71566

Генетическая инженерия, плазмиды

Лекция

Биология и генетика

Плазмиды бактериальных клеток В большинстве случаев плазмиды бактерий представляют собой двухцепочечные суперскрученные ковалентно-замкнутые кольцевые молекулы ДНК. Эти ферменты узнают в ДНК одни и те же определенные короткие последовательности нуклеотидов сайты.

Русский

2014-11-08

199 KB

24 чел.

Тема 22. Генетическая инженерия, плазмиды

1. Плазмиды бактериальных клеток

2. Системы рестрикции и модификации бактериальной клетки

3. Генная инженерия, клонирование генов в клетках микроорганизмов

4. Успехи и проблемы биотехнологии

1. Плазмиды бактериальных клеток

  •  В большинстве случаев плазмиды бактерий представляют собой двухцепочечные суперскрученные ковалентнозамкнутые кольцевые молекулы ДНК. Благодаря такой структуре они не подвергаются действию клеточных нуклеаз. Существуют также линейные плазмиды, на которые нуклеазы не действуют, поскольку их концевые участки в качестве защиты имеют специфические белки (теломеразы).
  •  Размеры плазмид весьма вариабельны. Например, молекулярная масса одной из самых мелких плазмид, обнаруженных в штаммах бактерий E. coli, составляет 1,5 МД. Клетки псевдомонад могут содержать плазмиды, молекулярная масса которых близка к 500 МД, что составляет около 20 % молекулярной массы хромосомы этих бактерий.
  •  Свойства плазмид:

1) способность к автономной репликации;

2) трансмиссивность (означает способность плазмид передаваться из клетки в клетку при конъюгации);

3) способность многих плазмид  к интеграции в бактериальную хромосому;

4) несовместимость;

5) свойство поверхностное исключение присуще конъюгативным плазмидам;

6) плазмиды придают клеткам различные фенотипические признаки.

  •  Все виды плазмид имеют существенное значение для клетки бактерий по следующим причинам:

1)  Определяют ряд ее фенотипических свойств, позволяющих более гибко и быстро реагировать на изменение условий окружающей среды.

2) Плазмиды бактерий находят широкое применение при теоретических и практических исследованиях (например, применяются в генной инженерии).

3) Играют значительную роль в эволюции бактерий

Рис. 1 - F-плазмида бактерий E.coli

2. Системы рестрикции и модификации бактериальной клетки

  •  Явление рестрикции и модификации было открыто г. Бертани, Дж. Вайглем в 1953 г.  Далее подробно исследовано в конце 1960-х гг. В. Арбером при изучении развития бактериофага λ в различных штаммах кишечной палочки. Им были обнаружены дополнительные механизмы, регулирующие взаимоотношения бактерий и фагов. На основании открытых механизмов, автором была предложена модель «Рестрикции и модификации». (*Рестрикция буквально переводится как «ограничение».) Это теория, которая объясняет механизм ограничения способности роста бактериофагов в бактериях-хозяевах определенного штамма.  

Позже, за открытие рестриктаз и их применение в молекулярной генетике В.Арбер, Х.Смит и Д.Натанс были удостоены в 1978 г.  Нобелевской премии.

  •  Работающая в клетках бактерий система рестрикции и модификации (она обозначается как система R-M) образована двумя специфическими для определенного штамма микроорганизма ферментами – метилазами и рестриктазами. Эти ферменты узнают в ДНК одни и те же определенные короткие последовательности нуклеотидов – сайты. Метилаза, модифицируя определенные основания внутриклеточной ДНК, предохраняет ее от действия собственной клеточной рестриктазы.

Модификация – это процесс пострепликативного изменения структуры ДНК, т.е. обязательно требуется завершение процесса репликации ДНК. Наиболее часто выявляемая модификация – это когда метилазы изменяют ДНК путем метилирования либо гликозилирования аденина либо цитозина.

  •  Названия рестриктаз:

Рестриктазы обозначаются буквой  R   - например, RBsu,  REco. 

      Название рестриктаз определяется родовым и видовым названием бактерии, из которого был выделен фермент. Дополнительное числовое обозначение (римская цифра) отражает хронологию открытия фермента: Bacillus subtilisBsu, Escherichia coliEco.

  •  Различают три типа рестриктаз: I, II, III.

  •  Сайты рестрикции рестриктаз II типа представлены – палиндромами.

Палиндром – это когда в двух цепях ДНК последовательности одинаковые, но идут в противоположных направлениях.

