88438

Возбудитель холеры

Курсовая

Биология и генетика

Выделяют 2 типа эпидемий холеры: эпидемии-вспышки с едиными источником инфекции и путями распространения характеризующихся одномоментным появлением большого числа больных и вялотекущие эпидемии с небольшой постоянной заболеваемостью и трудно выявляемыми путями передачи возбудителя.

Русский

2015-04-30

136.5 KB

1 чел.

Федеральное агентство по образованию

Министерство образование и науки Чеченской Республики Чеченский Государственный Университет

Факультет: Биолого-Химический

Курсовая работа

На тему: «Возбудитель холеры»

Руководитель: Хасанова Разита Исхаковна

Выполнила: студентка 3 курса очно

Грозный 2014г

Содержание

Введение…………………………………………………………………….…….3

Глава I. Возбудитель холеры …………………. ………………………………4

1.1. Получение плазмид…………………………………………………………...6

1.2. Физические характеристики плазмид. Размеры и численность…….8

Глава II. Собственное исследование…………………………………………20

Заключении……………………………………………………………………..22

Список использованной литературы………………………………………..24

Введение

Холера (греч. choléra), острое инфекционное заболевание человека, имеющее тенденцию к эпидемическому распространению; относится к карантинным болезням. Холера известна с древнейших времён. Исторический эндемический очаг – бассейны рек Ганга и Брахмапутры в Индии, что обусловлено влажным климатом, высокой плотностью населения, использованием необеззараженной воды для питья. Из Индии Холера заносилась в другие страны, вызывая опустошительные эпидемии. Начиная с 1816 года, известно семь масштабных эпидемий холеры, каждая из которых возникала в Индии. И лишь в 1883–1896 годы, Кох – немецкий микробиолог, обнаружил возбудитель холеры – классический холерный вибрион.

Для предотвращения заражения необходимо соблюдать меры предосторожности такие, как: мытье рук с мылом перед едой и приготовлением пищи, после туалета. Для питья необходимо употреблять воду лишь хорошего качества, очищенную при помощи фильтров или прокипяченную. Ни в коем случае нельзя заглатывать воду при купании в различных открытых водоемах. При первых симптомах инфекции необходимо сразу же обратиться к врачу.

Хронологическая таблица пандемий холеры

Порядковый номер пандемии

Период распространения (в годах)

Краткая характеристика

1

1817–1829

Холера впервые вышла за пределы своего исторического очага. Способствовали выходу холеры колониальные войны Англии на среднем Востоке. Заболевание распространилось на Аравию, Цейлон, Японию и Китай. Затем достигло Ирана, Турции, Кавказа. В 1829 году холера появилась в России (Оренбург).

2

1830–1837

Холера через Россию и Польшу постепенно охватила Европу. Морским путем завезена в Канаду, Северную Америку, Северную Африку и Австралию.

3

1847–1861

Возвратившись в Европу, холера с новой силой охватила в 1949 году Австрию, Венгрию, Галицию, Словакию. Только в Галиции заболело 107990 человек, из них умерло 42746 человек. К особенностям этой эпидемии относят зимнюю эпидемию холеры в России (1847 год).

4

1863–1872

В связи с развитием пароходного морского сообщения, открытием Суэцкого канала и расширением сети железных дорог, холера получила новые короткие и быстрые пути распространения. Холера охватила весь мир.

5

1883–1895

Впервые на пути распространения холеры встали новые методы профилактики, которые были основаны на открытии Р. Кохом возбудителя заболевания. Наибольшая активность пандемии отмечена в странах с неудовлетворитеьным санитарным состоянием – Россия, Северная и Центральная Африка.

6

1900–1927

Началась в Аравии (Мекка) и до начала первой мировой войны характеризовалась вялым течением. Практически не коснулась стран западного полушария. На Украине была ликвидирована в 1923 году.

7

Началась в 1961 году и сохраняется по настоящее время

Начальным пунктом распространения считают острова Индонезии. За период 1961–1972 гг. эпидемические очаги холеры охватили более, чем 50 стран мира. С 1970 года регистрируется на Украине.

Глава I. Возбудитель холеры

1.1.Этиология

Возбудитель  подвижная грамотрицательная бактерия Vibrio cholerae (холерный вибрион, или запятаяКоха). Выделяют 3 типа возбудителей Vibrio cholerae asiaticae (возбудитель классической холеры), Vibriocholerae eltor (возбудитель холеры Эль-Тор) и серовар 0,Т(Бенгал) (возбудитель холеры в Юго-осточнойАзии). Подвижность бактерий весьма выражена, и её определение (методом висячей или раздавленнойкапли) важный диагностический признак. Деление клеток происходит очень быстро и на щелочной пептонной воде возбудитель даёт видимый невооружённым глазом рост уже через 6 ч.
         Эпидемиология

Холера типичная кишечная инфекция. Единственный природный резервуар — больные ибактерионосители, основной путь дередачи — фекальнооральный, реже контактный. Факторы передачи:пищевые продукты, вода, объекты окружающей среды. Определённую роль играют мухи, способныепереносить возбудитель с испражнений на пищевые продукты. Несмотря на то, что выделение возбудителя вокружающую среду происходит в течение короткого времени, большое число скрытых форм поддерживаетциркуляцию возбудителя. Единственный исторический эндемичный очаг холеры — дельта Ганга иБрахмапутры. Выделяют 2 типа эпидемий холеры: эпидемии-вспышки с едиными источником инфекции ипутями распространения, характеризующихся одномоментным появлением большого числа больных, ивялотекущие эпидемии с небольшой постоянной заболеваемостью и трудно выявляемыми путями передачивозбудителя. В большинстве случаев подъём заболеваемости наблюдают в тёплое время года.

