81432

Методы количественного измерения белков. Индивидуальные особенности белкового состава органов. Изменения белкового состава органов при онтогенезе и болезнях

Доклад

Биология и генетика

Индивидуальные особенности белкового состава органов. Изменения белкового состава органов при онтогенезе и болезнях. Для определения количества белка в образце используется ряд методик: Биуретовый метод один из колориметрических методов количественного определения белков в растворе.

Русский

2015-02-20

110.81 KB

19 чел.

Методы количественного измерения белков. Индивидуальные особенности белкового состава органов. Изменения белкового состава органов при онтогенезе и болезнях.

Для определения количества белка в образце используется ряд методик:

  1.  Биуретовый метод — один из колориметрических методов количественного определения белков в растворе. Разработан в 1949 году Горналлом, Бардавиллом и Дэвидом, ныне мало используется в биохимической лабораторной практике (за исключением медицинских анализов на белок) из-за низкой чувствительности. Основан на образовании биуретового комплекса (имеет фиолетовый цвет) пептидных связей белков с двухвалентными ионами меди. В методе используют т. н. биуретовый реактив, состоящий из KOH, CuSO4 и цитрата натрия (или тартрата натрия). В образовавшемся комплексе медь связана с 4 азотами координационными связями, а с 2 кислородами — электростатическими. Полноценный комплекс образуется лишь с пептидами, состоящими более чем из 4 остатков.
  2.  Метод Лоури - основан на образовании окрашенных продуктов ароматических аминокислот с реактивом Фолина в сочетании с биуретовой реакцией на пептидные связи. Метод характеризуется высокой чувствительностью. На развитие окраски влияет большое количество веществ: компоненты буферных систем восстановители, комплексоны, детергенты и др. В связи с этим при построении калибровочного графика для определения белка по Лоури в растворитель для стандартного белка необходимо включать все компоненты, содержащиеся в анализируемых пробах. В некоторых случаях целесообразно предварительное осаждение белков из растворов, например трихлоруксусной кислотой, с последующим растворением их в щелочных растворах, или очистка белковых растворов от низкомолекулярных компонентов путем диализа или гель-фильтрации.
  3.  Определение по азоту. Определение основано на том, что содержание азота в большинстве белков практически одинаково и может быть принято равным 16%. По количеству определенного азота находят количество белка в пробе. При нагревании органического соединения с концентрированной серной (хлорной) кислотой происходит его минерализация, азот переходит в сернокислый аммоний (перхлорат аммония), и его можно определить количественно.
  4.  Спектрометрический метод - Метод основан на способности ароматических аминокислот (триптофана, тирозина и в меньшей степени фенилаланина) поглощать ультрафиолетовый свет с максимумом при 280 нм. Измеряя величину оптической плотности при этой длине волны, находят количество белка в растворе. Поскольку белки отличаются по содержанию ароматических аминокислот, их поглощение в ультрафиолетовой области спектра может сильно различаться.

 

Наиболее богаты белковыми веществами ткани и органы животных. Источником белка являются также микроорганизмы и растения. Большинство белков хорошо растворимо в воде. Некоторые органические вещества, выделенные из хряща, волос, ногтей, рогов, костной ткани и нерастворимые в воде, также были отнесены к белкам, поскольку по своему химическому составу оказались близки к белкам мышечной ткани, сыворотки крови, яйца. В мышцах, легких, селезенке, почках на долю белков приходится более 70–80% от сухой массы, а во всем теле человека – 45% от сухой массы. В отличие от животных тканей в растениях содержится значительно меньше белков . Для изучения химического состава, строения и свойств белков их обычно выделяют или из тканей, или из культивируемых клеток, или биологических жидкостей, например сыворотки крови, молока, мышц, печени, кожи и др. Элементный состав белков в пересчете на сухое вещество представлен 50–54% углерода, 21–23% кислорода, 6,5–7,3% водорода, 15–17% азота и до 0,5% серы. В составе некоторых белков присутствуют в небольших количествах фосфор, железо, марганец, магний, йод и др.

Таким образом, помимо углерода, кислорода и водорода, входящих в состав почти всех органических полимерных молекул, обязательным компонентом белков является азот, в связи с чем белки принято обозначать как азотсодержащие органические вещества. Содержание азота более или менее постоянно во всех белках (в среднем 16%), поэтому иногда определяют количество белка в биологических объектах по содержанию белкового азота.

Белковый состав организма здорового взрослого человека относительно постоянен, хотя возможны изменения количества отдельных белков в органах и тканях в зависимости от состава пищи и режима питания, от физиологической активности человека, биологических ритмов. В процессе развития многоклеточного организма, особенно на стадиях дифференцировки клеток, белковый состав значительно изменяется. Для каждого типа специализированных клеток характерно появление специфических белков, которые определяют особенности их биологических функций. Так, только в эритроцитах есть гемоглобин, осуществляющий транспорт кислорода, к тканям, а в клетках сетчатки глаза - белок родопсин, необходимый для улавливания фотонов света. Кроме того, специализированные клетки отличаются и количеством белков, присутствующих практически во всех или во многих клетках организма. При различных заболеваниях происходит изменение белкового состава тканей. Эти изменения называются протеинопатиями. Различают наследственные и приобретённые протеинопатии.

