71566

Генетическая инженерия, плазмиды

Лекция

Биология и генетика

Плазмиды бактериальных клеток В большинстве случаев плазмиды бактерий представляют собой двухцепочечные суперскрученные ковалентно-замкнутые кольцевые молекулы ДНК. Эти ферменты узнают в ДНК одни и те же определенные короткие последовательности нуклеотидов сайты.

Русский

2014-11-08

199 KB

15 чел.

Тема 22. Генетическая инженерия, плазмиды

1. Плазмиды бактериальных клеток

2. Системы рестрикции и модификации бактериальной клетки

3. Генная инженерия, клонирование генов в клетках микроорганизмов

4. Успехи и проблемы биотехнологии

1. Плазмиды бактериальных клеток

  •  В большинстве случаев плазмиды бактерий представляют собой двухцепочечные суперскрученные ковалентнозамкнутые кольцевые молекулы ДНК. Благодаря такой структуре они не подвергаются действию клеточных нуклеаз. Существуют также линейные плазмиды, на которые нуклеазы не действуют, поскольку их концевые участки в качестве защиты имеют специфические белки (теломеразы).
  •  Размеры плазмид весьма вариабельны. Например, молекулярная масса одной из самых мелких плазмид, обнаруженных в штаммах бактерий E. coli, составляет 1,5 МД. Клетки псевдомонад могут содержать плазмиды, молекулярная масса которых близка к 500 МД, что составляет около 20 % молекулярной массы хромосомы этих бактерий.
  •  Свойства плазмид:

1) способность к автономной репликации;

2) трансмиссивность (означает способность плазмид передаваться из клетки в клетку при конъюгации);

3) способность многих плазмид  к интеграции в бактериальную хромосому;

4) несовместимость;

5) свойство поверхностное исключение присуще конъюгативным плазмидам;

6) плазмиды придают клеткам различные фенотипические признаки.

  •  Все виды плазмид имеют существенное значение для клетки бактерий по следующим причинам:

1)  Определяют ряд ее фенотипических свойств, позволяющих более гибко и быстро реагировать на изменение условий окружающей среды.

2) Плазмиды бактерий находят широкое применение при теоретических и практических исследованиях (например, применяются в генной инженерии).

3) Играют значительную роль в эволюции бактерий

Рис. 1 - F-плазмида бактерий E.coli

2. Системы рестрикции и модификации бактериальной клетки

  •  Явление рестрикции и модификации было открыто г. Бертани, Дж. Вайглем в 1953 г.  Далее подробно исследовано в конце 1960-х гг. В. Арбером при изучении развития бактериофага λ в различных штаммах кишечной палочки. Им были обнаружены дополнительные механизмы, регулирующие взаимоотношения бактерий и фагов. На основании открытых механизмов, автором была предложена модель «Рестрикции и модификации». (*Рестрикция буквально переводится как «ограничение».) Это теория, которая объясняет механизм ограничения способности роста бактериофагов в бактериях-хозяевах определенного штамма.  

Позже, за открытие рестриктаз и их применение в молекулярной генетике В.Арбер, Х.Смит и Д.Натанс были удостоены в 1978 г.  Нобелевской премии.

  •  Работающая в клетках бактерий система рестрикции и модификации (она обозначается как система R-M) образована двумя специфическими для определенного штамма микроорганизма ферментами – метилазами и рестриктазами. Эти ферменты узнают в ДНК одни и те же определенные короткие последовательности нуклеотидов – сайты. Метилаза, модифицируя определенные основания внутриклеточной ДНК, предохраняет ее от действия собственной клеточной рестриктазы.

Модификация – это процесс пострепликативного изменения структуры ДНК, т.е. обязательно требуется завершение процесса репликации ДНК. Наиболее часто выявляемая модификация – это когда метилазы изменяют ДНК путем метилирования либо гликозилирования аденина либо цитозина.

  •  Названия рестриктаз:

Рестриктазы обозначаются буквой  R   - например, RBsu,  REco. 

      Название рестриктаз определяется родовым и видовым названием бактерии, из которого был выделен фермент. Дополнительное числовое обозначение (римская цифра) отражает хронологию открытия фермента: Bacillus subtilisBsu, Escherichia coliEco.

  •  Различают три типа рестриктаз: I, II, III.

  •  Сайты рестрикции рестриктаз II типа представлены – палиндромами.

Палиндром – это когда в двух цепях ДНК последовательности одинаковые, но идут в противоположных направлениях.