Патогенез

В организме человека большая часть вибрионов погибает под действием кислой среды желудка, и лишь ихнебольшая часть достигает тонкой кишки. В ответ на проникновение бактерий кишечный эпителий выделяетщелочной секрет, насыщенный жёлчью (жёлчь идеальная среда для размножения возбудителя).Клинические проявления холеры обусловливает способность к образованию экзотоксинов
• Экзотоксин (холероген) термолабильный белок, молекула токсина включает 2 компонента: компонент Ввзаимодействует с моносиаловым ганглиозидным рецептором, что обусловливает проникновение в клеткукомпонента А. Компонент А составляют субъединица А,(активный центр) и субъединица А2, связывающаяоба компонента. Субъединица А катализирует рибозилирование гуанилзависимого компонента аденилатциклазы, приводит к повышению внутриклеточного содержания циклического 3,5-аденозинмонофосфа та ивыходу жидкости и электролитов из клеток либеркюновых желез
в просвет кишечника. Токсин не способен реализовать своё действие на любых других клетках. Бактериисеровара 0139 также продуцируют экзотоксин с аналогичными свойствами, но в меньших количествах;токсинообразование кодируют как хромосомные, так и плазмидные гены
• Определённую роль в поражениях, вызываемых биотипом Эль-Тор, играют гемолизины.

Клиническая картина

• У большинства инфицированных лиц заболевание протекает бессимптомно, либо возможна лёгкая диарея.Соотношение тяжёлых поражений к количеству стёртых проявлений для классической холеры — 1:5-1:10, дляхолеры Эль-Тор -1:25-1:100.
• Для клинически выраженных случаев инкубационный период варьирует от нескольких часов до 5 сут (всреднем -2-3 дня), характеризуется общим недомоганием, болями в животе, рвотой и развитием выраженногодиарейного синдрома. Для последнего характерно выделение значительного количества (до 10 л/сут)водянистых, бесцветных испражнений (рисовый отвар]. Другая характерная черта — сладковатый, рыбный (ноне фекальный) запах испражнений.
• В тяжёлых случаях у больных резко снижается диурез с развитием ОПН. Характерна охриплость голоса илиафония. Ведущий патогенетический фактор -гиповолемия и дефицит электролитов. Как следствиеразвиваются артериальная гипотёнзия, коронарная недостаточность, нарушение сознания и гипотермия.Подобное состояние определяют как холерный алгид. Отмечают характерное проявление fades hippocratica(запавшие глаза, заострённые черты лица с резко выступающими скулами). Продолжительность проявленийзависит от своевременно начатого, адекватно проводимого лечения и варьирует от нескольких часов донескольких дней. При отсутствии лечения летальность больных в алгидной стадии может достигать 60%.

• Выздоровление сопровождается выработкой непродолжительной невосприимчивости, нередко отмечаютслучаи повторного заражения.

Биолого-патогенетические свойства возбудителя

Миновав желудочный барьер, вибрионы попадают в тонкую кишку с благоприятной для них средой и заселяют (колонизируют) поверхность кишечного эпителия. Процесс колонизации включает в себя хемотаксис вибрионов к слою слизи, покрывающему верхушки ворсинок тонкой кишки, проникновение через эту слизь, адгезию к рецепторам на исчерченной каемке кишечных эпителиоцитов и размножение на поверхности эпителия ворсинок и крипт. У больных холерой возбудитель может быть обнаружен на всем протяжении желудочно-кишечного тракта. В желудке при рН не менее 5,5 вибрионы не обнаруживаются, в стуле их концентрация достигает 106–107 (иногда 109). Размножившись до определенной концентрации, возбудитель вызывает заболевание посредством вырабатываемого им холерогена. Основную роль в развитии болезни играют вибрионы, которые находятся в тесной связи со слизистой оболочкой тонкой кишки, так как они выделяют холероген в непосредственной близости от его рецепторов на эпителиальных клетках – ган-глиозида GM1. После прикрепления холерного токсина к ганглиозиду субъединица А проходит через мембраны внутрь эпителиальной клетки, где происходит высвобождение фрагмента А1. Последний энзиматически расщепляет НАД и передает его АДФ-рибозную половину на регуляторный протеин аденилатциклазного комплекса, находящегося на внутренней стороне мембраны эпителиоцита. В результате происходит активация аденилатциклазы, приводящая к повышению содержания АМФ – одного из внутриклеточных стимуляторов кишечной секреции. Связывание холерного токсина с рецепторами на эпителиальных клетках происходит чрезвычайно быстро (через 1–3 мин); биохимические нзменения в клетке являются необратимыми. Возникающее заболевание сопровождается потерей огромных количеств жидкости с низким содержанием белка и высокой концентрацией ионов натрия, калия, хлоридов, гидрокарбонатов. Эта жидкость по составу отличается как от экссудата, так и от транссудата и ближе к составу кишечного секрета.

Восприимчивость

Восприимчивость к холерному вибриону восприимчивы люди всех возрастов. Чаще и тяжелее болеют холерой лица, злоупотребляющие алкоголем или перенесшие резекцию желудка. Кислотность желудочного сока играет важную роль в определении минимальной инфицирующей дозы – в опытах на добровольцах при нейтрализации желудочного сока гидрокарбонатом натрия количество вибрионов, необходимых для воспроизведения специфического процесса у человека, уменьшается с 10» до 104–106 микробных клеток.

Клинические особенности

Инкубационный период при холере длится от 1 до 5 дней. Клинические проявления холеры весьма варьируют, и тяжесть клинического течения определяется степенью обезвоживания. Заболевание начинается обычно внезапно. Первым клинически выраженным признаком холеры является понос. Типичные холерные испражнения представляют собой водянистую, мутновато-беловатую жидкость с плавающими хлопьями, напоминают по внешнему виду рисовый отвар и не имеют запаха. Мышечная слабость и судороги в икроножных мышцах – ранние симптомы холеры. Вслед за жидким стулом появляется обильная повторная рвота, быстро приводящая к декомпенсированному эксикозу. Кожные покровы становятся цианотичными, холодными на ощупь, черты лица заостряются, глаза и щеки западают. Кожа кистей рук морщинистая («руки прачки»), голос сиплый, вплоть до афонии. У больных с тяжелой формой холеры отмечается гипотермия. Из-за ее постоянства терминальная форма холеры (IV степень дегидратации) получила название «алгидная». Алгид (декомпенсированное обезвоживание) сопровождается нарушением деятельности основных систем организма – сердечнососудистой, дыхательной, мочевыделительной.

