81432

Методы количественного измерения белков. Индивидуальные особенности белкового состава органов. Изменения белкового состава органов при онтогенезе и болезнях

Доклад

Биология и генетика

Индивидуальные особенности белкового состава органов. Изменения белкового состава органов при онтогенезе и болезнях. Для определения количества белка в образце используется ряд методик: Биуретовый метод один из колориметрических методов количественного определения белков в растворе.

Русский

2015-02-20

110.81 KB

19 чел.

Методы количественного измерения белков. Индивидуальные особенности белкового состава органов. Изменения белкового состава органов при онтогенезе и болезнях.

Для определения количества белка в образце используется ряд методик:

  1.  Биуретовый метод — один из колориметрических методов количественного определения белков в растворе. Разработан в 1949 году Горналлом, Бардавиллом и Дэвидом, ныне мало используется в биохимической лабораторной практике (за исключением медицинских анализов на белок) из-за низкой чувствительности. Основан на образовании биуретового комплекса (имеет фиолетовый цвет) пептидных связей белков с двухвалентными ионами меди. В методе используют т. н. биуретовый реактив, состоящий из KOH, CuSO4 и цитрата натрия (или тартрата натрия). В образовавшемся комплексе медь связана с 4 азотами координационными связями, а с 2 кислородами — электростатическими. Полноценный комплекс образуется лишь с пептидами, состоящими более чем из 4 остатков.
  2.  Метод Лоури - основан на образовании окрашенных продуктов ароматических аминокислот с реактивом Фолина в сочетании с биуретовой реакцией на пептидные связи. Метод характеризуется высокой чувствительностью. На развитие окраски влияет большое количество веществ: компоненты буферных систем восстановители, комплексоны, детергенты и др. В связи с этим при построении калибровочного графика для определения белка по Лоури в растворитель для стандартного белка необходимо включать все компоненты, содержащиеся в анализируемых пробах. В некоторых случаях целесообразно предварительное осаждение белков из растворов, например трихлоруксусной кислотой, с последующим растворением их в щелочных растворах, или очистка белковых растворов от низкомолекулярных компонентов путем диализа или гель-фильтрации.
  3.  Определение по азоту. Определение основано на том, что содержание азота в большинстве белков практически одинаково и может быть принято равным 16%. По количеству определенного азота находят количество белка в пробе. При нагревании органического соединения с концентрированной серной (хлорной) кислотой происходит его минерализация, азот переходит в сернокислый аммоний (перхлорат аммония), и его можно определить количественно.
  4.  Спектрометрический метод - Метод основан на способности ароматических аминокислот (триптофана, тирозина и в меньшей степени фенилаланина) поглощать ультрафиолетовый свет с максимумом при 280 нм. Измеряя величину оптической плотности при этой длине волны, находят количество белка в растворе. Поскольку белки отличаются по содержанию ароматических аминокислот, их поглощение в ультрафиолетовой области спектра может сильно различаться.

 

Наиболее богаты белковыми веществами ткани и органы животных. Источником белка являются также микроорганизмы и растения. Большинство белков хорошо растворимо в воде. Некоторые органические вещества, выделенные из хряща, волос, ногтей, рогов, костной ткани и нерастворимые в воде, также были отнесены к белкам, поскольку по своему химическому составу оказались близки к белкам мышечной ткани, сыворотки крови, яйца. В мышцах, легких, селезенке, почках на долю белков приходится более 70–80% от сухой массы, а во всем теле человека – 45% от сухой массы. В отличие от животных тканей в растениях содержится значительно меньше белков . Для изучения химического состава, строения и свойств белков их обычно выделяют или из тканей, или из культивируемых клеток, или биологических жидкостей, например сыворотки крови, молока, мышц, печени, кожи и др. Элементный состав белков в пересчете на сухое вещество представлен 50–54% углерода, 21–23% кислорода, 6,5–7,3% водорода, 15–17% азота и до 0,5% серы. В составе некоторых белков присутствуют в небольших количествах фосфор, железо, марганец, магний, йод и др.

Таким образом, помимо углерода, кислорода и водорода, входящих в состав почти всех органических полимерных молекул, обязательным компонентом белков является азот, в связи с чем белки принято обозначать как азотсодержащие органические вещества. Содержание азота более или менее постоянно во всех белках (в среднем 16%), поэтому иногда определяют количество белка в биологических объектах по содержанию белкового азота.

Белковый состав организма здорового взрослого человека относительно постоянен, хотя возможны изменения количества отдельных белков в органах и тканях в зависимости от состава пищи и режима питания, от физиологической активности человека, биологических ритмов. В процессе развития многоклеточного организма, особенно на стадиях дифференцировки клеток, белковый состав значительно изменяется. Для каждого типа специализированных клеток характерно появление специфических белков, которые определяют особенности их биологических функций. Так, только в эритроцитах есть гемоглобин, осуществляющий транспорт кислорода, к тканям, а в клетках сетчатки глаза - белок родопсин, необходимый для улавливания фотонов света. Кроме того, специализированные клетки отличаются и количеством белков, присутствующих практически во всех или во многих клетках организма. При различных заболеваниях происходит изменение белкового состава тканей. Эти изменения называются протеинопатиями. Различают наследственные и приобретённые протеинопатии.

