93615

Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней. Серологические реакции. Коагглютинация. Радиоиммунный метод (РИМ). Иммуноферментный метод (ИФМ)

Доклад

Медицина и ветеринария

Серологические реакции. С диагностической целью используют следующие серологические реакции: Реакция агглютинации в ее различных вариантах. Реакции иммунофлуоресценции РИФ в прямом и непрямом вариантах. Реакции протекающие с участием комплемента.

Русский

2015-09-03

14.69 KB

0 чел.

Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней. Серологические реакции. Коагглютинация. Радиоиммунный метод (РИМ). Иммуноферментный метод (ИФМ). Взаимодействие антигена с антителом проявляется в форме различных иммунологических, или серологических реакций. В связи с их высокой чувствительностью и специфичностью они нашли широкое диагностическое применение.

С диагностической целью используют следующие серологические реакции:

Реакция агглютинации в ее различных вариантах.

Реакция преципитации и ее различные модификации.

Реакции иммунофлуоресценции (РИФ) в прямом и непрямом вариантах.

Реакции, протекающие с участием комплемента.

Реакции, протекающие с участием фагоцитов.

Реакции иммуносорбентного анализа твердой фазы.

Реакции нейтрализации биологической активности возбудителя или токсинов.

Реакция коагглютинации. Является одним из вариантов пассивной, т. е. опосредованной клетками-носителями антител, ускоренной реакции агглютинации на стекле. В основу этой реакции положено уникальное свойство золотистого стафилококка, имеющего в составе своей клеточной стенки белок А, связываться с Fс-фрагментами и IgМ. При этом активные центры антител остаются свободными и могут взаимодействовать со специфическими детерминантами антигенов. На предметное стекло наносят каплю 2 %-ной взвеси стафилококков, сенсибилизированных соответствующими антителами, и добавляют каплю взвеси исследуемых бактерий. При соответствии антигена антителам через 30—60 с происходит четкая агглютинация нагруженных антителами стафилококков.

Обнаружение антигена с помощью ИФМ и РИМ.

Первый этап — адсорбция специфических антител твердой фазой, в качестве которой обычно используют полистироловые или поливинилхлоридные поверхности лунок пластиковых микротитраторных панелей. Антитела нековалентно связы ваются со стенками лунок, у них сохраняются свободными активные центры, и поэтому они способны специфически реагировать с соответствующим антигеном.

Второй этап — связывание антигена из суспензии исследуемого материала за счет реакции антитело + антиген, происходящей на границе твердая фаза—жидкость. После этого луночки промывают раствором, содержащим слабый неионный детергент, для удаления из системы других, неспецифически связанных с антителами компонентов.

Третий этап - обработка твердой фазы с фиксированными на ней комплексами антитело + антиген специфическими антителами против данного антигена, но меченными либо ферментом, либо изотопом. Такие меченые антитела присоединяются к антигенам, а их избыток удаляется из системы промыванием. Таким образом, в случае присутствия в исследуемом материале искомого антигена на поверхности твердой фазы формируется комплекс: антитело + антиген + меченое антитело. Результаты реакции учитывают в зависимости от характера метки. Для иммуноферментного метода антитела метят ферментом, чаще всего пероксидазой или щелочной фосфатазой. Субстратом для пероксидазы служит Н202 в смеси с ортофенилендиамином, используемые в виде раствора в цитратно-фосфатном буфере (рН 5,0). Добавление в опытную луночку раствора субстрата приводит к тому, что он подвергается действию пероксидазы, фиксированной на антителах, образующиеся продукты реакции имеют желтую окраску, интенсивность которой может быть определена путем фотометрирования.

Радиоиммунный метод (РИМ) предусматривает использование антител, меченных изотопом, поэтому результаты реакции оценивают путем определения радиоактивности исследуемых образцов. При положительной реакции уровень радиоактивности опытных образцов более чем в 2 раза превышает уровень радиоактивности контрольных, заведомо отрицательных образцов.