Рис. 2 - Пример палиндрома (или сайта рестрикции)

  •  Примеры действия рестриктаз II типа:

1) В результате действия рестриктаз II типа образуются фрагменты ДНК с тупыми (ровными) концами. Примером таких рестриктаз является фермент Bal I:

2) В результате действия рестриктаз II типа образуются фрагменты ДНК с липкими (неровными) концами. Примером таких рестриктаз является эндонуклеаза EcoR1:

3. Генная инженерия, клонирование генов в клетках микроорганизмов

  •  Генная инженерия – совокупность методов, позволяющих создавать in vitro рекомбинантные молекулы ДНК, с последующей передачей этих новых генетических структур из одного организма в другой. Цель генной инженерии состоит в получении клеток (в первую очередь бактериальных), способных в промышленных масштабах нарабатывать некоторые “человеческие” белки; в возможности преодолевать межвидовые барьеры и передавать отдельные наследственные признаки одних организмов другим (использование в селекции растений, животных).
  •  Схема эксперимента по конструированию рекомбинантной ДНК и клонированию генов в клетках бактерий представлена на рис. 2.

Чужеродную ДНК и ДНК плазмиды расщепляют in vitro с помощью одной и той же рестриктазы. При этом получаются фрагменты с «липкими» концами (одноцепочечные концевые участки с комплементарными основаниями). В результате смешивания таких фрагментов и обработки лигазой образуются плазмиды с включенной в них эукариотической ДНК. Эти гибридные ДНК можно вводить в подходящие бактерии в результате трансформации и размножать, получая многочисленные клоны.

Рис. 2 - Получение и клонирование рекомбинантной ДНК

4. Успехи и проблемы биотехнологии

  •            Биотехнология, в сущности, не что иное как создание суперпродуцентов на основе микробных и растительных или животных клеток, способных синтезировать любые белковые вещества, имеющие практическое значение. Согласно определения Европейской биотехнологической федерации, созданной в 1978 г., биотехнология на основе применения знаний и методов биохимии, микробиологии, генетики, химической технологии, математики, экономики позволяет извлекать выгоду в технологических процессах из свойств микроорганизмов и клеточных структур.
  •    Проблемы биотехнологии можно условно разделить на три группы:

1) Методические. Методических проблем очень много.

2) Экономические. Генно-инженерные методы являются весьма дорогостоящими процедурами. Например, в среднем, создание одного нового сорта ГМР (генетически модифицированных растений) стоит от 50 до 300 млн долларов и занимает от 6 до 12 лет.

3) Этические и политические.

На основании негативного общественного мнения в 1998 г. страны – члены Евросоюза ввели пятилетний мораторий на производство продуктов питания из ГМ-организмов и импорт ГМ-продуктов. Де-юре мораторий был снят в 2003 г., однако до сих пор в Европе коммерчески не производят трансгенные растения.

В 2000 г. был подписан Картахенский протокол по биологической безопасности, ограничивающий распротранение ГМ-организмов. На сегодняшний день к нему присоединились 180 стран.

В 2004 г. Всемирный союз охраны природы признал ГМ-организмы «чужеродными, угрожающими стабильности экосистемы» и обратился к правительствам разных стран с призывом о запрещении их коммерческого использования.

Рис. 3 - Площадь насаждений (в млн га) в 2002 г.; доля в ней трансгенных растений

Перечень фирм,
продукты которых содержат трансгенные компоненты

  •  Kelloggs (Келлогс) — производит готовые завтраки, в том числе кукурузные хлопья
  •  Nestle (Нестле) — производит шоколад, кофе, кофейные напитки, детское питание
  •  Heinz Foods (Хайенц Фудс) — производит кетчупы, соусы
  •  Hersheys (Хёршис) — производит шоколад, безалкогольные напитки
  •  Coca-Cola (Кока-Кола) — Кока-Кола, Спрайт, Фанта, тоник «Кинли»
  •  McDonalds (Макдональдс) — сеть «ресторанов» быстрого питания
  •  Danon (Данон) — производит йогурты, кефир, творог, детское питание
  •  Similac (Симилак) — производит детское питание
  •  Cadbury (Кэдбери) — производит шоколад, какао
  •  Mars (Марс) — производит шоколад Марс, Сникерс, Твикс
  •  PepsiCo (Пепси-Кола) — Пепси, Миринда, Севен-Ап