Рис. 2 - Пример палиндрома (или сайта рестрикции)

  •  Примеры действия рестриктаз II типа:

1) В результате действия рестриктаз II типа образуются фрагменты ДНК с тупыми (ровными) концами. Примером таких рестриктаз является фермент Bal I:

2) В результате действия рестриктаз II типа образуются фрагменты ДНК с липкими (неровными) концами. Примером таких рестриктаз является эндонуклеаза EcoR1:

3. Генная инженерия, клонирование генов в клетках микроорганизмов

  •  Генная инженерия – совокупность методов, позволяющих создавать in vitro рекомбинантные молекулы ДНК, с последующей передачей этих новых генетических структур из одного организма в другой. Цель генной инженерии состоит в получении клеток (в первую очередь бактериальных), способных в промышленных масштабах нарабатывать некоторые “человеческие” белки; в возможности преодолевать межвидовые барьеры и передавать отдельные наследственные признаки одних организмов другим (использование в селекции растений, животных).
  •  Схема эксперимента по конструированию рекомбинантной ДНК и клонированию генов в клетках бактерий представлена на рис. 2.

Чужеродную ДНК и ДНК плазмиды расщепляют in vitro с помощью одной и той же рестриктазы. При этом получаются фрагменты с «липкими» концами (одноцепочечные концевые участки с комплементарными основаниями). В результате смешивания таких фрагментов и обработки лигазой образуются плазмиды с включенной в них эукариотической ДНК. Эти гибридные ДНК можно вводить в подходящие бактерии в результате трансформации и размножать, получая многочисленные клоны.

Рис. 2 - Получение и клонирование рекомбинантной ДНК

4. Успехи и проблемы биотехнологии

  •            Биотехнология, в сущности, не что иное как создание суперпродуцентов на основе микробных и растительных или животных клеток, способных синтезировать любые белковые вещества, имеющие практическое значение. Согласно определения Европейской биотехнологической федерации, созданной в 1978 г., биотехнология на основе применения знаний и методов биохимии, микробиологии, генетики, химической технологии, математики, экономики позволяет извлекать выгоду в технологических процессах из свойств микроорганизмов и клеточных структур.
  •    Проблемы биотехнологии можно условно разделить на три группы:

1) Методические. Методических проблем очень много.

2) Экономические. Генно-инженерные методы являются весьма дорогостоящими процедурами. Например, в среднем, создание одного нового сорта ГМР (генетически модифицированных растений) стоит от 50 до 300 млн долларов и занимает от 6 до 12 лет.

3) Этические и политические.

На основании негативного общественного мнения в 1998 г. страны – члены Евросоюза ввели пятилетний мораторий на производство продуктов питания из ГМ-организмов и импорт ГМ-продуктов. Де-юре мораторий был снят в 2003 г., однако до сих пор в Европе коммерчески не производят трансгенные растения.

В 2000 г. был подписан Картахенский протокол по биологической безопасности, ограничивающий распротранение ГМ-организмов. На сегодняшний день к нему присоединились 180 стран.

В 2004 г. Всемирный союз охраны природы признал ГМ-организмы «чужеродными, угрожающими стабильности экосистемы» и обратился к правительствам разных стран с призывом о запрещении их коммерческого использования.

Рис. 3 - Площадь насаждений (в млн га) в 2002 г.; доля в ней трансгенных растений

Перечень фирм,
продукты которых содержат трансгенные компоненты

  •  Kelloggs (Келлогс) — производит готовые завтраки, в том числе кукурузные хлопья
  •  Nestle (Нестле) — производит шоколад, кофе, кофейные напитки, детское питание
  •  Heinz Foods (Хайенц Фудс) — производит кетчупы, соусы
  •  Hersheys (Хёршис) — производит шоколад, безалкогольные напитки
  •  Coca-Cola (Кока-Кола) — Кока-Кола, Спрайт, Фанта, тоник «Кинли»
  •  McDonalds (Макдональдс) — сеть «ресторанов» быстрого питания
  •  Danon (Данон) — производит йогурты, кефир, творог, детское питание
  •  Similac (Симилак) — производит детское питание
  •  Cadbury (Кэдбери) — производит шоколад, какао
  •  Mars (Марс) — производит шоколад Марс, Сникерс, Твикс
  •  PepsiCo (Пепси-Кола) — Пепси, Миринда, Севен-Ап