Наследственные протеинопатии развиваются в результате повреждений в генетическом аппарате данного индивидуума. Какой-либо белок не синтезируется вовсе или синтезируется, но его первичная структура изменена. В зависимости от роли дефектного белка в жизнедеятельности организма, от степени нарушения конформации и функции белков, от гомо- или гетерозиготности индивидуума по этому белку наследственные протеинопатии могут вызывать болезни, протекающие с различной степенью тяжести, вплоть до летального исхода ещё до рождения или в первые месяцы после рождения.

Любая болезнь сопровождается изменением белкового состава организма, т.е. развивается приобретённая протеинопатия. При этом первичная структура белков не нарушается, а обычно происходит количественное изменение белков, особенно в тех органах и тканях, в которых развивается патологический процесс. В некоторых случаях приобретённые протеинопатии развиваются в результате изменения условий, в которых функционируют белки. Иногда в результате болезни повышается уровень метаболитов в клетках и сыворотке крови, что приводит к модификации некоторых белков и нарушению их функции. Так, повышенные концентрации глюкозы в крови при сахарном диабете приводят к неферментативному присоединению её к белкам (гликозилированию белков). Кроме того, из клеток повреждённого органа в кровь могут выходить белки, которые в норме определяются там лишь в следовых количествах. При различных заболеваниях часто используют биохимические исследования белкового состава крови для уточнения клинического диагноза.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

39575. Сфера исследования экономики 21.07 KB
  Объект исследования экономики – это жизнедеятельность экономического человека, группы людей и государства, их «экономическое поведение» и связи с той экономической средой, в которой они находятся.
39576. Психологические особенности политической активности 28.38 KB
  Основой различий между активными и пассивными участниками политической жизни выступают мотивы и установки в соответствии с которыми люди включаются в политическую деятельность. Эгоцентрические это те мотивы которые концентрируются на собственной личности индивида ориентируют его на следование в политической деятельности узколичностным целям. Чтобы разобраться в происходящем выявить разные формы политической активности и политического участия во властных отношениях политическая психология делает определенные обобщения.
39577. Психологические аспекты оппозиционного поведения 1.18 MB
  Чтобы её выработать необходимо иметь представление о явлении оппозиционного поведения и о его носителях. На примере Ульяновской области можно сказать что в борьбу с политическим экстремизмом вкладываются колоссальные ресурсы. Таким образом не вызывает сомнений то что под все эти меры должна быть положена твёрдая научная база. Стоит отметить что проектами по исследованию оппозиции занимается один из фондов исследования общественного мнения что также свидетельствует о наличие интереса к данной теме.
39578. ОСНОВЫ ПОЛИТИЧЕСКОЙ ПСИХОЛОГИИ 2.62 MB
  Данная книга представляет собой впервые осуществленное в России систематическое учебное изложение основных слагаемых новой науки, политической психологии. От ее предмета и задач, через психологию личности, малых и больших групп, а также психологии масс в политике, до исследовательских методов и прикладного использования, читателю предстает широкая панорама роли и потенциала «человеческого фактора» в политике
39579. Электрификация коровника на 200 голов с разработкой кормораздачи в ЗАО «Овощевод» 507.5 KB
  Автоматизация производства это применение автоматических и автоматизированных устройств и систем для полного или частичного освобождения человека от выполняемой им работы по управления и контролю при получении обработке передаче и использовании энергии материалов информации и др. Эти процессы тесно связаны с применением индустриальной технологии производства в сельском хозяйстве совершенствованием планирования и управления. пуск и остановка первичных двигателей регулировка напряжения в сети подача топлива защита от коротких замыканий...
39580. Расчет электрификации коровника на 200 голов с разработкой кормораздачи в ЗАО «Овощевод» 1.68 MB
  Сельскохозяйственная – одна из основных и жизненно важных отраслей народного хозяйства. В нашей стране на эту отрасль приходится около 4% стоимости основных фондов; в ней занято 7,2 млн. человек, что составляет 11% работающего населения. С/х дает 5,4% ВВП, производит продукты питания для населения и сырье для перерабатывающей промышленности.
39581. Связь политически активной студенческой молодёжи как формальность и неформальность с уровнем социальной зрелости 415 KB
  От уровня социальной зрелости зависит нравственнополитический климат и культура нынешнего и будущего общества. не гарантирует высокий уровень социальной зрелости. Эти приписываемые социальнопсихологические признаки по праву можно считать признаками социальной зрелости. Экспериментальные исследования в области социальной зрелости как правило сводятся к изучению школьников и выпускников школ.
39582. Проект электрификации телятника на 25 голов с разработкой навозоудаления в ЗАО «Красный холм» РМО 578.63 KB
  В последнее время принят ряд указов, законов, нормативных актов, которые создают благоприятные условия для развития всех форм хозяйствования на селе в условиях рыночных отношений. Реализация этих решений по выходу с/х из кризиса основана на введении новых форм организации производства
39583. Организация водоохладительной установки АВ-30 1.38 MB
  Повышение производительности труда в сельском хозяйстве а следовательно и эффективности производства возможно лишь при условии максимальной механизации и автоматизации при неуклонном сокращении доли ручного труда. Сокращение доли тяжёлого и малоквалифицированного физического труда непременное условие экономического роста. Рост технической и энергетической вооруженности сельскохозяйственного труда развитие научных исследований с использованием современной научной аппаратуры достижений полупроводниковой микроэлектроники и...