Иммунологическая диагностика

Обнаружение антигена. Возбудитель холеры и его специфические антигены (корпускулярный, растворимый, холероген) выявляют в фекалиях, рвотных массах, крови, дуоденальном и кишечном содержимом, желчном пузыре, в объектах окружающей среды (смывы с различных предметов), в воде открытых водоемов, сточных водах, гидробионтах и др. Из современных методов индикации антигенов холерного вибриона наибольшее распространение получила РНГА, чувствительность которой с антительными эритроцитарными диагностикумами составляет 105–101» бактерий в 1 мл или 0,04 мкг/мл 0-антигена. При клинически выраженных формах холеры, когда в испражнениях больных содержится огромное количество вибрионов (10» – 109 в 1 мл), прямое исследование фильтратов прогретых на водяной бане испражнений в РНГА с антительным диагностикумом позволяет дать ответ о наличии специфического антигена уже через 2–3 часа. Рвотные массы больных, испражнения вибриононосителей и контактных лиц, содержащие меньшее количество вибрионов, целесообразно исследовать после предварительного 6-часового подращивания на 1% пептонной воде. При исследовании испражнений и рвотных масс оказалось, что лишь в 52% случаев диагноз холеры был подтвержден бактериологически у больных, в анамнезе значительной части которых имелось указание на употребление антибиотиков при появлении первых признаков заболевания. С помощью РНГА заболевания холерой удалось дополнительно установить еще у 21% больных. При исследовании испражнений, содержимого кишечника и желчного пузыря умерших от острых кишечных заболеваний, испражнений здоровых лиц и проб воды обычно в практических условиях наблюдали полное совпадение результатов серологического и бактериологического методов исследования, что позволяет считать РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом достаточно надежным экспресс-методом при массовом обследовании на холеру. Некоторыми авторами при индикации специфических антигенов холерного вибриона отдается предпочтение РНГА.

Холерные диагностикумы для этой реакции готовят из бараньих или человеческих О (I) группы эритроцитов, сенсибилизированных холерными 0-антигенами. Чувствительность метода – 104–106 бактерий в 1 мл при исследовании нативных испражнений и 10» – 105 – после предварительного подращивания. Минимальное количество 0-антигена, выявляемого с помощью РТНГА, равно 0,04–0,16 мкг/мл. РТНГА дает положительные результаты у 91% больных холерой, у 40% ре-конвалесцентов и 12% контактировавших с больными, 0-антиген холерного вибриона может быть определен через 1 мес от начала заболевания в фекалиях у всех переболевших людей, а спустя 5–6 мес – у половины обследованных, что, по-видимому, свидетельствует о более длительной экскреции специфического антигена в нежизнеспособной форме. Совпадение результатов бактериологического метода и РТНГА, по различным данным, наблюдается в 63–100% случаев. Имеющиеся материалы дают основание считать целесообразным широкое испытание РТНГА. Положительную оценку при диагностике холеры получил МФА, позволяющий выявлять холерные вибрионы при содержании их не менее 10° в 1 мл. Использовать МФА целесообразно при исследовании нативного материала от больных и трупов. У больных холерой положительные результаты с помощью МФА были получены в течение 2 ч в 70–90% наблюдений при полном совпадении с результатами бактериологического анализа. Применение МФА при исследовании воды и смывов возможно лишь после предварительного подращивания или концентрирования материала. Представляется перспективным использование иммунотушевой окраски холерных вибрионов.

Для выявления антигенов холерного вибриона применяют агрегат гемаг-глютинационную пробу (АГГ). В основе её лежит использование для агрегации и фиксирования белков иммунной сыворотки на эритроцитах химического вещества из группы диазосоединений в виде препарата диазоль черного С. Эритроциты, сенсибилизированные агрегированными белками холерной 0-сыворотки, обладают высокой специфичностью и чувствительностью. С их помощью удается определить 0,01–0,005 мкг/мл «цельного» растворенного антигена, приготовленного по методу Буавена, и 4000–480 000 клеток холерного вибриона в микробных взвесях. Это позволяет считать АГГ одним из наиболее чувствительных иммунологических методов, который оправдал себя при обследовании людей. С помощью АГГ 0-антиген холерного вибриона обнаружен в 88,2% больных холерой и 78,3% вибриононосителей, причем в титрах 1: 40 и выше 0-антиген определен у 76,1% больных и у 57,1% вибриононосителей. Серологически активный компонент эндотоксина обнаруживают в высоких титрах, чаще у тяжелых больных и в первые 3–5 дней болезни. В период реконвалесценции количество антигена в сыворотке крови снижается, но у 33% больных он сохраняется до 20–25 дней. Для определения холерогена, помимо биопроб, используют и иммунологические методы – РНГА и АГГ. В опытах с бесклеточными супернатантами культур холерных вибрионов порог чувствительности обоих методов составлял 0,01–0,005 мкг/мл.

Иммунитет

После болезни у человека вырабатывается выраженный иммунитет, который сохраняется длительное время, поэтому случаи повторных заболеваний холерой крайне редки. Опыты на добровольцах показали, что в течение 3 лет (срок наблюдения) люди, переболевшие холерой в результате экспериментального заражения, оставались устойчивыми к повторному заражению холерными вибрионами [Levine M. et al., 1981]. Основная роль в иммунитете к холере принадлежит антителам, продуцируемым местно (в кишке), хотя определенный вклад в защиту вносят циркулирующие антитела при высоких их концентрациях, когда они проникают в просвет кишки из крови, что подтверждено экспериментами на животных. Более высокий уровень защиты наблюдается при синергическом действии антибактериальных и антитоксических антител в кишке. Основная роль антибактериальных SIgA состоит в том, чтобы препятствовать хемотаксису вибрионов к эпителию и прилипанию их к поверхности слизистой оболочки кишечника в результате блокирующего действия на структуры для прилипания (лиганды) на поверхности бактериальных клеток. Снижение колонизации и адгезии холерных вибрионов способствует более быстрому их выведению из кишечника при перистальтике и тем самым уменьшает возможность приживления возбудителя в кишечном тракте. Действие кишечных IgA-антител против холерогена обусловлено главным образом блокадой его В-субъединицы, что препятствует связыванию токсина с ганглиозидом GM1 на поверхности эпителиоцитов. Антитела, блокирующие токсический сайт на А-субъединице холерогена, оказывают меньшее защитное действие.

МОРФОЛОГИЯ. 

Клетки холерного вибриона размерами 1,5-4,0х0,2-0,4 мкм имеют одинполярный жгутик, снабженный чехликом и продольным выростом, напоминающим ундул.

Типичные формы обычно наблюдают в образцах клинического материала; в мазках из колоний, выросших на плотных средах, доминируют палочковидные формы. Наибольшую вариабельность дают при выращивании на средах с крахмалом. Подвижность бактерий весьма выражена, и её определение (методом висячей или раздавленной капли) - важный диагностический признак. Деление клеток происходит очень быстро, на щелочной пептонной воде возбудитель даёт видимый невооружённым глазом рост уже через 6 ч. В старых культурах S-образно изогнутые, кокковидные или булавовидные инволюционные формы. Способны образовывать фильтрующиеся, а под действием пенициллина и L-формы. Тинкториальные свойства аналогичны таковым у энтеробактерий, вибрионы хорошо окрашиваются многими анилиновыми красителями. Наибольшее распространение получила окраска водным фуксином Пфайффераили .карболовым фуксиномЦиля. Для окраски органоидов, в частности жгутиков, предпочтительнапротрава с последующим импрегнированием солями тяжёлых металлов.

На твёрдых средах возбудитель образует небольшие круглые дисковидные прозрачные S-колонии с ровными краями, голубоватые в проходящем свете (что сразу их отличает отболее грубых и мутно-белых колоний энтеробактерий). Колонии маслянистые, легко снимаются со среды и эмульгируются, давая феномен «тяжа». Старые культуры несколько грубеют и приобретают желтовато-коричневый оттенок. На скошенном агаре через 24 чхолерный вибрион образует блестящий желтоватый налёт. На агаре с тиосульфатомцитратом, солями жёлчных кислот и сахарозой (TCBS-arapVibrio cholerae ферментирует последнюю и образует жёлтые колонии. На пластинках желатины через 48 ч вырастают беловатые зернистые колонии, окруженные зоной разжижения. При посеве уколом через 48-72 ч вызывает воронкообразное разжижение, его верхняя часть при просматривании сбоку представляется пузырьком воздуха; позднее разжижение увеличивается, и полость заполняется белёсой массой вибрионов. Также образуются неровные, мутные R-колониибактерии из них утрачивают чувствительность к бактериофагам, антибиотикам и не агглютинируются О-антисыворотками.

На жидких средах вызывает помутнение и образование нежной голубоватой плёнки на поверхности, её края приподняты вдоль стенок пробирки; при встряхивании она легко разрушается и оседает на дно. На 1% пептонной воде (рН 8,8-9,0) растут, опережая бактерии кишечной группы, и образуют нежную голубоватую плёнку и муть.

КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА. 

Факультативный анаэроб с более выраженными аэробнымисвойствами; быстро погибает в анаэробных условиях. Не образует спор и хорошо растет напростых питательных средах. Температурные пределы для роста 16-40°С; оптимум - 37°С.Может расти при высоком рН среды (7,6-8,0); подобные галофильные свойства используют в подборе элективных средств, а также применяя дезинфектанты с кислым рН.

БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА. Холерные вибрионы сбраживают с образованием кислоты (безгаза) глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннозу, маннит, лактозу (сравнительно медленно), ле-вулёзу, гликоген и крахмал. Инертны к арабинозе, дульциту, инулину, инозиту и рамнозе.Ферментация маннозы, сахарозы и арабинозы (триада Хёйберга) имеет диагностическое значение; холерные вибрионы разлагают только маннозу и сахарозу и принадлежат к 1 группе Хейберга (по отношению к этим трём углеводам все вибрионы разделяют на 6 групп). Проявляют протеолитическую активность - разжижают желатину с образованием «воронки» с пузырьком воздуха вверху, также гидролизуют казеин. Обладают плазмокоагулирующим (свёртывают плазму кролика) и фибринолитическим (разжижают свёрнутую сыворотку по Лёффлеру) действиями. Свёртывают молоко и разлагают другие белки и их дериваты до аммиака и индола. H2S не образуют. Восстанавливают нитраты и образуют индол; эту способность учитывают в нитрозоиндоловой реакции, также известной как Пеля-Буйдвида, или холеpa-рот реакция. На основании биохимических и биологических различий холерные вибрионы разделяют на 2 биовара (биотипа): классический (V. cholerae asiaticae)*Эль-Тор (V. cholerae eltor). В настоящее время значительная часть изолятов Эль-Тор утеряла свои гемолитические свойства и дифференцируется только по способности агглютинировать эритроциты, резистентности к полимиксину и фагу IV. Бактерии группы 0139 устойчивы к полимиксину и не проявляют гемолитическую активность

Гемолитическая активность (реакция Грейга) может варьировать; классические вибрионы способны приобретать гемолитические свойства при хранении, а вибрионы Эль-Тор могут их терять при пассировании.

АНТИГЕННАЯ СТРУКТУРА.

У холерных вибрионов выделяют термостабильные О- и термолабильные Н-Аг.

Н-Аг - общие для большой группы бактерий, разделённой на А и В группы; в группу А входят холерные вибрионы; в группу В - вибрионы, биохимически отличные от холерных.