PAGE  5


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

40676. Эффективность использования основных фондов (основного капитала) на предприятии. Амортизация 24 KB
  Эффективность использования основных фондов основного капитала на предприятии. Амортизация основных фондов есть форма возмещения износа основных фондов путем постепенного переноса ими своей стоимости на произведенный продукт то есть амортизация это денежное выражение физического и морального износа основных фондов. Накапливаемые амортизационные отчисления составляют амортизационный фонд за счет которого производится полное или частичное возмещение стоимости основных фондов. Амортизационный фонд делится на : 1 Часть идущая на...
40677. Оборотный капитал предприятия и эффективность его использования 34.5 KB
  Наличие у предприятия собственного оборотного капитала его состав и структура скорость оборота и эффективность использования оборотного капитала во многом предопределяют финансовое состояние предприятия и устойчивость его положения на рынке. Эффективное использование оборотного капитала играет большую роль в обеспечении нормальной работы предприятия повышении рентабельности хозяйственной деятельности и зависит от множества факторов. Обобщающим показателем эффективности использования оборотного капитала является его рентабельность Рок...
40678. Прибыль предприятия, ее формирование и использование 53.5 KB
  Прибыль предприятия ее формирование и использование. Прибыль в рыночном хозяйстве является вознаграждением такого специфического фактора как предпринимательство. Вовторых мы не можем трактовать прибыль как своеобразную равновесную цену по аналогии с рынком труда капитала и земли. Предприниматель в результате выполнения этих функций вправе претендовать на определенный доход прибыль.
40679. Организационно-правовые формы предприятия и их развитие в современных условиях 44.5 KB
  Организационноправовые формы предприятия и их развитие в современных условиях Фирма хозяйствующий субъект обладающий экономической самостоятельностью для осуществления производственной деятельности с целью получения прибыли. В настоящее время наибольшее распространение получили следующие формы предприятий организаций: индивидуальные предприятия; товарищества; акционерные общества; объединения предприятий ФПГ; государственные предприятия; смешанные предприятия. Преимущества: быстрая организация предприятия открытие и закрытие;...
40680. Эффективность производственно-хозяйственной деятельности предприятия. Показатели экономической эффективности 38.5 KB
  Эффективность производства важнейшая качественная характеристика хозяйствования на всех уровнях. Под экономической эффективностью производства понимается степень использования производственного потенциала которая выявляется соотношением результатов и затрат общественного производства. Чем выше результат при тех же затратах чем быстрее он растет в расчете на единицу затрат общественно необходимого труда или чем меньше затрат на единицу полезного эффекта тем выше эффективность производства. Эффективность производства это показатель...
40681. Производительность труда и ее показатели 27.5 KB
  Под ПРОИЗВОДИТЕЛЬНОСТЬЮ ТРУДА понимается рациональная созидательная производительность людей эффективность которой определяется отношением затраченного рабочего времени и количества произведенной продукции. Производительность труда измеряется количеством продукции вырабатываемой работником в сфере материального производства за единицу рабочего времени или количеством времени которое затрачивается на производство единицы продукции. Повышение производительности труда ведет к увеличению количества продукции производимой в единицу времени...
40682. Себестоимость: структура и пути снижения 29 KB
  Под себестоимостью продукции понимают выраженные в денежной форме текущие затраты предприятия на производство и реализацию продукции. Себестоимость продукции является одним из важнейших качественных показателей эффективности производства который позволяет осуществлять контроль над затратами живого и овеществленного труда и оценивать результаты производственной и хозяйственной деятельности предприятия. Снижение себестоимости продукции способствует увеличению внутрипроизводственных накоплений ускорению расширенного воспроизводства росту...
40683. Трудовые ресурсы и трудовой потенциал страны, региона 36.5 KB
  Подавляющую часть трудовых ресурсов составляет население в трудоспособном возрасте. Основное пополнение трудовых ресурсов происходит и будет происходить в будущем за счет населения моложе трудоспособного возраста. Трудовой потенциал есть совокупность всех трудовых возможностей как отдельного человека так и различных групп работников общества в целом. В отличие от трудовых ресурсов определяющих количество и структуру труда трудовой потенциал характеризует его качество и потенциальные возможности.
40684. Трудовые ресурсы предприятия и эффективность их использования 31.5 KB
  Более развернутое представление о возможностях и способностях рабочей силы дает понятие трудового потенциала как обобщающая характеристика человеческого фактора производства. Вместе с тем понятия трудовых ресурсов рабочей силы и трудового потенциала по существу не нацелены на изучение индивидуальных качеств человека как работника и личности. Поэтому более естественным понятием является человек труда как индивидуализированный элемент трудовых ресурсов владелец рабочей силы обладатель трудового потенциала. ...