Обнаружение специфических антител с помощью ИФМ и РИМ

ДЛЯ обнаружения антител реакции также ставят в три этапа. Первый этап — адсорбция специфических антигенов на стенках луночек. Обычно планшеты в коммерческих тест-системах уже имеют сенсибилизированные луночки, т. е. на их дне и стенках антигены уже адсорбированы.

Второй этап — добавление в луночки образцов исследуемой сыворотки для обнаружения в ней специфических антител к данному антигену. Если они имеются, то вступают во взаимодействие с антигеном и образуют комплекс антиген + + антитело.

Третий этап — после отмывания луночек в них добавляют специфические антиглобулиновые антитела (антивидовые, т. е. антитела против человеческих иммуноглобулинов), но меченные ферментом (ИФМ) либо изотопом (РИМ). Результаты реакции оценивают, как указано выше. В качестве контроля используют образцы заведомо положительные и заведомо отрицательные.

Предложены различные варианты иммуноферментного метода. Большое значение имеет вариант ИФМ, позволяющий осуществлять «захват» антител, относящихся к IgМ. Этот метод позволяет более точно производить серологическую диагностику, так как основан на обнаружении специфических иммуноглобулинов IgМ, которые появляются в первую очередь при встрече с возбудителем.   


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

18738. Предмет и сущность профилактики как технологии работы с молодежью 21.55 KB
  Предмет и сущность профилактики как технологии работы с молодежью. Определения цели задачи профилактики ее место в системе социальных отношений. Профилактика – это действия направленные на: 1. Предотвращение возможных физических психических социокультурных колл
18739. Теоретический аспект девиантного поведения молодежи 22.74 KB
  Теоретический аспект девиантного поведения молодежи. Сущность понятия девиация соотношение понятий нормадевиация основные формы девиантного поведения. Социальные нормы и социальный контроль. Гендерный аспект девиантного поведения. Сущность понятия девиаци
18740. Специфика социально-политического поведения молодежи и ее причины 23.05 KB
  Специфика социальнополитического поведения молодежи и ее причины. Молодёжь социальнодемографическая группа выделяемая на основе совокупности возрастных характеристик особенностей социального положения и обусловленных тем и другим социальнопсихологических сво...
18741. Формирование здорового образа жизни современной молодежи 26.35 KB
  Формирование здорового образа жизни современной молодежи. Понятие здоровье и здоровый образ жизни. Здоровый образ жизни совокупность духовных ценностей и реальных видов форм и благоприятных для здоровья эффектов деятельности по обеспечению оптимального удов
18742. Специфика деятельности специалиста по работе с молодежью в условиях детского оздоровительного лагеря 27.16 KB
  Специфика деятельности специалиста по работе с молодежью в условиях детского оздоровительного лагеря. Условия и порядок принятия на работу педагогических работников. Функции вожатого и воспитателя. Права обязанности и ответственность вожатого ребенка. Логика смены. ...
18743. Особенности работы с временным детским и молодежным коллективами 30.93 KB
  Особенности работы с временным детским и молодежным коллективами. Понятие временного коллектива. Особенности развития временного коллектива. Учет социальнопсихологических и гендерных особенностей детей и молодежи. Формы отрядных дел. Корпоративная культура малой гр...
18744. Организация и координация развития добровольческого (волонтерского) движения 25.71 KB
  Организация и координация развития добровольческого волонтерского движения. Нормативноправовая база регулирующая деятельность волонтерского движения. Волонтёрская деятельность это широкий круг деятельности включая традиционные формы взаимопомощи и самопом...
18745. Особенности занятости и трудоустройства молодежи 24.74 KB
  Особенности занятости и трудоустройства молодежи. Определение понятий занятость и трудоустройство. Роли на рынке труда. Виды занятости молодежи. Активные формы работы с выпускниками учебных заведений по вопросам занятости и трудоустройства. Определение понятия...
18746. Планирование и развитие карьеры молодого человека 25.09 KB
  Планирование и развитие карьеры молодого человека. Определение понятия карьера. Карьера – успешное продвижение вперед в той или иной области деятельности. В широком понимании карьера – это профессиональный прогресс профессиональный рост этапы продвижения служа