По структуре О-Аг выделяют 139 серогрупп; возбудители классической холеры и холеры Эль-Тор объединяют в 01 (изолированную от холероподобных и парахолерных вибрионов) и, несмотря на существующие биохимические различия, при исследовании на холеру обязательно проводят типирование 01-антисывороткой. Кабешима и Такано (1913) установили, что О-Аг 01 группы холерных вибрионов неоднороден и включает А-, В- и С- компоненты, разные сочетания которых присущи сероварам Огава (АВ), Инаба (АС)и Хикоджйма (АВС, промежуточный серовар). Эти свойства используют в качестве эпидемиологического маркёра для дифференцирования очагов по возбудителям, хотя иногда от одного больного можно выделить бактерии разных сероваров. У шероховатых R-форм отмечают утрату О-Аг и они, а также слизистые М-формы (с измененной структурой 0-Аг), не агглютинируются О-антисыворотками (для идентификации OR- и R-диссоциатов используют OR-антисыворотки). Бактерии серовара 0139 не агглютинируются видоспецифической 01 и типоспецифическими Огава-, Инаба- и RO-антисыворотки.

Поскольку холероподобные вибрионы также не агглютинируются 01-антисывороткой, их обозначают как неагглютинирующиеся, или НАГ, вибрионы. Гарднер и Венкатрамен установили, что вибрионы группы В имеют неоднородную структуру О-Аг и разделяются на 6серологических подгрупп, состав которых совпадает с биохимической схемой Хайберга.

БАКТЕРИОФАГИ. 

Холерные бактериофаги были впервые выделены д'Эреллем; они специфичны (лишь изредка могут давать перекрёстные реакции с родственными видами). Все Vibrio cholerae лизируются бактериофагом группы IV, а вибрионы биовара Эль-Тор - фагами группы V; тем не менее, создать схему типирования вибрионов Эль-Тор не удалось. Многочисленные исследования показали, что холерные бактериофаги практически не имеют терапевтического эффекта.

Лечение.

Все больные холерой или с подозрением на нее подлежат обязательной госпитализации. Неотложным лечебным мероприятием является восполнение дефицита воды и электролитов с помощью растворов для оральной регидратации. При наличии рвоты, а также больным с тяжелым течением болезни вводятся внутривенно полиионные растворы.

Основной принцип лечения больных холерой – немедленная при первом контакте с больным регидратация на дому, в машине скорой помощи и стационаре. При легком и средней тяжести течении следует проводить пероральную регидратацию. Комитет экспертов ВОЗ рекомендует следующий состав для пероральной регидратации: натрия хлорид – 3,5 г, натрия гидрокарбонат – 2,5 г, калия хлорид – 1,5 г, глюкоза – 20 г., вода кипяченая – 1 л.

В России этот раствор чаще называют «оралит». Добавление глюкозы способствует всасыванию натрия и воды в кишечнике. ВОЗ рекомендует использовать стандартный глюкозо-солевой раствор для оральной регидратации при многих острых кишечных инфекциях, независимо от этиологии и возраста больных. Экспертами ВОЗ предложен и другой регидратационный раствор, в котором гидрокарбонат заменен более стойким цитратом натрия («регидрон»). В России разработан препарат цитроглюкосолан, который идентичен глюкозо-солевому раствору ВОЗ. При невозможности точного учета потерь жидкости с рвотными массами и фекалиями детям рекомендуется давать пить по 50–150 мл глюкозо-солевого раствора после каждой дефекации (со скоростью 1 чайная – 1 десертная ложка в 1 мин), взрослым 200–250 мл (1 столовая ложка за 1 мин). Наряду с глюкозо-солевым раствором рекомендуется дополнительный объем простой кипяченой воды, чая, отвара шиповника и других жидкостей.

Больных, и в особенности детей, с частым стулом в условиях неблагополучной ситуации по холере следует осматривать каждые 12 ч или ежедневно в связи с возможным быстрым прогрессированием болезни. В ситуациях, когда наблюдение обеспечить невозможно, показана провизорная госпитализация. Это особенно важно в тех случаях, когда в течение первых 6 ч пероральный прием жидкости неэффективен, нар встает дегидратация. Нередко следует таким больным немедленно, начиная с догоспитального этапа, вводить электролитные растворы внутривенно. Расчет необходимых растворов для регидратации у детей зависит от массы тела ребенка и степени дегидратации. У взрослых расчет жидкости для пероральной регидратации проводится с учетом потерь жидкости со стулом. Оральную регидратацию продолжают до полного прекращения диареи.

При тяжелом течении холеры и при наличии рвоты внутривенно вводят полиионные растворы: трисоль, дисоль, ацесоль, квартасоль, лактасоль. Чаще других используют трисоль (раствор Филлипса №1), содержащий натрия хлорид 5 г, натрия гидрокарбонат 4 г, калия хлорид 1 г на 1 л апирогенной бидистиллированной воды (5–4–1). При их отсутствии используют вначале раствор Рингера.

Прогноз при своевременном и адекватном лечении холеры – благоприятный.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА. Основу составляют выделение и идентификация возбудителя. Цели исследований: выявление больных и бактерионосителей; установление окончательного диагноза при исследовании погибших; контроль за эффективностью лечения больных и санации носителей; контроль над объектами внешней среды и эффективностью дезинфекционных мероприятий. Материалы для исследований - испражнения, рвотные массы, жёлчь, секционный материал (фрагменты тонкой кишки и жёлчного пузыря), постельное и нательное бельё, вода, ил, сточные воды, гидробионты, смывы с объектов окружающей среды, пищевые продукты, мухи и др.

Наилучшие результаты даёт исследование проб, взятых до начала антибактериальной терапии. Испражнения лучше всего отбирать резиновыми катетерами. Можно использовать стеклянные трубочки с оплавленными краями (также вводят в анальное отверстие) или ректальные тампоны. При исследовании жёлчи отбирают порции В и С (доставляют нативный материал). Секционный материал помещают в стерильную тару раздельно. Все образцы помещают в герметически закрываемую транспортную тару. Материал следует доставлять в лабораторию не позже 2 ч после забора. При невозможности образцы помещают в транспортные среды.

