иных органов появляются симптомы их повреждения: почечная недостаточность, желтуха и др. Характерна волнообразная лихорадка. Клинические формы лептоспироза различны - от легких до тяжелейших, приводящих к смерти.

 Иммунитет. Иммунитет длительный, напряженный, но характеризуется строгой серовароспецифичностью.

 Микробиологическая диагностика. В качестве материала для исследования на 1-й неделе заболевания берут кровь, позже можно использовать мочу, спинномозговую жидкость. Применяют бактериоскопический метод («темнопольная микроскопия»): бактериологический, биологический методы. Но наиболее широко используют серологический метод (РСК, РНГА, РА, реакция лизиса); по нарастанию титра антител судят о наличии заболевания.

 Лечение. Применяют антибиотики и противолептоспирозный гетерологичный иммуноглобулин.

 Профилактика. Неспецифическая профилактика заключается в соблюдении ряда правил: нельзя употреблять сырую воду из непроточных водоемов для питья и умывания, купаться в небольших водоемах, особенно в местах водопоя скота. Для специфической профилактики по эпидемическим показаниям используют убитую вакцину.

 Возбудитель эпидемического возвратного тифа

Эпидемический возвратный тиф (Typhus recurrens) - инфекционное заболевание, вызываемое Borrelia recurrentis, характеризующаяся приступами лихорадки с мышечными и головными болями, сменяющимися безлихорадочными периодами. Антропонозное заболевание. Спирохета открыта в 1868 г. немецким врачом О. Обермейером.

Боррелии - крупные спирохеты с большими неравномерными завитками; грамотрицательны, подвижны.

 Переносчиком возбудителей является платяная вошь. При кровососании боррелии от больного поступают в кишечник вши и могут сохраняться там в течение всей ее жизни. Заражение происходит в результате раздавливания вши, втирания возбудителей, содержащихся в гемолимфе, в расчесы. Внедрившиеся в организм боррелии захватываются макрофагами и лимфоидными клетками и по мере размножения поступают в кровь. Разрушаясь, освобождают эндотоксины, являющиеся причиной клинических проявлений - озноба, повышения температуры тела, головных и мышечных болей и других симптомов. Инкубационный период в среднем составляет 7-8 дней.

Постинфекционный иммунитет нестойкий и непродолжительный.

 Лечение проводят антибиотиками.

 Специфическая профилактика не разработана. Основные меры борьбы сводятся к уничтожению вшей, выявлению больных, санитарной обработке лиц, находившихся в очаге.

 Микробиологическая диагностика базируется на обнаружении боррелии в мазках из крови больного, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Вспомогательное значение имеют серологические реакции.

Для дифференциации с эндемическим сыпным тифом применяют заражение морских свинок кровью больного.

Схема микробиологического исследования при возвратном тифе

   КРОВЬ         СЫВОРОТКА КРОВИ

Микроскопическое    Биопроба  РСК и другие

исследование        серологические

         реакции

Мазок,  Препарат  Препарат  Заражение   ОТВЕТ

окраска «толстая» «раздавленная» морской

водным капля,  капля,   свинки

фуксином окраска микроскопия

 по Рома- в темном  Мазок из крови, Препарат «толстая»

 новскому- поле   окраска фуксином капля, окраска по

 Гимзе        Романовскому-Гимзе

 ОТВЕТ

   ОКОНЧАТЕЛЬНЫЙ  ОТВЕТ

 Конкретные цели:

Изучить методы микробиологической диагностики лептоспирозов и боррелиозов.

Трактовать результаты микроскопического исследования.

Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии.

Уметь:

Забирать материал для исследования от больных

Выделить чистую культуру

Трактовать результаты микроскопического исследования

 Теоретические вопросы:

1. Возбудитель.

  •  Свойства. Резистентность.
  •  Патогенность для человека и животных. Факторы патогенности, токсины.
  •  Патогенез заболевания у людей, иммунитет.
  •  Микробиологическая диагностика.
  •  Специфическая профилактика и лечение

Практические задания, которые выполняются на занятии:

Микроскопия демонстрационных препаратов.

Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.

Разбор схемы лабораторной диагностики

Оформление протокола.

Литература:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, иммунология и ви-усология /Учебник для медицинских ВУЗов, Ст-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.

2. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.-2-е изд., перераб. и доп.- М.:Медицина, 1983,- 512с.

3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.- Киев: Вища школа, 1992.- 431с.

4. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.:ГЕОТАР-МЕД, 2001.- 768с.

5. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. /Под ред. М.П. Зыкова.- М. «Медицина». 1977.– 288с.

6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес.– М.: Медицина, 1986.– 512с.

7. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Макияров К.А. Микробиология, вирусология и иммунология.- Алма-Ата.: «Ка-захстан», 1974.– 372с.

2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби.- К., 1995.– 321с.

3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.- М.: Медицина, 1990.- 559с.

4. БМЭ, Т. 1, 2, 7.

5. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов.– Мн.: Выш. шк., 1986.– 255с.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Разбор и запись схем лабораторной диагностики в протокол.

В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных препаратов и их зарисовка в протокол занятия.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итоговых результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

№ п\п

Этапы

Время в мин.

Способы обучения

Оборудования

Место проведения

1.

Проверка и кор-рекция выходно-го уровня подго-товки к занятию

20

Тестовые задания выходного уровня

Таблицы.

Тесты по теме.

Учебная комната

2.

Самостоятель-ная работа

35’

Граф

логичной структуры

Иммерсионный микроскоп, коллек-ция, демонстрацион-ных препаратов, биопрепаратов.

3.

Самоконтроль и коррекция усвоенного материала

15’

Целевые обучающие программы

4.

Тестовый контроль

15’

Тесты

5.

Анализ резуль-татов работы

5


Целевые обучающие задания:

1. В инфекционное отделение поступила работница животноводческой фермы с температурой 40оС, сильными головными и мышечными болями, гиперемией лица и общей слабостью. При опросе выяснилось, что вышеуказанные симптомы появились 2 дня назад. Врач заподозрил лептоспироз. Какой метод лабораторной диагностики позволит наиболее быстро подтвердить диагноз?

A. Биологический

B. Бактериологический

C. аллергический

D. серологический

E. микроскопический

2. В инфекционное отделение поступил больной с предварительным диагнозом «лептоспироз». Из анамнеза стало известно, что болеет не более 3-х дней. Какой исследуемый материал необходимо забрать у больного для подтверждения диагноза?

A. слюну;

B. кровь;

C. желчь;

D. мочу;

Е. испражнения.

3. Выявлена вспышка лептоспироза у шахтеров. Какие из специфических препаратов необходимо использовать для специфической профилактики?

A. анатоксин;

B. живую вакцину

C. убитую вакцину

D. химическую вакцину

Е. антилептоспирозную сыворотку.

4. При микроскопии нативного препарата крови в темном поле обнаружены спиралевидные серебристо-белые микроорганизмы, концы которых крючковато загнуты. Возбудитель какого заболевания был обнаружен в мазках?

A. холеры;

B. сифилиса;

C. лептоспироза;

D. эпидемического возвратного тифа;

Е. эндемического возвратного тифа.

5. К врачу инфекционисту обратилась женщина с жалобами на высокую температуру, которая продолжается уже больше 5 дней, головную и мышечную боль. При осмотре врач обнаружил увеличение печение и селезенки, а так же желтушность кожных покровов и заподозрил лептоспироз. Какой метод лабораторной диагностики наиболее целесообразно применить для подтверждения диагноза?

A. микроскопию крови;

B. микроскопию мочи;

C. серологический;

D. аллергический

Е. биологический

6. Больного мужчину госпитализировали на  2 день болезни с желтушностью кожных покровов, болью в мышцах, ознобом, носовым кровотечением. При проведении лабораторной диагностики врач использовал темнопольную микроскопию крови больного. В результате чего обнаружил подвижные извитой формы микроорганизмы. Назовите возбудителя заболевания.

A. Bartonella bacilloformis;

B. Borrelia duttonii

C. Leptospira interrogans

D. Rickettsia mooseri

Е. –

7. В инфекционное отделение был госпитализирован больной с периодически повторяющейся лихорадкой. В препарате крови, окрашенном по Романовскому-Гимзе, были выявлены спиралевидные микроорганизмы сине-фиолетового цвета с несколькими большими завитками. Возбудитель какого заболевания был выявлен?

A. Возвратного тифа;

B. Брюшного тифа;

C. Малярии

D. Сыпного тифа

Е. Лептоспироза

8. В инфекционную больницу госпитализировали больного с предварительным диагнозом эпидемический возвратный тиф. Какой материал, взятый от больного, необходимо исследовать прежде всего?

A. мочу;

B. кровь;

C. ликвор;

D. фекалии;

Е. смыв с носовой части глотки

9. Для диагностики лептоспироза используют серологический метод лабораторной диагностики. Какая из реакций при этом применяется?

A. реакция микроагглютинации и лизиса;

B. развернутая РА;

C. РГА;

D. РНГА;

Е. РН.