PAGE  5


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

38545. Исследования динамики воображения при использовании эвристических методов обучения у студентов специальности Связи с общественностью ЧГПУ им. И.Я. Яковлева 222 KB
  Донесение и работа с информацией, влияние на определенные слои общества, а также проталкивание, лоббирование некоторых своих, личных интересов, как раз и составляет основу деятельности PR. Именно поэтому на сегодняшний день актуально изучение эвристических методы в работе PR - специалиста.
38546. Технология возделывания картофеля в условиях СПК “Старый Лепель” Лепельского района 545 KB
  Технология возделывания картофеля в условиях СПК âСтарый Лепельâ Лепельского района24 5. Мучнистая рассыпчатая консистенция отварного картофеля приготовленного в домашних условиях критерий отбора при покупке. Поэтому нужно ориентироваться на производство типичного картофеля не пытаясь подменять продукцию немецких голландских польских картофелеводов. Сбыт качественного картофеля не вызывает серьезных затруднений.
38547. Решение задач организации правильного монтажа, технического обслуживания и ремонта электротехнических изделий 72.5 KB
  Развитие производства базируется на современных технологиях, широко использующих электрическую энергию. В связи с этим возрастают требования к качеству электрической энергии, ее экономному использованию и рациональному расходованию материальных ресурсов при сооружении систем электроснабжения. Отсюда – повышение роли инженеров-электриков.
38548. Анализ деятельности продюсера в современной отечественной музыкальной индустрии 49 KB
  Стремительное развитие в России в последнее пятнадцатилетие рыночных отношений глобальное реформирование всех сфер жизни общества в том числе сферы культуры и массовых коммуникаций привели к появлению новых видов профессиональной деятельности. Формирование рыночных механизмов на отечественной сцене тесно связано со становлением особого вида предпринимательской деятельности телевизионным продюсированием играющим ключевую роль в развитии российской аудиовизуальной индустрии. Поэтому у института продюсерской деятельности с одной стороны...
38549. Унификация и типизация технологических процессов (ТП) 60.5 KB
  Эффективное применение ГАП и ИПК в единичном и серийном производствах зависит главным образом от устойчивости (стабильности) производственного процесса. Продукция машиностроительных и приборостроительных заводов характеризуется сменой изделий
38550. Разработка и реализация управленческих решений на примере Межрайонной ИФНС России по крупнейшим налогоплательщикам по Республике Башкортостан 333.5 KB
  2 Анализ управленческих решений как составная часть процесса принятия решения Межрайонной ИФНС России по крупнейшим налогоплательщикам по РБ 2.3 Механизм и методы принятия решения Межрайонной ИФНС России по крупнейшим налогоплательщикам по РБ Глава 3 Совершенствование системы принятия решений и оценка ее эффективности 3. В решениях фиксируется вся совокупность отношений возникающих в процессе трудовой деятельности и управления организацией. Лица наделенные правом принимать решения или организовывать их реализацию называются субъектами...
38551. ШЛЯХИ ВДОСКОНАЛЕННЯ МАРКЕТИНГОВОЇ ДІЯЛЬНОСТІ ТОВ «ЧАЙКА» 1.47 MB
  Ефективність управління маркетинговою діяльністю фірми визначається досягненням концепцією маркетингової взаємодії таких цілей: максимально можливого рівня споживання; максимально широкий вибір товарів, які надаються споживачам; максимальне підвищення якості життя суспільства в цілому та його окремих членів
38552. Розробка заходів щодо зниження викидів прокатного виробництва на стан навколишнього середовища на прикладі прокатного цеху ВАТ «Донецький Металургійний завод» 1.45 MB
  Аналіз складу викидів в атмосферу свідчить що в 2008 році в порівнянні з 2000 роком знизилися викиди оксиду вуглецю на 12 діоксиду сірки на 44 і пилу на 37 однак при цьому зросли викиди зєднань азоту на 48 . Жителі промислових центрів дихають не тільки пилом але і важкими металами фенолом фтористим воднем бензапіреном діоксидом азоту і іншими сполуками. По найбільш небезпечних інгредієнтах: діоксиду азоту пилу бензапірену і формальдегіду рівень забруднення атмосфери залишається високим. Як паливо використовується...
38553. Информационное и программное обеспечение для решения задач автоматизации хранения и обработки информации при организации работы парабанковского предприятия 2.58 MB
  Объединение компьютеров в сети позволило значительно повысить производительность труда. Именно здесь происходит соединение трех основных элементов этого процесса и достигается его главная цель производства предметов труда оказание услуг либо техникоэкономическое обеспечение и управление этими процессами. От того как организованы рабочие места во многом зависит эффективность использования самого труда орудий и средств производства и соответственно производительность труда себестоимость выпускаемой продукции ее качество и многие...