Основным в лабораторной диагностике холеры является:

1) обнаружение в мазках из испражнений изогнутых тонких грамотрицательных палочек, располагающихся в виде «стайки рыб»;

2) активная подвижность вибрионов в раздавленной капле;

3) мгновенная их иммобилизация при добавлении 0–холерной сыворотки;

4) образование голубоватой пленки–паутинки на пептонной воде через 5–6 ч и характерных колоний–росинок на щелочном МПА (12 ч);

5) агглютинабельность вибрионов в противохолерных сыворотках и их лизабельность типовыми холерными фагами С и Эль–Тор.

Схема бактериологического исследования. Так как окончательные результаты должны быть выданы через 30–36 ч, то исследование проводится круглосуточно.

I этап. Из испражнений и рвотных масс готовят мазки, высушивают на воздухе, фиксируют смесью Никифорова и окрашивают водным фуксином или по Граму. Параллельно с этим изучается подвижность вибриона в раздавленной капле. Одновременно испражнения высевают на 1% щелочную пептонную воду, щелочной мясопептонный агар и TCBS. Все посевы помещают в термостат при температуре 37°С. Дают первое заключение о наличии в материале вибрионов.

II этап. Через 5–6 ч инкубации в термостате на пептонной воде вырастает едва видимая пленка, из которой делают мазки, препараты раздавленной капли. Пленку агглютинируют в капле О–холерной сыворотки и выдают второе заключение о природе выделенного вибриона. Пленки пересевают на вторую пептонную воду и щелочной МПА.

III этап. Спустя 12–16 ч от момента посева на среды испражнений больного представляется возможность повторно изучить морфологию, подвижность и агглютинабельность вибрионов пленки, выросшей на второй пептонной воде, а также провести те же исследования, отобрав с плотных сред подозрительные колонии.

Определив, что колонии состоят из вибрионов, агглютинирующихся в О–холерной сыворотке, разведенной 1:100, и в одной из типовых сывороток Инаба и Огава, разведенных 1:50, дают третье заключение о результатах исследования. Подозрительные колонии пересевают на скошенный агар для накопления культуры и определения ферментативных свойств.

IV этап. Установив, какие ферменты продуцирует культура вибриона на ряде Гисса, определяют ее чувствительность к холерным фагам и дают окончательное заключение.

Глава II. Собственное исследование

Методы исследования

• Выделение и идентификация возбудителя; цели исследований — выявление больных и бактерионосителей,установление окончательного диагноза при исследовании погибших, контроль за эффективностью лечениябольных и санации носителей, контроль над объектами внешней среды и эффективностью дезинфекционныхмероприятий Материалы для исследования — испражнения, рвотные массы, жёлчь, секционный материал(фрагменты тонкой кишки и жёлчный пузырь), постельное и нательное бельё, вода, ил, сточные воды,гидробионты, смывы с объектов окружающей среды, пищевые продукты, мухи и др. Наиболее объективныерезультаты даёт исследование проб, взятых до начала антибактериальной терапии
• Анализ крови — признаки дегидратации (ацидемия, ацидоз, гипокалие-мия, гипонатриемия, гипохлоремия,гипогликемия, полицитемия, незначительный нейтрофильный лейкоцитоз)
Дифференциальный диагноз проводят с различными тяжёлыми диареями (например, вызванными видамиShigella, E. coli или энтеро-патогенными вирусами).
Инфицирование человека холерным вибрионом ведет к местному и системному ответу. Клинически выраженное заболевание холерой сопровождается ростом уровня сывороточных антимикробных (агглютинирующих и вибриоцидных) и токсиннейтрализующих антител, как правило, уже к концу 1-й недели после появления симптомов болезни. Агглютинины к холерному вибриону к 4-му дню заболевания выявляют у 35,7% больных, на 8-й день – практически у всех (98,6%). Уровень агглютининов достигает максимума на 2-й неделе заболевания (на 11–15-й день титры, равные 320 и выше, регистрируют у 71% больных), а затем резко падает. Титры вибриоцидных антител также увеличиваются к 8–10-му дню заболевания и после 3 нед (иногда несколько раньше) начинают снижаться, достигая первоначального уровня через 2–7 мес. У детей до 4 лет падение титра вибриоцидных антител происходит быстрее, чем в старшей возрастной группе (5–14 лет), достигая исходного уровня уже через 3 мес. Динамика титров токсиннейтрализующих антител имеет сходный характер – появляясь в конце 1-й недели, они достигают максимума между 2-й и 3-й неделями, а с 21-го дня снижаются. Содержание сывороточных IgM и I gG на протяжении болезни сопоставимо с аналогичными показателями в контрольной группе, хотя есть данные об увеличении уровня IgM в острой стадии и снижении его в период реконвалесценции. Некоторые исследователи не установили разницы в содержании IgA при поступлении больных в стационар и в стадии реконвалесценции; другие отмечают повышение его уровня у переболевших [Покровский В.И., Малеев В.В., 1978; Адамов А.К., 1981]. Сказанное не дает достаточных оснований утверждать, что изменение уровня сывороточных иммуно-глобулинов при холере носит специфический характер. Специфическая активность иммуноглобулинов различных классов зависит от формы и длительности инфекционного процесса при холере. Антитела в сыворотке крови переболевших относятся, преимущественно к IgM. У вибриононосителей продуцируются, наоборот, высокоактивные IgG-антитела. Активность IgA-антител в сыворотке крови вибриононосителей незначительно выше по сравнению с больными. Чем тяжелее протекает заболевание, тем выше активность продуцируемых антител, относящихся к иммуноглобули-нам класса М, и ниже активность IgG-антител.

Самым простым и легко воспроизводимым методом определения антимикробных антител является РА с живыми культурами холерного вибриона, но чувствительность этой реакции ограничена. Диагностические титры (1: 40 и выше) появляются, как правило, к концу 1-й недели заболевания, но лишь у 19,7% больных холерой.