Наследственные протеинопатии развиваются в результате повреждений в генетическом аппарате данного индивидуума. Какой-либо белок не синтезируется вовсе или синтезируется, но его первичная структура изменена. В зависимости от роли дефектного белка в жизнедеятельности организма, от степени нарушения конформации и функции белков, от гомо- или гетерозиготности индивидуума по этому белку наследственные протеинопатии могут вызывать болезни, протекающие с различной степенью тяжести, вплоть до летального исхода ещё до рождения или в первые месяцы после рождения.

Любая болезнь сопровождается изменением белкового состава организма, т.е. развивается приобретённая протеинопатия. При этом первичная структура белков не нарушается, а обычно происходит количественное изменение белков, особенно в тех органах и тканях, в которых развивается патологический процесс. В некоторых случаях приобретённые протеинопатии развиваются в результате изменения условий, в которых функционируют белки. Иногда в результате болезни повышается уровень метаболитов в клетках и сыворотке крови, что приводит к модификации некоторых белков и нарушению их функции. Так, повышенные концентрации глюкозы в крови при сахарном диабете приводят к неферментативному присоединению её к белкам (гликозилированию белков). Кроме того, из клеток повреждённого органа в кровь могут выходить белки, которые в норме определяются там лишь в следовых количествах. При различных заболеваниях часто используют биохимические исследования белкового состава крови для уточнения клинического диагноза.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

27368. Значение уроков изобразительного искусства, музыки в системе начального общего образования 39 KB
  Исполнительская в интерпретации муз произведений = осознанный интуитивный выбор средств. Виды: апение сольное хоровое пр допой досочини муз диалоги пропой свое имя. Б музритмич Д выразит движения театр.
27369. Сравнительная характеристика современных программ и учебно-методических комплектов по изобразительному искусству, музыке для начальной школы с учетом требований ФГОС НОО 30 KB
  УМК Школа 2100 Изобразительное искусство О. УМК Классическая начальная школа Изобразительное искусство В. УМК Начальная школа XXI века Музыка О. умк Гармония Н.
27370. Кризис подросткового возраста 29 KB
  Необходимы занятия спортом для нормального развития организма. Поэтому именно перестройка всей познавательной сферы в связи с развитием теоретического мышления составляет основное содержание умственного развития в младшем школьном возрасте. Чаще всего учебные трудности детей в средней школе особенно в IV классе вызываются именно недостаточным уровнем их развития. в этот переходный период как и на любой ступени возрастного развития школьников проявляется потребность и необходимость в общей положительной оценке себя в целом вне зависимости...
27371. Структура общения 45.5 KB
  Педагогическое общение специфическая форма общения имеющая свои особенности и в то же время подчиняющаяся общим психологическим закономерностям присущим общению как форме взаимодействия человека с другими людьми включающей коммуникативный интерактивный и перцептивный компоненты. Недостаток и ограничение общения замедляют и обедняют развитие ребёнка.[3] Проблеме педагогического общения посвящено значительное количество исследований анализ которых обнаруживает несколько аспектов в её изучении. Структура общения: Коммуникативный компонент...
27372. Социальная ситуация: смена статуса, появление учебной деятельности 34.5 KB
  Изменение внутренней позиции ребенка обесценивание игры как ведущей деятеьности прошлого периода стремление к новому. Как развивать личность: развивать самостоятельность произвольность знает что надо и что для этого делать преобладание мотива надо над мотивом хочу поддержка начинаний ребенка рефлексия анализ планирование обеспечение комфортной обстановки формировать внутренний план действий Работа с родителями: выделяют 2 вида подготовки ребенка к школе специальную и общую. Необходимо физически подготовить ребенка: общее...
27373. Неуспеваемость 32.5 KB
  Содержание и методы обучения повышают а иногда задерживают понижают возможности учащихся. И этот фактор так или иначе учитывается при определении содержания обучения. Одни и те же условия обучения и воспитания поразному воздействуют на детей воспитывающихся в разных условиях имеющих различия в организме в общем развитии.
27374. Норма - сочетание личности и социума 42 KB
  Социум обязан обеспечивать норму Среднестатистическая норма уровень психологического развития человека который соответствует средним качественноколичественным показателям полученным при обследовании представителей популяции людей того же возраста пола культуры. Попадание в эту зону означает уровень развития свойственный не менее 68 лиц данной группы. Функциональная норма индивидуальная в её основе лежит представление о непоторимости пути развития каждого человека и любое его отклонение можно считать индивидуальным отклонением....
27375. Мораль. Формирование морали 34 KB
  Ценность человеческой жизни меняется в зависимости от ценности вещей и статуса или других признаков человека. Ценность жизни человека определяется чувствами связанных с ним людей. Ценность человеческой жизни определяется вкладом человека в общий прогресс человечества. Главной проблемой является не следование предписаниям а отыскание смысла жизни.
27376. Профессиональные свойства и характеристики личности учителя 40.5 KB
  Как и любой вид деятельности деятельность педагога имеет свою структуру Зимняя И. Предмет педагогической деятельности. Продукт и результат педагогической деятельности. Каждый вид деятельности имеет свой предмет точно также и педагогическая деятельность имеет свой.