10. У больного с подозрением на эпидемический возвратный тиф в период апирексии необходимо подтверждение или опровержение диагноза. Какой метод лабораторной диагностики является наиболее эффективным в этот период?

A. темнопольная микроскопия мазка крови;

B. приготовление препарата «толстой капли» крови и окраска по Романовскому-Гимзе;

C. биологическая проба;

D. реакция иммобилизации боррелий;

Е. все выше перечисленное.

11. У больного с подозрением на возвратный тиф была взята кровь в период приступа лихорадки. Данная кровь была введена морским свинкам. Спустя 10 суток у животных не было обнаружено никаких признаков заболевания. О чем могут свидетельствовать полученные результаты?

A. пациент болен брюшным тифом;

B. пациент болен эпидемическим возвратным тифом;

C. пациент болен  эндемическим возвратным тифом;

D. пациент болен сыпным тифом;

Е. пациент болен лептоспирозом.

12. Какой тест является специфичным для диагностики эпидемического возвратного тифа?

A. реакция агглютинации;

B. реакция Вассермана;

C. проба с аллергеном;

D. биологическая проба на кроликах;

Е. реакция иммобилизации.

13. Для диагностики какого заболевания применяется реакция Риккенберга-Брусина?

A. возвратный тиф;

B. сифилис;

C. лептоспироз;

D. малярия;

Е. сыпной тиф.

Алгоритм лабораторной работы:

Изучение схемы выделения чистой культуры.

Микроскопия готовых мазков из чистой культуры.

Ознакомление с правилами забора материала от больных для микроскопии исследуемого материала.

Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов.

Зарисовывание препаратов в протокол.

Разбор и запись схем лабораторной диагностики в протокол.

Оформление протокола.

Тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

2513. Определение удельного заряда электрона магнетрона 153 KB
  Непосредственное измерение массы электрона представляет значительные трудности ввиду ее малости. Легче определить удельный заряд электрона, т.е. отношение величины заряда к массе (е / m), а по величине заряда е и удельному заряду можно найти массу m электрона. Для определения е / m могут применяться различные методы. В данной работе применен метод магнетрона.
2514. Исследование свойств плоскостного полупроводникового триода (транзистора) 609 KB
  Изучить устройство и принцип действия полупроводникового триода, Снять вольт − амперные характеристики триода; Вычислить коэффициенты усиления триода по току, напряжению и мощности.
2515. Определение волны световой волны при помощи дифракции от щели 386 KB
  Рассмотрим прохождение волны через узкую прямоугольную щель. Согласно принципу Гюйгенса каждая точка фронта волны, достигающей щели, является источником вторичных волн, распространяющихся во все стороны. Поверхность, огибающая эти волны и представляющая фронт прошедшей через щель волны.
2516. Изучение колебательного контура 277.81 KB
  Колебательные процессы широко распространены в природе и технике. Примером колебаний различных физических величин являются колебания маятников, струн, мембран телефонов, звук, свет, а также переменный электрический ток, представляющий собой электрические колебания.
2517. Определение скорости звука в воздухе методом стоячей волны (или методом резонанса) 183.89 KB
  Любая частица среды, выведенная из положения равновесия, под действием упругих сил стремится возвратиться в первоначальное положение и совершает колебания. Вместе с ней начинают колебаться и соседние с ней частицы, затем следующие и т.д. Такое распространение колебательного процесса в среде называется волной.
2518. Определение ускорения силы тяжести при помощи оборотного маятника 307 KB
  Большинство косвенных методов измерения ускорения силы тяжести g основано на использовании известной формулы для: периода Т колебаний физического маятника. Измерение ускорения силы тяжести при помощи оборотного маятника.
2519. Способы определение удельного заряда электрона методом магнетрона 48.15 KB
  В пределах точности эксперимента электрон – стабильная частица. Характер движения и траектория заряженной частицы зависят не от ее заряда или массы в отдельности. Измеряя скорости и траектории частиц, движущихся в электрических и магнитных полях, можно определить величину и знак удельного заряда.
2520. Изучение абсолютно упругого удара шаров 270.56 KB
  Изучение способов определения скорости тел до и после удара на основе законов сохранения, обоснование в процессе выполнения третьего закона Ньютона при упругом ударе тел.
2521. Определение концентрации носителей заряда и подвижности в полупроводниках различного типа 208.6 KB
  Измерили концентрацию носителей заряда и подвижности в полупроводниках различного типа. Установка для измерения концентрации и подвижности носителей заряда.