Исследование парных сывороток, полученных с интервалом 7–10 дней при наличии 4-кратного и более нарастания титров антител увеличивает частоту положительных результатов до 89,6% Гораздо большее значение придается в настоящее время выявлению виб-риоцидных антител. Вибриоцидный тест (ВТ) является более чувствительным в сравнении с РА, давая высокие титры, особенно у реконвалесцентов холеры (до 1: 100 000). Нужно, однако, иметь в виду, что вибриоцидные антитела (титры до 1: 1000) могут обнаруживаться и в сыворотках невакцинированных здоровых людей, никогда не болевших холерой, и у лиц, инфицированных бруцеллами, Yersinia enterocolitica 09, цитробактером. Агглютинины относительно меньше чувствительны к такой неспецифической стимуляции. Как и РА, ВТ позволяет регистрировать подъем специфических антител (4-кратный и более) у 90–95% больных с бактериологически подтвержденным диагнозом холеры.

В качестве антигена в РА и ВТ используют холерные вибрионы обоих серотипов. При необходимости пользоваться одним предпочтение отдают серотипу Огава, который чаще, чем Инаба, вступает в перекрестные реакции с гетерологичным серотипом холерного вибриона и реже дает неспецифические реакции с микробами других семейств. Хотя эти серологические реакции являются наиболее чувствительными, необходимость применения в них живых вибрионов создает определенные трудности при массовых обследованиях. Поэтому наибольшего внимания заслуживают антигенные эритроцитарные диагностикумы, которые позволили внедрить в практику РНГА и РТНГА. Эти реакции обладают достаточной чувствительностью и специфичностью, позволяя обнаруживать антитела у больных и переболевших холерой в титрах 1: 640–1: 1280. Наблюдаемые различия в титрах при параллельном использовании РНГА и ВТ обусловлены главным образом различиями в физико-химической природе выявляемых антител: IgG-антитела более эффективно обнаруживают бактерицидным методом (ВТ), IgM-антитела – в РНГА.

Для выявления антитоксинов в сыворотках применяют РН, результаты которой учитывают по отсутствию холерогенного эффекта в перевязанной петле тонкой кишки взрослых кроликов, в кишечнике крольчат-сосунков, на коже морских свинок (кроликов) в опытах in vivo и по отсутствию цитото-нического действия в культуре клеток СНО и Y-1 – в опытах in vitro. Наиболее стандартизованы кожная проба и модель перевязанной кишечной петли. У 73% больных в эндемичном по холере районе с помощью кожной пробы выявлено диагностически значимое 9-кратное и большее увеличение титров токсиннейтрализующих антител. Частота сероконверсии вибриоцидных антител и агглютининов в этой же группе больных была выше и составила 98 и 88% соответственно.

Анализ титров антитоксических антител при диареях нехолерной этиологии показал, что в пробах сывороток, взятых в острой стадии болезни, они колебались от 10 до 270, но значимое нарастание титров в период рекон-валесценции было отмечено лишь у 2,5% больных. Обладая высокой специфичностью, метод определения токсиннейтрализующих антител несколько уступает по чувствительности методам определения вибриоцидных и агглютинирующих антител. Высокой разрешающей способностью обладают ИФМ и РИМ, использующие меченный энзимом или радиоактивным веществом антиген и позволяющие определять связывание 0,001–1 нг иммунного белка исследуемой сыворотки.

Титры антитоксических антител, регистрируемые ИФМ, выше титров, которые определяются с помощью внутрикожного теста, что обусловлено различиями в выявляемых классах иммуноглобулинов: кожный тест документирует нейтрализующую активность только IgG-антител, вероятно, в силу их большей авидности, в то время как ИФМ регистрирует и уровень IgM-антител. Таким образом, изучение титров и динамики нарастания циркулирующих антител в сыворотках крови больных при холере расширяет возможности ее лабораторной диагностики. Ретроспективный диагноз холеры с большей степенью вероятности может быть установлен в РА и ВТ, но лишь на основании изучения парных сывороток больных. Определение уровня антитоксина полезно в тех случаях, когда необходимо исключить предшествующую специфическую вакцинацию, так как антитела этого типа не индуцируются существующими холерными вакцинами и очень редко встречаются у здоровых людей. Однако подъем антитоксических титров у больных на фоне диагностически значимой сероконверсии вибриоцидных и агглютинирующих антител повышает достоверность серологической диагностики холеры.

Возникновение патологического процесса, вызванного холерными вибрионами, ведет к появлению антител к этим микроорганизмам и во внешних секретах пищеварительного тракта – интестинальной жидкости (ко-проантитела) и слюне. Отличительной чертой динамики копроантител является их раннее появление (у 72% – на 2–3-й день болезни, у 100% – на 4-й день) и быстрое исчезновение из кишечного содержимого. В интестинальной жидкости выздоравливающих от холеры людей антитела против вибрионов относятся к иммуноглобулинам A, G и М, но преобладающими являются SIgA-антитела, количество которых у больных холерой возрастает примерно в 30 раз, но составляет около «/4 того, что наблюдается у больных диарейными заболеваниями нехолерной этиологии. Последнее связано с адсорбцией SIgA на холерных вибрионах, что приводит к стойкому снижению количества вибрионов в стуле больных и сокращает продолжительность их выделения из кишечника. Концентрация этого иммуноглобулина и время его появления в кишечном содержимом не связаны с сывороточным IgA. Количество IgG- и IgM-антител в кишечном содержимом реконвалесцентов холеры также увеличивается (в 5–7 раз), но в фекалиях антитела класса IgM не обнаруживают.

Для обнаружения антител в интестинальной жидкости и фекалиях больных могут быть использованы ВТ, РИМ с холерными антигенами, меченными радиоактивным йодом, непрямой флюоресцентно-серологический метод. Нарастание специфических антител указывает на наличие заболевания холерой. Однако кишечно-копрологическая диагностика холеры еще недостаточно разработана. В слюне больных и вибриононосителей повышен уровень IgA и IgG. Одновременно появляются и специфические антитела (агглютинины), содержание которых у больных холерой выше, чем у виброноносителей (30 АЕ и 14 АЕ соответственно). Диагностический титр специфических агглютининов слюны может оказаться значительно ниже сывороточного. Определению состояния повышенной чувствительности при холере в реакции ГЗТ посвящены единичные работы. Описаны положительные аллергические реакции у 89% переболевших холерой и вибриононосителей (при отсутствии их в контрольной группе) в ответ на внутрикожное введение аллергена из убитых холерных вибрионов. Однако имеющихся данных недостаточно, чтобы высказать суждение об аллергической перестройке организма при холере или о диагностической значимости применяемых тестов.

• Взрослым и детям старше 8 лет — доксициклин по 300 мг
1 р/сут, либо по 100 мг 2 р/сут или тетрациклин по 50 мг/
кг/сут в течение 3 дней.
• Детям до 8 лет — триметоприм-сульфаметоксозол (ко-три-моксазол) по 4 мг/кг триметоприма и 20 мг/кгсульфаме-токсазола каждые 12 ч или фуразолидон 5-10 мг/кг/сут в 4 приёма через 6 ч в течение 3 дней.
• Беременным — фуразолидон по 100 мг 4 р/сут в течение 7-10 дней.
• Возмещение потери жидкости и электролитов в соответствии со степенью обезвоживания больного.
• При лёгкой и среднетяжёлой формах — пероральная регид-ратация (р-р регидратационной соли [NaCl 3,5 г,калия хлорида 1,5 г, глюкозы 20 г, тринатрия цитрата 2,9 г в 1л воды], глюкосолана или цитраглюкосолана).
• При тяжёлой форме — введение солевых р-ров в/в (три-соль, хлосоль, ацесоль и др.).

Список использованной литературы

  1.  Л.Б. Хазенсон, Н.А. Чайка: Иммунологические основы диагностики и эпидемологического анализа кишечных инфекций, 1987.
  2.  В.Д. Тимаков, В.С. Левашев, Л.Б. Борисов: Микробиология, 1983.
  3.  А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев: Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии, 2008.
  4.  А.А. Воробьев: Микробиология и иммунология, 2005.


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

48556. ОСНОВЫ РАБОТЫ В СРЕДЕ ОПЕРАЦИОННОЙ СИСТЕМЫ UNIX 33.68 KB
  Написать скрипт на языке shell, выполняющий периодический поиск и уничтожение файлов и пустых каталогов с определенным именем (имя файла, каталоги поиска и период поиска должны являться параметрами скрипта).
48557. Мікроекономіка. Курс лекцій 1.6 MB
  Аналіз сутності виробництва і витрат дозволяє визначити оптимальну раціональну поведінку товаровиробника висвітлити суть ізокванти і ізокости а також закон спадної граничної продуктивності. Належне місце в ринковій економіці займає аналіз поведінки підприємства сутність виробництва і витрат. Предмет і метод мікроекономіки Мікроекономіка як складова частина економічної теорії Предмет концептуальні основи та методологія мікроекономіки Мета завдання і зміст дисципліни Мікроекономіка як складова частина економічної теорії Вивчення економічної...
48558. ВСТУП. ПОНЯТТЯ ЕКОНОМІКИ, ЇЇ ПРИНЦИПИ ТА МЕТОДИ 505.5 KB
  Нас буде цікавити економіка окремо взятого підприємства але звісно що воно працює не у вакуумі тому будемо вивчати і його місце у зовнішньому ринковому середовищі. Економіка підприємства це наука про ефективність виробництва шляхи і методи досягнення підприємством найкращих результатів при найменших затратах. Мікроекономіка вивчає роботу конкретної економічної одиниці підприємства фірми банка . У той же час наприклад державні органи влади та контролюючі організації повинні враховувати реальний стан в...
48559. Національна економіка 34.85 MB
  Загальні передумови формування національної економіки 1. Теоретичні підходи до визначення структури національної економіки. Методологія вивчення національної економіки 1. Економічні теорії і теоретичні основи аналізу національної економіки 2.
48560. Основные аспекты компьютерных технологий, которые служат платформой, обеспечивающей целостное представление о современной сфере ИКТ 1.24 MB
  Принципы и проблемы физической передачи данных по линиям связи Даже при рассмотрении простейшей сети состоящей всего из двух машин можно увидеть многие проблемы присущие любой вычислительной сети в том числе проблемы связанные с физической передачей сигналов по линиям связи без решения которой невозможен любой вид связи. По степени территориальной рассосредоточенности элементов сети абонентских систем узлов связи различают глобальные региональные и локальные вычислительные сети. К классу ЛВС относятся сети предприятий фирм банков...
48561. Хімічний склад продуктів харчування 42 KB
  Хімічний склад продуктів харчування Урок №: Поняття про сировину напівфабрикати готову страву МЕТА УРОКУ: Ознайомити учнів з поняттям про сировину напівфабрикат готову страву. Харчування – одна із основних життєво необхідних умов існування людини. Здоров’я людини її працездатність і настрій нормальний розвиток значною мірою залежать від харчування. Поняття про сировину напівфабрикати готову страву Виробництво кулінарної продукції здійснюється на сучасних підприємствах масового харчування.
48562. Основные конструкционные стали, применяемые в автомобилестроении и авторемонтном производстве и их характеристики 29.5 KB
  Конструкционные стали предназначены для изготовления деталей машин машиностроительные стали. К этой группе относятся углеродистые и легированные стали с содержанием не более 0708 углерода. Низкоуглеродистые стали до 03 углерода пластичны хорошо свариваются и деформируются.
48563. Основные этапы конструирования 28.5 KB
  Составляется заказчиком изделия и устанавливается наиболее общие требования к изделию о его разработке и изготовлении. задание содержит: 1 наименование и область применения изделия; 2 основание для разработки; 3 источники для разработки; 4технические требования включая: требования к составлению и конструкции изделия; к надежности и технологичности; 5порядок контроля и приемки. Техническое предложение – это совокупность конструкторских документаций содержащих технические и техникоэкономические обоснования целесообразности разработки и...
48564. ОСНОВЫ АЛГОРИТМИЗАЦИИ 825 KB
  ОСНОВЫ АЛГОРИТМИЗАЦИИ Понятие алгоритма Основы алгоритмического языка Паскаль