93615

Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней. Серологические реакции. Коагглютинация. Радиоиммунный метод (РИМ). Иммуноферментный метод (ИФМ)

Доклад

Медицина и ветеринария

Серологические реакции. С диагностической целью используют следующие серологические реакции: Реакция агглютинации в ее различных вариантах. Реакции иммунофлуоресценции РИФ в прямом и непрямом вариантах. Реакции протекающие с участием комплемента.

Русский

2015-09-03

14.69 KB

0 чел.

Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней. Серологические реакции. Коагглютинация. Радиоиммунный метод (РИМ). Иммуноферментный метод (ИФМ). Взаимодействие антигена с антителом проявляется в форме различных иммунологических, или серологических реакций. В связи с их высокой чувствительностью и специфичностью они нашли широкое диагностическое применение.

С диагностической целью используют следующие серологические реакции:

Реакция агглютинации в ее различных вариантах.

Реакция преципитации и ее различные модификации.

Реакции иммунофлуоресценции (РИФ) в прямом и непрямом вариантах.

Реакции, протекающие с участием комплемента.

Реакции, протекающие с участием фагоцитов.

Реакции иммуносорбентного анализа твердой фазы.

Реакции нейтрализации биологической активности возбудителя или токсинов.

Реакция коагглютинации. Является одним из вариантов пассивной, т. е. опосредованной клетками-носителями антител, ускоренной реакции агглютинации на стекле. В основу этой реакции положено уникальное свойство золотистого стафилококка, имеющего в составе своей клеточной стенки белок А, связываться с Fс-фрагментами и IgМ. При этом активные центры антител остаются свободными и могут взаимодействовать со специфическими детерминантами антигенов. На предметное стекло наносят каплю 2 %-ной взвеси стафилококков, сенсибилизированных соответствующими антителами, и добавляют каплю взвеси исследуемых бактерий. При соответствии антигена антителам через 30—60 с происходит четкая агглютинация нагруженных антителами стафилококков.

Обнаружение антигена с помощью ИФМ и РИМ.

Первый этап — адсорбция специфических антител твердой фазой, в качестве которой обычно используют полистироловые или поливинилхлоридные поверхности лунок пластиковых микротитраторных панелей. Антитела нековалентно связы ваются со стенками лунок, у них сохраняются свободными активные центры, и поэтому они способны специфически реагировать с соответствующим антигеном.

Второй этап — связывание антигена из суспензии исследуемого материала за счет реакции антитело + антиген, происходящей на границе твердая фаза—жидкость. После этого луночки промывают раствором, содержащим слабый неионный детергент, для удаления из системы других, неспецифически связанных с антителами компонентов.

Третий этап - обработка твердой фазы с фиксированными на ней комплексами антитело + антиген специфическими антителами против данного антигена, но меченными либо ферментом, либо изотопом. Такие меченые антитела присоединяются к антигенам, а их избыток удаляется из системы промыванием. Таким образом, в случае присутствия в исследуемом материале искомого антигена на поверхности твердой фазы формируется комплекс: антитело + антиген + меченое антитело. Результаты реакции учитывают в зависимости от характера метки. Для иммуноферментного метода антитела метят ферментом, чаще всего пероксидазой или щелочной фосфатазой. Субстратом для пероксидазы служит Н202 в смеси с ортофенилендиамином, используемые в виде раствора в цитратно-фосфатном буфере (рН 5,0). Добавление в опытную луночку раствора субстрата приводит к тому, что он подвергается действию пероксидазы, фиксированной на антителах, образующиеся продукты реакции имеют желтую окраску, интенсивность которой может быть определена путем фотометрирования.

Радиоиммунный метод (РИМ) предусматривает использование антител, меченных изотопом, поэтому результаты реакции оценивают путем определения радиоактивности исследуемых образцов. При положительной реакции уровень радиоактивности опытных образцов более чем в 2 раза превышает уровень радиоактивности контрольных, заведомо отрицательных образцов.

Обнаружение специфических антител с помощью ИФМ и РИМ

ДЛЯ обнаружения антител реакции также ставят в три этапа. Первый этап — адсорбция специфических антигенов на стенках луночек. Обычно планшеты в коммерческих тест-системах уже имеют сенсибилизированные луночки, т. е. на их дне и стенках антигены уже адсорбированы.

Второй этап — добавление в луночки образцов исследуемой сыворотки для обнаружения в ней специфических антител к данному антигену. Если они имеются, то вступают во взаимодействие с антигеном и образуют комплекс антиген + + антитело.

Третий этап — после отмывания луночек в них добавляют специфические антиглобулиновые антитела (антивидовые, т. е. антитела против человеческих иммуноглобулинов), но меченные ферментом (ИФМ) либо изотопом (РИМ). Результаты реакции оценивают, как указано выше. В качестве контроля используют образцы заведомо положительные и заведомо отрицательные.

Предложены различные варианты иммуноферментного метода. Большое значение имеет вариант ИФМ, позволяющий осуществлять «захват» антител, относящихся к IgМ. Этот метод позволяет более точно производить серологическую диагностику, так как основан на обнаружении специфических иммуноглобулинов IgМ, которые появляются в первую очередь при встрече с возбудителем.   


 

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать

28595. Методология проектного управления инновациями. Жизненный цикл инновационного проекта 31.5 KB
  Жизненный цикл инновационного проекта Инновационный проект это порядок определения целей и задач для создания или внедрения отдельного инновационного продукта. Инновационный процесс включает организационные производственные технологические коммерческие и другие мероприятия приводящие к внедрению и распространению инноваций. Таким образом инновационный проект можно определить как комплекс взаимосвязанных программ обеспечивающих эффективное достижение конкретной инновационной цели согласованных по ресурсам срокам исполнителям и...
28596. Перспективные инновационные проекты в социальнокультурном сервисе и туризме 32 KB
  Перспективные инновационные проекты в социальнокультурном сервисе и туризме Планирование составляет один из основных элементов системы управления инновационной деятельностью. Инновационные проекты характеризуются высокой неопределенностью на всех стадиях осуществления они не застрахованы от появления в любой момент более перспективной новинки. Даже успешно прошедшие стадию внедрения в производство проекты могут быть не приняты рынком и их производство должно быть прекращено. Инновационные проекты подразделяются на исследовательские и...
28597. Финансирование инновационных проектов 29.5 KB
  Его обобщающим показателем выступает финансовый риск предпринимателя и инвесторов который характеризует возможные потери в случае неудачного независимо от причины завершения финансируемого проекта. Риск в инновационной деятельности увеличивается с локализацией инновационного проекта. Основные риски связанные с инновационными проектами можно подразделить на следующие виды: экономический связанный с финансированием и калькуляцией проекта принятием и реализацией экономических решений; оригинальности обусловленный возможностью...
28599. Социально-культурный сервис и туризм как мобильно развивающаяся область сервиса 26.5 KB
  Это требует выполнения всех специфических требований диктуемых потребности рынка и безопасности туризма. При этом следует учитывать особенности сервисного обслуживания и тенденции развития международного туризма. Предметом мобильно развивающегося сервиса и туризма явся высокие технологии. Главная цель концепции мобильно развивающегося сервиса и туризма создание современного высокоэффективного и конкурентоспособного тур.
28600. Оператор выбора case 13.92 KB
  Условный оператор удобен в тех случаях, когда необходимо проверить 1-2-3 варианта. При большем числе получается слишком громоздкая и неудобная для восприятия конструкция из множества вложенных инструкций. Скажем, если требуется проверить 5 значений переменной x, то получим такую конструкцию: